際際滷

際際滷Share a Scribd company logo

Bai vsvud thuyet trinh

Download as PPT, PDF
T
Ti Hu畛nh T畉n

bi vi sinh ung d畛ng

1 of 39
Downloaded 62 times
畛 TI: S畉n xu畉t ch畉 ph畉m Trichoderma, Bacillus d湛ng ki畛m so叩t sinh h畛c Fusarium sp. v Pythium sp. v k鱈ch th鱈ch sinh tr動畛ng 畛 c但y 畉u. NHM 7 BI BO CO VI SINH 畛NG D畛NG
Bai vsvud thuyet trinh
T畛ng Quan Bacillus. L vi khu畉n h狸nh que, Gram d動董ng, c坦 kh畉 nng chuy畛n 畛ng. Ph畉n l畛n c坦 l畛i cho con ng動畛i. Hi畉u kh鱈 ho畉c k畛 kh鱈 t湛y nghi H狸nh thnh n畛i bo t畛. Nhi畛t 畛 t畛i 動u: 30 - 45 畛. pH: 2- 11 C坦 kh畉 nng g但y b畛nh cho c担n tr湛ng.
Trichoderma: Thu畛c nghnh n畉m Mycota. Hi畛n di畛n nhi畛u trong 畉t. pH: 4- 8, hi畉u kh鱈. Sinh s畉n v担 t鱈nh b畉ng bo t畛, m畛t s畛 sinh s畉n h畛u t鱈nh. Ti棚u di畛t, kh畛ng ch畉, ngn ng畛a c叩c lo畉i n畉m b畛nh: Fusarium, Pythium... T畉o i畛u ki畛n t畛t cho vi sinh v畉t c畛 畛nh 畉m. k鱈ch th鱈ch tng tr動畛ng v ph畛c h畛i b畛 r畛 c但y tr畛ng. Ph但n gi畉i t畛t c叩c ch畉t x董 , chitin, lignin... gi炭p cho c但y h畉p th畛 d畛 dng.
N畉m Fusarium sp. L m畛t trong nh畛ng lo畉i n畉m g但y h畉i nhi畛u nh畉t cho c但y tr畛ng. Sinh 畛c t畛 c坦 t鱈nh 畛c cao. ph畛 bi畉n trong 畉t, l動u t畛n d畉ng bo t畛 ho畉c khu畉n ty. G但y b畛nh ng畉n m畉ch, th畛i r畛 th畛i th但n, th畛i h畉t, tr叩i. T畉n c担ng vo b畛 r畛. g但y h畉i cho 畉u, c chua, cam qu箪t, khoai t但y.
Pythium sp. L m畛t vsv gi畛ng v畛i n畉m. Ph畛 k箪 ch畛 r畛ng. Sinh s畉n v担 t鱈nh b畉ng bo t畛 畛ng. G但y tn l畛i v ch畉t r畉p 畛 c但y con( do 畉m 動畛t). G但y th畛i c畛 ( khoai t但y, c r畛t..). G但y th畛i c畛 v qu畉 : l m畛t b畛nh ch畛 y畉u 畛 L畉c.
Nguy棚n t畉c ph但n l畉p: - Gieo c畉y vi khu畉n 達 pha lo達ng tr棚n m担i tr動畛ng dinh d動畛ng 畉c tr動ng (2% th畉ch hay c嘆n g畛i l agar). - Nu担i d動畛ng trong i畛u ki畛n th鱈ch h畛p cho m畛c c叩c khu畉n l畉c t叩ch bi畛t nhau. - C畉y t叩ch t畛 khu畉n l畉c m畛c t叩ch bi畛t sang 畛ng m担i tr動畛ng dinh d動畛ng th畉ch nghi棚ng 畛 thu nh畉n ch畛ng vi khu畉n thu畉n khi畉t (do Robert Koch 畛 ra). PHN L畉P
PHN L畉P BACILLUS
1. M畉u: N畛t s畉n 畉u ph畛ng c坦 k鱈ch th動畛c l畛n, c坦 mu 畛 h畛ng. R畛a s畉ch, ng但m c畛n 5 ph炭t, r畛a n動畛c, nghi畛n n叩t b畉ng kim m滴i m叩c, b畛 sung th棚m 3ml n動畛c c畉t ta thu 動畛c dung d畛ch ch畛a vi khu畉n tr棚n. 議畉t: l畉y 畉t g畉n t畉ng m畉t, kh担ng l畉y 畛 ph畉n 畉t s但u. 2. Pha lo達ng m畉u: C但n 10g 畉t nghi畛n trong c畛i s畛 (達 s畉y ti畛t tr湛ng) h嘆a v畛i 90ml n動畛c mu畛i sinh l箪 ch畛a s畉n trong b狸nh tam gi叩c 200ml v担 tr湛ng. L畉c 畛u tr棚n m叩y l畉c t畛c 畛 150v/p trong 30 ph炭t. un s担i c叩ch th畛y 15 ph炭t thu 動畛c huy畛n d畛ch 10-1, L畉c 畛u huy畛n d畛ch r畛i d湛ng micropipet h炭t v担 tr湛ng 1ml huy畛n d畛ch vo 畛ng nghi畛m ch畛a s畉n 90ml n動畛c mu畛i sinh l箪 達 ti畛t tr湛ng 畛 動畛c 畛 pha lo達ng 10-2, t動董ng t畛 thu 動畛c c叩c n畛ng 畛 10-3, 10-4,
3.C畉y ph但n l畉p: C畉y trang c叩c dung d畛ch thu 動畛c tr棚n th畉ch 挑a NA nu担i trong t畛 畉m 畛 370C trong 24h. Ch畛n khu畉n l畉c nghi ng畛 ti畉n hnh nhu畛m Gram v th畛 c叩c ph畉n 畛ng sinh h坦a. 4. X叩c 畛nh vi khu畉n Bacillus em khu畉n l畉c nghi ng畛 i nhu畛m Gram v xem d動畛i k鱈nh hi畛n vi. N畉u th畉y c坦 畉c i畛m c畛a Bacillus th狸 c畉y truy畛n khu畉n l畉c nghi ng畛 vo m担i tr動畛ng th畉ch nghi棚ng NA 畛 gi畛 gi畛ng th畛 test sinh h坦a ti畉p theo. Gi叩m 畛nh 畉c t鱈nh sinh h坦a: catalaza (+), nitrate (+), VP (+), citrate (+), methyred (+), maltose (-).
