際際滷

際際滷Share a Scribd company logo

Cloning of the gene encoding human interleukin-2 in Echerichia coli

Nguyen Ngoc Quy
Nguyen Ngoc Quy
1 of 20
T畉O DNG GENE M HA INTERLEUKIN-2 C畛A NG働畛I TRONG Escherichia coli N V畛 TH畛C T畉P: B畛 MN CHSH PHN T畛 V MI TR働畛NG VI畛N CNG NGH畛 SINH H畛C V TH畛C PH畉M BO CO TH畛C T畉P T畛T NGHI畛P GVHD: Th.S L棚 Tr畉m Ngh挑a Th動. CBHD: Nguy畛n Th畛 M畛 Trinh. SVTH: Nguy畛n Ng畛c Quy. L畛p: HSH4. MSSV: 08264921.
N畛I DUNG 畉T V畉N 畛 T畛NG QUAN V畉T LI畛U V PH働NG PHP K畉T QU畉 V BI畛N LU畉N K畉T LU畉N V 畛 NGH畛
畉T V畉N 畛 Interleukin-2 k鱈ch th鱈ch t畛 d嘆ng t畉 bo T Vai tr嘆 quan tr畛ng v畛i d嘆ng t畉 bo kh叩c nh動 B, t畉 bo gi畉t t畛 nhi棚n (NK) 達 動畛c ch畛ng minh c坦 hi畛u qu畉 trong i畛u tr畛 b畛nh ung th動 ph畛i, b畉ch c畉u, bu畛ng tr畛ng S畛 d畛ng trong vi畛c ch畛a tr畛 ng動畛i nhi畛m virus HIV Nm 1992, FDA 達 cho ph辿p s畛 d畛ng IL-2 t叩i t畛 h畛p trong vi畛c ch畛a tr畛 ung th動, b畛nh l但y nhi畛m do virus
畉T V畉N 畛 V畛i t狸nh h狸nh th畛c ti畛n nh動 tr棚n, ch炭ng t担i b動畛c 畉u t畉o d嘆ng gene m達 h坦a interleukin-2 c畛a ng動畛i trong E.coli N畛i dung th畛c t畉p bao g畛m: C畉u tr炭c vector t叩i t畛 h畛p pBluescript/il-2 T畉o d嘆ng t畉 bo E.coli DH5留 pBluescript/il-2
T畛NG QUAN Protein interleukin-2 (IL-2) Gene IL-2 C畉u tr炭c protein IL-2 K畛 thu畉t t畉o d嘆ng 畛 E.coli Gi畛i thi畛u v畛 t畉o d嘆ng C叩c b動畛c c董 b畉n c畛a k畛 thu畉t t畉o d嘆ng
IL-2 動畛c Morgan ph叩t hi畛n l畉n 畉u ti棚n nm 1975 畛 d嘆ng t畉 bo t畛y x動董ng ng動畛i. Nm 1981, c叩c 畉c i畛m v畛 s畛 glycosyl h坦a m畛i 動畛c ph叩t hi畛n. IL-2 動畛c t叩ch chi畉t v 動畛c t畉o d嘆ng gene cho protein nm 1983 v c畉u tr炭c tinh th畛 動畛c x叩c 畛nh nm 1992. Protein interleukin-2
Gene m達 h坦a IL-2 n畉m tr棚n c叩nh di nhi畛m s畉c th畛 s畛 4 gi畛a v畛 tr鱈 26-27 Ch畛a ba intron, m hai trong ba intron ny c坦 畛 di l畛n Gene IL-2
C畉u tr炭c protein IL-2 Protein IL-2 g畛m c坦 153 amino acid Tr畉i qua qu叩 tr狸nh bi畉n 畛i sau d畛ch m達, protein IL-2 b畛 c畉t 20 amino acid v t畉o thnh IL-2 hon ch畛nh, c坦 ho畉t t鱈nh, ch畛a 133 amino acid Tr畛ng l動畛ng ph但n t畛 kho畉ng 15 kDa
C畉u tr炭c protein IL-2 IL-2 c坦 d畉ng h狸nh c畉u v畛i 4 chu畛i xo畉n 留 v kh担ng c坦 c畉u tr炭c d畉ng phi畉n 硫 C畉u tr炭c ba chi畛u ph但n t畛 interleukin-2 畛 ng動畛i
Gi畛i thi畛u v畛 t畉o d嘆ng T畉o d嘆ng l qu叩 tr狸nh h狸nh thnh m畛t d嘆ng t畉 bo ch畛, g畛m nh畛ng t畉 bo gi畛ng nhau, ch畛a m畛t hay nhi畛u b畉n sao c畛a DNA m畛c ti棚u, 畛 d畉ng t叩i t畛 h畛p v畛i m畛t ph動董ng ti畛n mang gene (g畛i l vector) M畛c 鱈ch: S畛 l動畛ng l畛n v tinh s畉ch c叩c o畉n DNA m畛c ti棚u Thu nh畉n d嘆ng t畉 bo c坦 kh畉 nng bi畛u hi畛n gene m畛c ti棚u
