31hr
- 1. Laboratorijska oprema za kulturu stanica Potrebne zalihe: cell culture vessels (flasks, Petri dishes, multi-well plates) pipettes and motorized pipette controller syringe and needles plastic centrifuge tubes cryovials, cryo-boxes, filters for syringes and bottles, waste containers, deionized water, laboratory glass dishes disinfectants (isopropyl or 70 % ethanol, Na-hypochlorite)
- 2. Work in aseptic conditions Figure 8. Layout of work area. An example of proper arrangement of working area allowing laminar airflow. During manipulation, in the middle of working surface, cell culture vessels are placed while pipets are set on the left and motorized pipette controller is on the right.
- 3. Osnovni protokoli za staninu subkultivaciju Subkultura adherentnih stanica Vrijeme izmeu ponovnog presaivanja (prolaz) varira s staninom linijom i brzinom rasta Izvadite i bacite potro邸eni medij za kulturu stanica iz posude za kulturu Odvojite stanice od proteolitikih enzima (tripsin) i / ili mehanikog (strugaa) iz posude za kulturu Tripsin neutralizira Prikupljanje odvojenih stanica svje転im medijem Nastavak uzgoja stanica u novoj posudi dok ne dostignu konfluenciju od 80 do 100%
- 4. Osnovni protokoli za staninu subkultivaciju Subkultura suspenzijskih staninih linija Stanice s namjerom stvaranja agregata ili nakupina moraju biti prekinute u suspenziji pojedinanih stanica za daljnju kultivaciju ili u svrhu brojanja stanica Pregledajte stanice i procijenite stanje Dodajte svje転i medij za dobivanje odgovarajue gustoe sjetve Nastavak kultivacije stanica u novoj posudi Ponovite svaka 2 do 3 dana
- 5. Osnovni protokoli za staninu subkultivaciju Stanice suspenzije Adherentne stanice Lak邸e za kulturu, mo転e se razrijediti bez uklanjanja svih starih medija Vi邸e koraka potrebnih za kulturu zahtijevaju potpunu promjenu medija Nemojte zahtijevati mehaniku ili kemijsku disocijaciju Zahtijevaju tripsinizaciju u subkulturi, stresna je za stanice Nije lako odrediti konfluenciju, zahtijevaju dnevni broj stanica Mo転e se lako pregledati pod mikroskopom kako bi se odredila konfluencija Rast ogranien koncentracijom stanica Rast ogranien povr邸inom Tablica 4. Usporedba subkultiviranja suspenzija i adherentnih staninih kultura
- 6. Osnovni protokoli za subkultivaciju stanica Krioprezervacija stanica i tijek vue Uklonite medij centrifugiranjem Sakupite stanice u hladne boice Dodajte hladne medije i krio- za邸titne tvari Priprema stanica za zamrzavanje Polako stanice zamrzavaju na temperaturi od -1 属 C / min u hladnjaku Zamrzavanje stanica Prenesite boice na -80 属 C ili / i tekui du邸ik Dugorono pohranjivanje Vuenje i oporavak stanica Blago zagrijati u rukama Razrijediti srednjom Centrifugom i baciti mediju Dodati svje転i medij i prenijeti u posudu za kulturu stanica
- 7. Cell culture applications Primjena kultura stanica Istra転ivanje raka virologiju Ispitivanje toksinosti Proizvodnja cjepiva Genetski modificirani proteinZamjena tkiva ili organa Genetiko in転enjerstvo Genetska terapija Probiranje lijekova i razvoj Modelni sustav