PHN L畉P TRICHODERMA
1. M畉u: 畉t: l畉y t畛 c叩c ru畛ng tr畛ng 畉u. Lm m畛n 畉t qua r但y 1mm. 2. Pha lo達ng m畉u: C但n 1g 畉t m畛n h嘆a vo 100ml n動畛c sinh l箪 c坦 0,5% tween 80. 畉t l棚n m叩y l畉c trong 30 ph炭t v畛i t畛c 畛 110v/p. H嘆a lo達ng 畛 c叩c n畛ng 畛 kh叩c nhau.
3. Ph但n l畉p m畉u: em c叩c dung d畛ch 動畛c pha lo達ng 畛 c叩c n畛ng 畛 kh叩c nhau c畉y tr棚n m畛i tr動畛ng th畉ch. Ph但n l畉p c叩c khu畉n l畉c i畛n h狸nh c畛a Trichoderma, lm thu畉n c叩c d嘆ng Trichoderma. 4. Th畛 畉nh h動畛ng 畛c t畛 tr棚n c但y tr畛ng: T畉m h畉t v phun l棚n c但y, khi th畉y kh担ng c坦 畉nh h動畛ng x畉u v畛i c但y m畛i, th畛c hi畛n c叩c th鱈 nghi畛m ti畉p theo nh動 畛nh danh, x叩c 畛nh kh畉 nng 畛c ch畉 ph叩t tri畛n c叩c vi sinh v畉t g但y b畛nh c但y.
畛NH TNH C叩c b動畛c th畛c hi畛n: Chu畉n b畛 d畛ch khu畉n: Vi khu畉n 動畛c h嘆a vo n動畛c mu畛i sinh l箪 n畛ng 畛 0,85% 畛 c坦 m畉t 畛 kho畉ng: 1-2.108 CFU/ml). Chu畉n b畛 d畛ch n畉m (Fusarium sp, Pythium sp, Trichoderma): N畉m m畛c 動畛c pha trong n動畛c mu畛i sinh l箪 0,85% 畛 c坦 m畉t 畛 1 - 2.106 tb/ml (畉m b畉ng bu畛ng 畉m h畛ng c畉u).
M担i tr動畛ng th畛 畛nh t鱈nh: NA 37oC/24h. N畉m g但y b畛nh 動畛c ho畉t h坦a tr棚n m担i tr動畛ng PDA (Potato dextrose agra) 37oC/3 ngy (畛ng th畉ch nghi棚ng).
1. Th畛 kh畉 nng 畛i kh叩ng n畉m g但y b畛nh c畛a c叩c ch畛ng Bacillus. Nh畉mch畛n ra ch畛ng c坦 ho畉t t鱈nh m畉nh nh畉t. Ti畉n hnh th畛 nghi畛m 畛i kh叩ng: H炭t 10袖l d畛ch n畉m (Fusarium sp v Pythium sp) v d畛ch khu畉n (Bacillus) c畉y 畛i x畛ng nhau qua 動畛ng k鱈nh 挑a m担i tr動畛ng PGA. Kho畉ng c叩ch gi畛a ch炭ng l 3cm. Ti畉n hnh l畉p l畉i th鱈 nghi畛m nhi畛u l畉n 畛 cho k畉t qu畉 ch鱈nh x叩c.
Sau khi c畉y: 畛 畛 37oC trong 3 ngy. 仰叩nh gi叩 k畉t qu畉: xem ch畛ng Bacillus no kh叩ng n畉m m畉nh nh畉t, ch畛n ch畛ng Bacillus 坦.
2. Th畛 kh畉 nng kh叩ng n畉m c畛a Trichoderma. M担i tr動畛ng th畛 畛i kh叩ng: SA( Sabouraud agar). N畉m g但y b畛nh c滴ng 動畛c nu担i tr棚n m担i tr動畛ng th鱈ch h畛p 畛 ch炭ng ph叩t tri畛n t畛t.
Ti畉n hnh th畛 nghi畛m 畛i kh叩ng: H炭t 10袖l d畛ch n畉m Trichoderma v 10袖l d畛ch n畉m g但y b畛nh (Fusarium sp. v Pythium sp.) c畉y 畛i x畛ng nhau qua 動畛ng k鱈nh 挑a, c叩ch m辿p 挑a petri 1-1.5cm. Ti畉n hnh l畉p l畉i th鱈 nghi畛m nhi畛u l畉n. Th鱈 nghi畛m 動畛c quan s叩t 2 ngy 1 l畉n, sau 3 ngy ti畉n hnh ch畛n l畛c c叩c ch畛ng kh叩ng b畛nh m畉nh nh畉t.