B動畛c c董 b畉n trong t畉o d嘆ng 1 Ch畛n v x畛 l箪 vector C畉t b畉ng m畛t RE 2 Chu畉n b畛 DNA m畛c ti棚u X畛 l箪 DNA cho ph湛 h畛p v畛i hai 畉u m畛i c畉t c畛a vector 3 T畉o vector t叩i t畛 h畛p Tr畛n chung vector v DNA m畛c ti棚u 達 x畛 l箪 v畛i enzyme ligase 4 Chuy畛n vector t叩i t畛 h畛p vo t畉 bo ch畛 5 Ph叩t hi畛n v ch畛n l畛c d嘆ng t畉 bo mang vector t叩i t畛 h畛p
V畉T LI畛U V PH働NG PHP Ch畛ng vi sinh v畉t Ch畛ng Escherichia coli DH5留 {F-, 80lacZM15, recA1, endA1, hsdR17(rk-, mk+), phoA, supE44, -, thi-1, gyrA96, relA1} d湛ng 畛 d嘆ng h坦a. DNA v h畛 vector Plasmid pIDT-il2 ch畛a gene m達 h坦a interleukin-2 d湛ng lm khu担n 畛 nh但n gene. Plasmid pBluescript KS II 動畛c s畛 d畛ng lm vector d嘆ng h坦a.
V畉T LI畛U V PH働NG PHP Plasmid pBluescript KS II mang gene kh叩ng kh叩ng sinh Amp, gene lacZ m達 h坦a cho enzyme 硫-galactosidase. V湛ng MCS 動畛c ch竪n vo gi畛a gene lacZ.
Quy tr狸nh t畉o d嘆ng gene il-2 vo plasmid pBluescript SK II (+)
K畉T QU畉 V BI畛N LU畉N Chu畉n b畛 ngu畛n gene il-2 Gi畉ng 1, Thang chu畉n 1kb plus Gi畉ng 2, S畉n ph畉m PCR o畉n gene il-2 v畛i c畉p m畛i IL2R v IL2F
K畉T QU畉 V BI畛N LU畉N Chu畉n b畛 plasmid vector pBluescript KS II (+) Gi畉ng 1, Thang chu畉n 1kb plus; Gi畉ng 2, S畉n ph畉m c畉t ki畛m tra b畉ng enzyme EcoRV; Gi畉ng 3, Plasmid pBluescript KS II (+) t叩ch chi畉t
K畉T QU畉 V BI畛N LU畉N T畉o d嘆ng t畉 bo E.coli DH5留 mang vector t叩i t畛 h畛p pBluescript/il-2 K畉t qu畉 bi畉n n畉p s畉n ph畉m n畛i pBluescript/il-2 vo t畉 bo kh畉 n畉p E.coli DH5留 1, 挑a th鱈 nghi畛m 2, 挑a 畛i ch畛ng
K畉T LU畉N V 畛 NGH畛 K畉t lu畉n V畛i c叩c k畉t qu畉 th鱈 nghi畛m 達 動畛c tr狸nh by trong ph畉n k畉t qu畉 - bi畛n lu畉n. C坦 th畛 動a ra c叩c k畉t lu畉n sau: Khu畉ch 畉i 動畛c o畉n gene m達 h坦a cho protein IL-2 t畛 plasmid pIDT-il2. C畉u tr炭c vector t叩i t畛 h畛p pBluescript/il-2 v b動畛c 畉u sng l畛c 動畛c nh畛ng plasmid t叩i t畛 h畛p tr棚n m担i tr動畛ng LB-Amp-Xgal.
K畉T LU畉N V 畛 NGH畛 畛 ngh畛 Ti畉p t畛c ki畛m tra d嘆ng t畉 bo t叩i t畛 h畛p mang gene il-2 b畉ng ph動董ng ph叩p PCR khu畉n l畉c 畛 n但ng cao m畛c 畛 sng l畛c. Ki畛m tra d嘆ng t畉 bo t叩i t畛 h畛p mang gene il-2 b畉ng ph動董ng ph叩p gi畉i tr狸nh t畛 畛 畉m b畉o m畛c 畛 ch鱈nh x叩c. Bi畉n n畉p vector t叩i t畛 h畛p pBluescript/il-2 vo ch畛ng bi畛u hi畛n E.coli BL21 (DE3).