Trichoderma kh叩ng Fusaryum
a. 叩nh gi叩 kh畉 nng kh叩ng n畉m: Ph畉n n畉m Trichoderma ph叩t tri畛n bao ph畛 qua ph畉n n畉m g但y h畉i. Ph畉n n畉m g但y h畉i b畛 bo m嘆n d畉n 畛 m辿p khu畉n l畉c. Ph畉n n畉m Trichoderma ph叩t tri畛n v kh畛ng ch畉 lm cho n畉m g但y h畉i kh担ng ph叩t tri畛n 動畛c.
b. 叩nh gi叩 m畛c 畛i kh叩ng c畛a n畉m: Kh叩ng m畉nh: N畉m Trichoderma t畉n c担ng v ph叩 h畛y hon ton n畉m g但y h畉i, k鱈 hi畛u: +++ Kh叩ng trung b狸nh: N畉m Trichoderma t畉n c担ng v ph叩 h畛y m畛t ph畉n n畉m g但y h畉i, k鱈 hi畛u: ++ Kh叩ng y畉u: N畉m Trichoderma ngn ch畉n s畛 ph叩t tri畛n c畛a n畉m g但y h畉i, k鱈 hi畛u: + Kh担ng kh叩ng: n畉m g但y h畉i g畉n nh動 ph叩t tri畛n b狸nh th動畛ng, x但m nh畉p vo v湛ng ph叩t tri畛n c畛a n畉m, k鱈 hi畛u: Ch畛n ch畛ng Trichoderma kh叩ng n畉m m畉nh nh畉t.
3. Th畛 kh畉 nng k畉t h畛p c畛a n畉m Trichoderma v畛i ch畛ng Bacillus 達 動畛c ch畛n qua 畛nh t鱈nh. T畛 ch畛ng n畉m Trichoderma v ch畛ng Bacillus 達 動畛c ch畛n ra sau khi 畛nh t鱈nh ta ti畉n hnh th畛 kh畉 nng k畉t h畛p gi畛a ch炭ng. Chu畉n b畛 m担i tr動畛ng nu担i c畉y: PGA. Trichoderma v Bacillus 動畛c c畉y 畛i x畛ng nhau qua 動畛ng k鱈nh 挑a petri, kho畉ng c叩ch gi畛a ch炭ng l 3cm . Quan s叩t kh畉 nng k畉t h畛p gi畛a ch炭ng: Trichoderma v Bacillus c湛ng m畛c 動畛c tr棚n c湛ng m担i tr動畛ng: kh担ng 畛c ch畉 l畉n nhau. Trichoderma m畛c l畉n 叩c Bacillus ho畉c ng動畛c l畉i. 畛c ch畉 l畉n nhau. Ch畛n ra ch畛ng n畉m Trichoderma v ch畛ng Bacillus c坦 kh畉 nng k畉t h畛p nhau t畛t nh畉t.
畛NH L働畛NG Kh畉o s叩t ph畉n trm 畛c ch畉: C担ng th畛c t鱈nh ph畉n trm 畛c ch畉: 動畛ng k鱈nh 挑a 畛i ch畛ng - 動畛ng k鱈nh 挑a c畉y x 100% 動畛ng k鱈nh 挑a 畛i ch畛ng
N畉u % 畛c ch畉 cng l畛n th狸 kh畉 nng 畛c ch畉 c畛a Trichoderma v Bacillus cng m畉nh. Ng動畛i ta s畉 ch畛n nh畛ng n畉m c坦 % 畛c ch畉 l畛n nh畉t em th畛 nghi畛m Invivo.
III. TH畛 NGHI畛M INVIVO B動畛c 1: Chu畉n b畛. Vi khu畉n v n畉m: Vi khu畉n 動畛c tng sinh trong m担i tr動畛ng M畉t r畛. o OD L畛a ch畛n m畉t 畛 1 - 2.108 CFU/ml. N畉m tng sinh trong m担i tr動畛ng c叩m, m畉t c動a, sau 坦 em pha v畛i n動畛c mu畛i sinh l箪 0,85% 畛 畉t m畉t 畛 1 - 2.106 tb/ml. 畉t 達 kh畛 tr湛ng.
B動畛c 2: Th畛 nghi畛m. Ph動董ng ph叩p th畛c hi畛n th畛 nghi畛m Invivo. S畛 nghi畛m th畛c: Th畛c hi畛n 15 nghi畛m th畛c, m畛i nghi畛m th畛c l畉p l畉i 3 l畉n (t畛ng c畛ng c坦 45 nghi畛m th畛c).
Pythium sp Fusarium sp Pythium sp + Fusarium sp Kh担ng c畉y Kh担ng c畉y Kh担ng c畉y C畉y Trichoderma C畉y trichoderma C畉y Trichoderma C畉y c湛ng l炭c Ttrichoderma v Bacillus C畉y c湛ng l炭c Ttrichoderma v Bacillus C畉y c湛ng l炭c Ttrichoderma v Bacillus C畉y Trichoderma tr動畛c, Bacillus sau. C畉y Trichoderma tr動畛c, Bacillus sau. C畉y Trichoderma tr動畛c, Bacillus sau. C畉y Bacillus C畉y Bacillus C畉y Bacillus B畉ng: C叩c l担 th鱈 nghi畛m
Ph動董ng ph叩p tr畛ng th畛 nghi畛m: M畛i ch畉u cho vo 1kg 畉t (達 v担 tr湛ng), tr畛n 畛u v畛i d畛ch kho叩ng. B畛 sung n畉m, vi khu畉n vo ch畉u (2ml) nh動 c叩c l担 th鱈 nghi畛m. Tr畛ng 畛 m畛i ch畉u 10 h畉t 畉u, quan s叩t t畛 l畛 n畉y m畉m (畉m h畉t n畉y m畉m) v m畛c 畛 c畛 畛nh 畉m (s畛 n畛t s畉n). 叩nh gi叩 k畉t qu畉 th畛 nghi畛m: 叩nh gi叩 m畛c 畛 kh叩ng Fusaium sp. v Pythium sp. d畛a vo s畛 h畉t t畛 l畛 h畉t n畉y m畉m v s畛 n畛t s畉n tr棚n r畛 c但y.
Bai vsvud thuyet trinh
LN MEN CC B働畛C LN MEN B動畛c 1: Thi畉t l畉p m担i tr動畛ng d湛ng trong tng sinh gi畛ng s畉n xu畉t. S畛 d畛ng ph動董ng ph叩p l棚n men b畛 m畉t( l棚n men n畛i)
MI TR働畛NG LN MEN T畛I 働U HA CHO TRICHODESMA T畉o m担i tr動畛ng hi畉u kh鱈. T畉o m担i tr動畛ng c坦 pH 2-6( pH th鱈ch h畛p cho n畉m Trichoderma ti畉t ra Enzyme). M担i tr動畛ng c坦 畛 畉m cao. pH th鱈ch h畛p 畛 h狸nh thnh bo t畛 l 5-5,8 t湛y t畛ng m畛c pH m cho c叩c lo畉i bo t畛 kh叩c nhau Nhi畛t 畛 t畛i 動u l 25-300C Nhi畛t 畛 th鱈ch h畛p ti畉t Chitinase l 400C, Glucanase 畛 350C. Ngu畛n cacbon ch畛 y畉u l D-glucose, D-galatose, D- mantose, D-fructose.
MI TR働畛NG T畛I 働U HA BACILLUS S畛 d畛ng ph動董ng ph叩p l棚m men ch狸m( L棚n men b畛 s但u) Nhi畛t 畛 t畛i 動u : 550C PH t畛i 動u: 7-8. M担i tr動畛ng hi畉u kh鱈 ho畉c k畛 kh鱈 t湛y nghi.
B動畛c 2: Thanh tr湛ng m担i tr動畛ng, n畛i l棚n men v c叩c thi畉t b畛 k竪m theo. B動畛c 3: Nh但n sinh kh畛i 畛 l畛n, m畉nh v thu畉n 畛 cung c畉p cho c叩c b畛n l棚n men trong qu叩 tr狸nh s畉n xu畉t. B動畛c 4: Cung c畉p c叩c i畛u ki畛n t畛i 動u cho s畛 ph叩t tri畛n c畛a gi畛ng 畛 gi畛ng s畉n sinh s畉n ph畉m.
QU TRNH X畛 L SAU LN MEN Bao g畛m: T叩ch chi畉t v tinh ch畉 s畉n ph畉m thnh d畉ng th鱈ch h畛p cho m畛c 鱈ch nh畉t 畛nh. C叩c lo畉i s畉n ph畉m: Ton b畛 t畉 bo, Vaccine, Protein tr畛 li畛u, Kh叩ng th畛 董n d嘆ng..C叩c s畉n ph畉m kh叩c nhau 叩ng k畛 v畛 k鱈ch th動畛c ph但n t畛, thnh ph畉n h坦a h畛c, y棚u c畉u v畛 畛 tinh s畉ch... C畉n c叩c ph動董ng ph叩p kh叩c nhau 畛 thu h畛i v tinh s畉ch.
B動畛c 7: S畉y c畉 2 s畉n ph畉m 畛: 180oC/30 ph炭t, sau 坦 ph畛i tr畛n 2 s畉n ph畉m Trichoderma V Bacillus l畉i v畛i nhau. B動畛c 8: X畛 l箪 nh畛ng ch畉t th畉i t畉o ra trong qui tr狸nh.
i畛u ki畛n b畉o qu畉n ch畉 ph畉m Kh畉o s叩t th畛i gian b畉o qu畉n ch畉 ph畉m( th動畛ng l 6 th叩ng 畛i v畛i 2 ch畛ng tr棚n). V畛i i畛u ki畛n nhi畛t 畛 25 - 30oC (bao b狸 t畛t, n董i tho叩ng m叩t). Bo t畛( c畛a Bacillus) b畛n nhi畛t (8000C) v s畉n ph畉m 動畛c bo ch畉 d動畛i d畉ng bo t畛 tinh khi畉t 100% (>99,99%) S畉n ph畉m ch畛a bo t畛 c坦 th畛 b畉o qu畉n v担 th畛i h畉n 畛 nhi畛t 畛 ph嘆ng trong i畛u ki畛n 坦ng g坦i k鱈n hon ton.
i畛u ny kh担ng th畛 c坦 動畛c 畛 s畉n ph畉m probiotic c畛a sinh v畉t kh担ng c坦 kh畉 nng t畉o bo t畛, v鱈 d畛 nh動 c叩c Lactobacillus ang s畛 d畛ng kh叩 ph畛 bi畉n hi畛n nay. T狸m hi畛u tr棚n th畛 tr動畛ng xem 達 c坦 s畉n ph畉m no t動董ng t畛 kh担ng n畉u ch動a c坦 s畉n ph畉m no t動董ng t畛 th狸 ta ng k箪 b畉n quy畛n cho s畉n ph畉m.
N畉u S畉n ph畉m s畉n xu畉t ra 動畛c ch畛ng nh畉n b畉n quy畛n th狸 ch炭ng ta s畉 動a vo s畉n xu畉t c担ng nghi畛p v畛i quy m担 l畛n 畛 b叩n tr棚n th畛 tr動畛ng.