Cloning of the gene encoding human interleukin-2 in Echerichia coli

More Related Content

Cloning of the gene encoding human interleukin-2 in Echerichia coli

  • 1. T畉O DNG GENE M HA INTERLEUKIN-2 C畛A NG働畛I TRONG Escherichia coli N V畛 TH畛C T畉P: B畛 MN CHSH PHN T畛 V MI TR働畛NG VI畛N CNG NGH畛 SINH H畛C V TH畛C PH畉M BO CO TH畛C T畉P T畛T NGHI畛P GVHD: Th.S L棚 Tr畉m Ngh挑a Th動. CBHD: Nguy畛n Th畛 M畛 Trinh. SVTH: Nguy畛n Ng畛c Quy. L畛p: HSH4. MSSV: 08264921.
  • 2. N畛I DUNG 畉T V畉N 畛 T畛NG QUAN V畉T LI畛U V PH働NG PHP K畉T QU畉 V BI畛N LU畉N K畉T LU畉N V 畛 NGH畛
  • 3. 畉T V畉N 畛 Interleukin-2 k鱈ch th鱈ch t畛 d嘆ng t畉 bo T Vai tr嘆 quan tr畛ng v畛i d嘆ng t畉 bo kh叩c nh動 B, t畉 bo gi畉t t畛 nhi棚n (NK) 達 動畛c ch畛ng minh c坦 hi畛u qu畉 trong i畛u tr畛 b畛nh ung th動 ph畛i, b畉ch c畉u, bu畛ng tr畛ng S畛 d畛ng trong vi畛c ch畛a tr畛 ng動畛i nhi畛m virus HIV Nm 1992, FDA 達 cho ph辿p s畛 d畛ng IL-2 t叩i t畛 h畛p trong vi畛c ch畛a tr畛 ung th動, b畛nh l但y nhi畛m do virus
  • 4. 畉T V畉N 畛 V畛i t狸nh h狸nh th畛c ti畛n nh動 tr棚n, ch炭ng t担i b動畛c 畉u t畉o d嘆ng gene m達 h坦a interleukin-2 c畛a ng動畛i trong E.coli N畛i dung th畛c t畉p bao g畛m: C畉u tr炭c vector t叩i t畛 h畛p pBluescript/il-2 T畉o d嘆ng t畉 bo E.coli DH5留 pBluescript/il-2
  • 5. T畛NG QUAN Protein interleukin-2 (IL-2) Gene IL-2 C畉u tr炭c protein IL-2 K畛 thu畉t t畉o d嘆ng 畛 E.coli Gi畛i thi畛u v畛 t畉o d嘆ng C叩c b動畛c c董 b畉n c畛a k畛 thu畉t t畉o d嘆ng
  • 6. IL-2 動畛c Morgan ph叩t hi畛n l畉n 畉u ti棚n nm 1975 畛 d嘆ng t畉 bo t畛y x動董ng ng動畛i. Nm 1981, c叩c 畉c i畛m v畛 s畛 glycosyl h坦a m畛i 動畛c ph叩t hi畛n. IL-2 動畛c t叩ch chi畉t v 動畛c t畉o d嘆ng gene cho protein nm 1983 v c畉u tr炭c tinh th畛 動畛c x叩c 畛nh nm 1992. Protein interleukin-2
  • 7. Gene m達 h坦a IL-2 n畉m tr棚n c叩nh di nhi畛m s畉c th畛 s畛 4 gi畛a v畛 tr鱈 26-27 Ch畛a ba intron, m hai trong ba intron ny c坦 畛 di l畛n Gene IL-2
  • 8. C畉u tr炭c protein IL-2 Protein IL-2 g畛m c坦 153 amino acid Tr畉i qua qu叩 tr狸nh bi畉n 畛i sau d畛ch m達, protein IL-2 b畛 c畉t 20 amino acid v t畉o thnh IL-2 hon ch畛nh, c坦 ho畉t t鱈nh, ch畛a 133 amino acid Tr畛ng l動畛ng ph但n t畛 kho畉ng 15 kDa
  • 9. C畉u tr炭c protein IL-2 IL-2 c坦 d畉ng h狸nh c畉u v畛i 4 chu畛i xo畉n 留 v kh担ng c坦 c畉u tr炭c d畉ng phi畉n 硫 C畉u tr炭c ba chi畛u ph但n t畛 interleukin-2 畛 ng動畛i
  • 10. Gi畛i thi畛u v畛 t畉o d嘆ng T畉o d嘆ng l qu叩 tr狸nh h狸nh thnh m畛t d嘆ng t畉 bo ch畛, g畛m nh畛ng t畉 bo gi畛ng nhau, ch畛a m畛t hay nhi畛u b畉n sao c畛a DNA m畛c ti棚u, 畛 d畉ng t叩i t畛 h畛p v畛i m畛t ph動董ng ti畛n mang gene (g畛i l vector) M畛c 鱈ch: S畛 l動畛ng l畛n v tinh s畉ch c叩c o畉n DNA m畛c ti棚u Thu nh畉n d嘆ng t畉 bo c坦 kh畉 nng bi畛u hi畛n gene m畛c ti棚u