More Related Content

Bai vsvud thuyet trinh

  • 1. 畛 TI: S畉n xu畉t ch畉 ph畉m Trichoderma, Bacillus d湛ng ki畛m so叩t sinh h畛c Fusarium sp. v Pythium sp. v k鱈ch th鱈ch sinh tr動畛ng 畛 c但y 畉u. NHM 7 BI BO CO VI SINH 畛NG D畛NG
  • 3. T畛ng Quan Bacillus. L vi khu畉n h狸nh que, Gram d動董ng, c坦 kh畉 nng chuy畛n 畛ng. Ph畉n l畛n c坦 l畛i cho con ng動畛i. Hi畉u kh鱈 ho畉c k畛 kh鱈 t湛y nghi H狸nh thnh n畛i bo t畛. Nhi畛t 畛 t畛i 動u: 30 - 45 畛. pH: 2- 11 C坦 kh畉 nng g但y b畛nh cho c担n tr湛ng.
  • 4. Trichoderma: Thu畛c nghnh n畉m Mycota. Hi畛n di畛n nhi畛u trong 畉t. pH: 4- 8, hi畉u kh鱈. Sinh s畉n v担 t鱈nh b畉ng bo t畛, m畛t s畛 sinh s畉n h畛u t鱈nh. Ti棚u di畛t, kh畛ng ch畉, ngn ng畛a c叩c lo畉i n畉m b畛nh: Fusarium, Pythium... T畉o i畛u ki畛n t畛t cho vi sinh v畉t c畛 畛nh 畉m. k鱈ch th鱈ch tng tr動畛ng v ph畛c h畛i b畛 r畛 c但y tr畛ng. Ph但n gi畉i t畛t c叩c ch畉t x董 , chitin, lignin... gi炭p cho c但y h畉p th畛 d畛 dng.
  • 5. N畉m Fusarium sp. L m畛t trong nh畛ng lo畉i n畉m g但y h畉i nhi畛u nh畉t cho c但y tr畛ng. Sinh 畛c t畛 c坦 t鱈nh 畛c cao. ph畛 bi畉n trong 畉t, l動u t畛n d畉ng bo t畛 ho畉c khu畉n ty. G但y b畛nh ng畉n m畉ch, th畛i r畛 th畛i th但n, th畛i h畉t, tr叩i. T畉n c担ng vo b畛 r畛. g但y h畉i cho 畉u, c chua, cam qu箪t, khoai t但y.
  • 6. Pythium sp. L m畛t vsv gi畛ng v畛i n畉m. Ph畛 k箪 ch畛 r畛ng. Sinh s畉n v担 t鱈nh b畉ng bo t畛 畛ng. G但y tn l畛i v ch畉t r畉p 畛 c但y con( do 畉m 動畛t). G但y th畛i c畛 ( khoai t但y, c r畛t..). G但y th畛i c畛 v qu畉 : l m畛t b畛nh ch畛 y畉u 畛 L畉c.
  • 7. Nguy棚n t畉c ph但n l畉p: - Gieo c畉y vi khu畉n 達 pha lo達ng tr棚n m担i tr動畛ng dinh d動畛ng 畉c tr動ng (2% th畉ch hay c嘆n g畛i l agar). - Nu担i d動畛ng trong i畛u ki畛n th鱈ch h畛p cho m畛c c叩c khu畉n l畉c t叩ch bi畛t nhau. - C畉y t叩ch t畛 khu畉n l畉c m畛c t叩ch bi畛t sang 畛ng m担i tr動畛ng dinh d動畛ng th畉ch nghi棚ng 畛 thu nh畉n ch畛ng vi khu畉n thu畉n khi畉t (do Robert Koch 畛 ra). PHN L畉P
  • 9. 1. M畉u: N畛t s畉n 畉u ph畛ng c坦 k鱈ch th動畛c l畛n, c坦 mu 畛 h畛ng. R畛a s畉ch, ng但m c畛n 5 ph炭t, r畛a n動畛c, nghi畛n n叩t b畉ng kim m滴i m叩c, b畛 sung th棚m 3ml n動畛c c畉t ta thu 動畛c dung d畛ch ch畛a vi khu畉n tr棚n. 議畉t: l畉y 畉t g畉n t畉ng m畉t, kh担ng l畉y 畛 ph畉n 畉t s但u. 2. Pha lo達ng m畉u: C但n 10g 畉t nghi畛n trong c畛i s畛 (達 s畉y ti畛t tr湛ng) h嘆a v畛i 90ml n動畛c mu畛i sinh l箪 ch畛a s畉n trong b狸nh tam gi叩c 200ml v担 tr湛ng. L畉c 畛u tr棚n m叩y l畉c t畛c 畛 150v/p trong 30 ph炭t. un s担i c叩ch th畛y 15 ph炭t thu 動畛c huy畛n d畛ch 10-1, L畉c 畛u huy畛n d畛ch r畛i d湛ng micropipet h炭t v担 tr湛ng 1ml huy畛n d畛ch vo 畛ng nghi畛m ch畛a s畉n 90ml n動畛c mu畛i sinh l箪 達 ti畛t tr湛ng 畛 動畛c 畛 pha lo達ng 10-2, t動董ng t畛 thu 動畛c c叩c n畛ng 畛 10-3, 10-4,
  • 10. 3.C畉y ph但n l畉p: C畉y trang c叩c dung d畛ch thu 動畛c tr棚n th畉ch 挑a NA nu担i trong t畛 畉m 畛 370C trong 24h. Ch畛n khu畉n l畉c nghi ng畛 ti畉n hnh nhu畛m Gram v th畛 c叩c ph畉n 畛ng sinh h坦a. 4. X叩c 畛nh vi khu畉n Bacillus em khu畉n l畉c nghi ng畛 i nhu畛m Gram v xem d動畛i k鱈nh hi畛n vi. N畉u th畉y c坦 畉c i畛m c畛a Bacillus th狸 c畉y truy畛n khu畉n l畉c nghi ng畛 vo m担i tr動畛ng th畉ch nghi棚ng NA 畛 gi畛 gi畛ng th畛 test sinh h坦a ti畉p theo. Gi叩m 畛nh 畉c t鱈nh sinh h坦a: catalaza (+), nitrate (+), VP (+), citrate (+), methyred (+), maltose (-).
  • 12. 1. M畉u: 畉t: l畉y t畛 c叩c ru畛ng tr畛ng 畉u. Lm m畛n 畉t qua r但y 1mm. 2. Pha lo達ng m畉u: C但n 1g 畉t m畛n h嘆a vo 100ml n動畛c sinh l箪 c坦 0,5% tween 80. 畉t l棚n m叩y l畉c trong 30 ph炭t v畛i t畛c 畛 110v/p. H嘆a lo達ng 畛 c叩c n畛ng 畛 kh叩c nhau.
  • 13. 3. Ph但n l畉p m畉u: em c叩c dung d畛ch 動畛c pha lo達ng 畛 c叩c n畛ng 畛 kh叩c nhau c畉y tr棚n m畛i tr動畛ng th畉ch. Ph但n l畉p c叩c khu畉n l畉c i畛n h狸nh c畛a Trichoderma, lm thu畉n c叩c d嘆ng Trichoderma. 4. Th畛 畉nh h動畛ng 畛c t畛 tr棚n c但y tr畛ng: T畉m h畉t v phun l棚n c但y, khi th畉y kh担ng c坦 畉nh h動畛ng x畉u v畛i c但y m畛i, th畛c hi畛n c叩c th鱈 nghi畛m ti畉p theo nh動 畛nh danh, x叩c 畛nh kh畉 nng 畛c ch畉 ph叩t tri畛n c叩c vi sinh v畉t g但y b畛nh c但y.
  • 14. 畛NH TNH C叩c b動畛c th畛c hi畛n: Chu畉n b畛 d畛ch khu畉n: Vi khu畉n 動畛c h嘆a vo n動畛c mu畛i sinh l箪 n畛ng 畛 0,85% 畛 c坦 m畉t 畛 kho畉ng: 1-2.108 CFU/ml). Chu畉n b畛 d畛ch n畉m (Fusarium sp, Pythium sp, Trichoderma): N畉m m畛c 動畛c pha trong n動畛c mu畛i sinh l箪 0,85% 畛 c坦 m畉t 畛 1 - 2.106 tb/ml (畉m b畉ng bu畛ng 畉m h畛ng c畉u).
  • 15. M担i tr動畛ng th畛 畛nh t鱈nh: NA 37oC/24h. N畉m g但y b畛nh 動畛c ho畉t h坦a tr棚n m担i tr動畛ng PDA (Potato dextrose agra) 37oC/3 ngy (畛ng th畉ch nghi棚ng).
  • 16. 1. Th畛 kh畉 nng 畛i kh叩ng n畉m g但y b畛nh c畛a c叩c ch畛ng Bacillus. Nh畉mch畛n ra ch畛ng c坦 ho畉t t鱈nh m畉nh nh畉t. Ti畉n hnh th畛 nghi畛m 畛i kh叩ng: H炭t 10袖l d畛ch n畉m (Fusarium sp v Pythium sp) v d畛ch khu畉n (Bacillus) c畉y 畛i x畛ng nhau qua 動畛ng k鱈nh 挑a m担i tr動畛ng PGA. Kho畉ng c叩ch gi畛a ch炭ng l 3cm. Ti畉n hnh l畉p l畉i th鱈 nghi畛m nhi畛u l畉n 畛 cho k畉t qu畉 ch鱈nh x叩c.
  • 17. Sau khi c畉y: 畛 畛 37oC trong 3 ngy. 仰叩nh gi叩 k畉t qu畉: xem ch畛ng Bacillus no kh叩ng n畉m m畉nh nh畉t, ch畛n ch畛ng Bacillus 坦.
  • 18. 2. Th畛 kh畉 nng kh叩ng n畉m c畛a Trichoderma. M担i tr動畛ng th畛 畛i kh叩ng: SA( Sabouraud agar). N畉m g但y b畛nh c滴ng 動畛c nu担i tr棚n m担i tr動畛ng th鱈ch h畛p 畛 ch炭ng ph叩t tri畛n t畛t.
  • 19. Ti畉n hnh th畛 nghi畛m 畛i kh叩ng: H炭t 10袖l d畛ch n畉m Trichoderma v 10袖l d畛ch n畉m g但y b畛nh (Fusarium sp. v Pythium sp.) c畉y 畛i x畛ng nhau qua 動畛ng k鱈nh 挑a, c叩ch m辿p 挑a petri 1-1.5cm. Ti畉n hnh l畉p l畉i th鱈 nghi畛m nhi畛u l畉n. Th鱈 nghi畛m 動畛c quan s叩t 2 ngy 1 l畉n, sau 3 ngy ti畉n hnh ch畛n l畛c c叩c ch畛ng kh叩ng b畛nh m畉nh nh畉t.