  • 11. B動畛c c董 b畉n trong t畉o d嘆ng 1 Ch畛n v x畛 l箪 vector C畉t b畉ng m畛t RE 2 Chu畉n b畛 DNA m畛c ti棚u X畛 l箪 DNA cho ph湛 h畛p v畛i hai 畉u m畛i c畉t c畛a vector 3 T畉o vector t叩i t畛 h畛p Tr畛n chung vector v DNA m畛c ti棚u 達 x畛 l箪 v畛i enzyme ligase 4 Chuy畛n vector t叩i t畛 h畛p vo t畉 bo ch畛 5 Ph叩t hi畛n v ch畛n l畛c d嘆ng t畉 bo mang vector t叩i t畛 h畛p
  • 12. V畉T LI畛U V PH働NG PHP Ch畛ng vi sinh v畉t Ch畛ng Escherichia coli DH5留 {F-, 80lacZM15, recA1, endA1, hsdR17(rk-, mk+), phoA, supE44, -, thi-1, gyrA96, relA1} d湛ng 畛 d嘆ng h坦a. DNA v h畛 vector Plasmid pIDT-il2 ch畛a gene m達 h坦a interleukin-2 d湛ng lm khu担n 畛 nh但n gene. Plasmid pBluescript KS II 動畛c s畛 d畛ng lm vector d嘆ng h坦a.
  • 13. V畉T LI畛U V PH働NG PHP Plasmid pBluescript KS II mang gene kh叩ng kh叩ng sinh Amp, gene lacZ m達 h坦a cho enzyme 硫-galactosidase. V湛ng MCS 動畛c ch竪n vo gi畛a gene lacZ.
  • 14. Quy tr狸nh t畉o d嘆ng gene il-2 vo plasmid pBluescript SK II (+)
  • 15. K畉T QU畉 V BI畛N LU畉N Chu畉n b畛 ngu畛n gene il-2 Gi畉ng 1, Thang chu畉n 1kb plus Gi畉ng 2, S畉n ph畉m PCR o畉n gene il-2 v畛i c畉p m畛i IL2R v IL2F
  • 16. K畉T QU畉 V BI畛N LU畉N Chu畉n b畛 plasmid vector pBluescript KS II (+) Gi畉ng 1, Thang chu畉n 1kb plus; Gi畉ng 2, S畉n ph畉m c畉t ki畛m tra b畉ng enzyme EcoRV; Gi畉ng 3, Plasmid pBluescript KS II (+) t叩ch chi畉t
  • 17. K畉T QU畉 V BI畛N LU畉N T畉o d嘆ng t畉 bo E.coli DH5留 mang vector t叩i t畛 h畛p pBluescript/il-2 K畉t qu畉 bi畉n n畉p s畉n ph畉m n畛i pBluescript/il-2 vo t畉 bo kh畉 n畉p E.coli DH5留 1, 挑a th鱈 nghi畛m 2, 挑a 畛i ch畛ng
  • 18. K畉T LU畉N V 畛 NGH畛 K畉t lu畉n V畛i c叩c k畉t qu畉 th鱈 nghi畛m 達 動畛c tr狸nh by trong ph畉n k畉t qu畉 - bi畛n lu畉n. C坦 th畛 動a ra c叩c k畉t lu畉n sau: Khu畉ch 畉i 動畛c o畉n gene m達 h坦a cho protein IL-2 t畛 plasmid pIDT-il2. C畉u tr炭c vector t叩i t畛 h畛p pBluescript/il-2 v b動畛c 畉u sng l畛c 動畛c nh畛ng plasmid t叩i t畛 h畛p tr棚n m担i tr動畛ng LB-Amp-Xgal.
  • 19. K畉T LU畉N V 畛 NGH畛 畛 ngh畛 Ti畉p t畛c ki畛m tra d嘆ng t畉 bo t叩i t畛 h畛p mang gene il-2 b畉ng ph動董ng ph叩p PCR khu畉n l畉c 畛 n但ng cao m畛c 畛 sng l畛c. Ki畛m tra d嘆ng t畉 bo t叩i t畛 h畛p mang gene il-2 b畉ng ph動董ng ph叩p gi畉i tr狸nh t畛 畛 畉m b畉o m畛c 畛 ch鱈nh x叩c. Bi畉n n畉p vector t叩i t畛 h畛p pBluescript/il-2 vo ch畛ng bi畛u hi畛n E.coli BL21 (DE3).