  • 21. a. 叩nh gi叩 kh畉 nng kh叩ng n畉m: Ph畉n n畉m Trichoderma ph叩t tri畛n bao ph畛 qua ph畉n n畉m g但y h畉i. Ph畉n n畉m g但y h畉i b畛 bo m嘆n d畉n 畛 m辿p khu畉n l畉c. Ph畉n n畉m Trichoderma ph叩t tri畛n v kh畛ng ch畉 lm cho n畉m g但y h畉i kh担ng ph叩t tri畛n 動畛c.
  • 22. b. 叩nh gi叩 m畛c 畛i kh叩ng c畛a n畉m: Kh叩ng m畉nh: N畉m Trichoderma t畉n c担ng v ph叩 h畛y hon ton n畉m g但y h畉i, k鱈 hi畛u: +++ Kh叩ng trung b狸nh: N畉m Trichoderma t畉n c担ng v ph叩 h畛y m畛t ph畉n n畉m g但y h畉i, k鱈 hi畛u: ++ Kh叩ng y畉u: N畉m Trichoderma ngn ch畉n s畛 ph叩t tri畛n c畛a n畉m g但y h畉i, k鱈 hi畛u: + Kh担ng kh叩ng: n畉m g但y h畉i g畉n nh動 ph叩t tri畛n b狸nh th動畛ng, x但m nh畉p vo v湛ng ph叩t tri畛n c畛a n畉m, k鱈 hi畛u: Ch畛n ch畛ng Trichoderma kh叩ng n畉m m畉nh nh畉t.
  • 23. 3. Th畛 kh畉 nng k畉t h畛p c畛a n畉m Trichoderma v畛i ch畛ng Bacillus 達 動畛c ch畛n qua 畛nh t鱈nh. T畛 ch畛ng n畉m Trichoderma v ch畛ng Bacillus 達 動畛c ch畛n ra sau khi 畛nh t鱈nh ta ti畉n hnh th畛 kh畉 nng k畉t h畛p gi畛a ch炭ng. Chu畉n b畛 m担i tr動畛ng nu担i c畉y: PGA. Trichoderma v Bacillus 動畛c c畉y 畛i x畛ng nhau qua 動畛ng k鱈nh 挑a petri, kho畉ng c叩ch gi畛a ch炭ng l 3cm . Quan s叩t kh畉 nng k畉t h畛p gi畛a ch炭ng: Trichoderma v Bacillus c湛ng m畛c 動畛c tr棚n c湛ng m担i tr動畛ng: kh担ng 畛c ch畉 l畉n nhau. Trichoderma m畛c l畉n 叩c Bacillus ho畉c ng動畛c l畉i. 畛c ch畉 l畉n nhau. Ch畛n ra ch畛ng n畉m Trichoderma v ch畛ng Bacillus c坦 kh畉 nng k畉t h畛p nhau t畛t nh畉t.
  • 24. 畛NH L働畛NG Kh畉o s叩t ph畉n trm 畛c ch畉: C担ng th畛c t鱈nh ph畉n trm 畛c ch畉: 動畛ng k鱈nh 挑a 畛i ch畛ng - 動畛ng k鱈nh 挑a c畉y x 100% 動畛ng k鱈nh 挑a 畛i ch畛ng
  • 25. N畉u % 畛c ch畉 cng l畛n th狸 kh畉 nng 畛c ch畉 c畛a Trichoderma v Bacillus cng m畉nh. Ng動畛i ta s畉 ch畛n nh畛ng n畉m c坦 % 畛c ch畉 l畛n nh畉t em th畛 nghi畛m Invivo.
  • 26. III. TH畛 NGHI畛M INVIVO B動畛c 1: Chu畉n b畛. Vi khu畉n v n畉m: Vi khu畉n 動畛c tng sinh trong m担i tr動畛ng M畉t r畛. o OD L畛a ch畛n m畉t 畛 1 - 2.108 CFU/ml. N畉m tng sinh trong m担i tr動畛ng c叩m, m畉t c動a, sau 坦 em pha v畛i n動畛c mu畛i sinh l箪 0,85% 畛 畉t m畉t 畛 1 - 2.106 tb/ml. 畉t 達 kh畛 tr湛ng.
  • 27. B動畛c 2: Th畛 nghi畛m. Ph動董ng ph叩p th畛c hi畛n th畛 nghi畛m Invivo. S畛 nghi畛m th畛c: Th畛c hi畛n 15 nghi畛m th畛c, m畛i nghi畛m th畛c l畉p l畉i 3 l畉n (t畛ng c畛ng c坦 45 nghi畛m th畛c).
  • 28. Pythium sp Fusarium sp Pythium sp + Fusarium sp Kh担ng c畉y Kh担ng c畉y Kh担ng c畉y C畉y Trichoderma C畉y trichoderma C畉y Trichoderma C畉y c湛ng l炭c Ttrichoderma v Bacillus C畉y c湛ng l炭c Ttrichoderma v Bacillus C畉y c湛ng l炭c Ttrichoderma v Bacillus C畉y Trichoderma tr動畛c, Bacillus sau. C畉y Trichoderma tr動畛c, Bacillus sau. C畉y Trichoderma tr動畛c, Bacillus sau. C畉y Bacillus C畉y Bacillus C畉y Bacillus B畉ng: C叩c l担 th鱈 nghi畛m
  • 29. Ph動董ng ph叩p tr畛ng th畛 nghi畛m: M畛i ch畉u cho vo 1kg 畉t (達 v担 tr湛ng), tr畛n 畛u v畛i d畛ch kho叩ng. B畛 sung n畉m, vi khu畉n vo ch畉u (2ml) nh動 c叩c l担 th鱈 nghi畛m. Tr畛ng 畛 m畛i ch畉u 10 h畉t 畉u, quan s叩t t畛 l畛 n畉y m畉m (畉m h畉t n畉y m畉m) v m畛c 畛 c畛 畛nh 畉m (s畛 n畛t s畉n). 叩nh gi叩 k畉t qu畉 th畛 nghi畛m: 叩nh gi叩 m畛c 畛 kh叩ng Fusaium sp. v Pythium sp. d畛a vo s畛 h畉t t畛 l畛 h畉t n畉y m畉m v s畛 n畛t s畉n tr棚n r畛 c但y.
  • 31. LN MEN CC B働畛C LN MEN B動畛c 1: Thi畉t l畉p m担i tr動畛ng d湛ng trong tng sinh gi畛ng s畉n xu畉t. S畛 d畛ng ph動董ng ph叩p l棚n men b畛 m畉t( l棚n men n畛i)
  • 32. MI TR働畛NG LN MEN T畛I 働U HA CHO TRICHODESMA T畉o m担i tr動畛ng hi畉u kh鱈. T畉o m担i tr動畛ng c坦 pH 2-6( pH th鱈ch h畛p cho n畉m Trichoderma ti畉t ra Enzyme). M担i tr動畛ng c坦 畛 畉m cao. pH th鱈ch h畛p 畛 h狸nh thnh bo t畛 l 5-5,8 t湛y t畛ng m畛c pH m cho c叩c lo畉i bo t畛 kh叩c nhau Nhi畛t 畛 t畛i 動u l 25-300C Nhi畛t 畛 th鱈ch h畛p ti畉t Chitinase l 400C, Glucanase 畛 350C. Ngu畛n cacbon ch畛 y畉u l D-glucose, D-galatose, D- mantose, D-fructose.
  • 33. MI TR働畛NG T畛I 働U HA BACILLUS S畛 d畛ng ph動董ng ph叩p l棚m men ch狸m( L棚n men b畛 s但u) Nhi畛t 畛 t畛i 動u : 550C PH t畛i 動u: 7-8. M担i tr動畛ng hi畉u kh鱈 ho畉c k畛 kh鱈 t湛y nghi.
  • 34. B動畛c 2: Thanh tr湛ng m担i tr動畛ng, n畛i l棚n men v c叩c thi畉t b畛 k竪m theo. B動畛c 3: Nh但n sinh kh畛i 畛 l畛n, m畉nh v thu畉n 畛 cung c畉p cho c叩c b畛n l棚n men trong qu叩 tr狸nh s畉n xu畉t. B動畛c 4: Cung c畉p c叩c i畛u ki畛n t畛i 動u cho s畛 ph叩t tri畛n c畛a gi畛ng 畛 gi畛ng s畉n sinh s畉n ph畉m.
  • 35. QU TRNH X畛 L SAU LN MEN Bao g畛m: T叩ch chi畉t v tinh ch畉 s畉n ph畉m thnh d畉ng th鱈ch h畛p cho m畛c 鱈ch nh畉t 畛nh. C叩c lo畉i s畉n ph畉m: Ton b畛 t畉 bo, Vaccine, Protein tr畛 li畛u, Kh叩ng th畛 董n d嘆ng..C叩c s畉n ph畉m kh叩c nhau 叩ng k畛 v畛 k鱈ch th動畛c ph但n t畛, thnh ph畉n h坦a h畛c, y棚u c畉u v畛 畛 tinh s畉ch... C畉n c叩c ph動董ng ph叩p kh叩c nhau 畛 thu h畛i v tinh s畉ch.
  • 36. B動畛c 7: S畉y c畉 2 s畉n ph畉m 畛: 180oC/30 ph炭t, sau 坦 ph畛i tr畛n 2 s畉n ph畉m Trichoderma V Bacillus l畉i v畛i nhau. B動畛c 8: X畛 l箪 nh畛ng ch畉t th畉i t畉o ra trong qui tr狸nh.
  • 37. i畛u ki畛n b畉o qu畉n ch畉 ph畉m Kh畉o s叩t th畛i gian b畉o qu畉n ch畉 ph畉m( th動畛ng l 6 th叩ng 畛i v畛i 2 ch畛ng tr棚n). V畛i i畛u ki畛n nhi畛t 畛 25 - 30oC (bao b狸 t畛t, n董i tho叩ng m叩t). Bo t畛( c畛a Bacillus) b畛n nhi畛t (8000C) v s畉n ph畉m 動畛c bo ch畉 d動畛i d畉ng bo t畛 tinh khi畉t 100% (>99,99%) S畉n ph畉m ch畛a bo t畛 c坦 th畛 b畉o qu畉n v担 th畛i h畉n 畛 nhi畛t 畛 ph嘆ng trong i畛u ki畛n 坦ng g坦i k鱈n hon ton.
  • 38. i畛u ny kh担ng th畛 c坦 動畛c 畛 s畉n ph畉m probiotic c畛a sinh v畉t kh担ng c坦 kh畉 nng t畉o bo t畛, v鱈 d畛 nh動 c叩c Lactobacillus ang s畛 d畛ng kh叩 ph畛 bi畉n hi畛n nay. T狸m hi畛u tr棚n th畛 tr動畛ng xem 達 c坦 s畉n ph畉m no t動董ng t畛 kh担ng n畉u ch動a c坦 s畉n ph畉m no t動董ng t畛 th狸 ta ng k箪 b畉n quy畛n cho s畉n ph畉m.
  • 39. N畉u S畉n ph畉m s畉n xu畉t ra 動畛c ch畛ng nh畉n b畉n quy畛n th狸 ch炭ng ta s畉 動a vo s畉n xu畉t c担ng nghi畛p v畛i quy m担 l畛n 畛 b叩n tr棚n th畛 tr動畛ng.