ºÝºÝߣ

ºÝºÝߣShare a Scribd company logo

Biolas 1.2

•Download as PPTX, PDF•
•
Alfiah Alif
Alfiah Alif
1 of 22
Downloaded 38 times
BIOLAS 1.2
REAKSI-REAKSI ASAM AMINO RUMUS UMUM : H H | 1 R 2 COOH R – C –COOH α | NH2 NH2 Ball & stick modul Fischer Projection
TITRASI ASAM AMINO H+ OH- CH3 – CH – COOH CH3 – CH – COO- CH3 – CH – COO- + H2O | | | +NH +NH NH2 3 3 Zwitter ion H+ OH- CH3 – CH – COOH CH3 – CH – COOH CH3 – CH – COO- + H2O | | | +NH NH2 NH2 3 Netral 14 20 mL L-Alanin 0,1 M Dititrasi dgn : 0,1 M NaOH 9,7 0,1 M HCl 7 1 2,3 20 10 0 10 20 0,1 mHCl (ml) 0,1 mNaOH (ml)
REAKSI KIMIA ASAM AMINO Gugus karboksil dan gugus amino asam amino memperlihatakan semua reaksi yg diharapkan dari fungsi-fungsi ini dlm pembentukan garam, pengesteran dan asilasi. Reaksi Warna : *NINHIDRIN Suatu zat pengoksidasi yg sangat kuat, menyebabkan dekarboksilasi oksidatif asam amino-alfa, menghasilkan CO2, NH3 dan suatu aldehid dengan satu atom karbon kurang dari a.a.induknya.
O R – CH – COOH [R – CH – COOH] R – CH – COOH PANAS R – C – H | 3 4 CO2 5 1 NH2 NH O + H2O O O O H H OH N HO OH + H HO OH H 6 2 2 O O O 3H2O O O O O-NH4+ NH3 N N H 7 2 O 8 O O O
MEKANISME Rx.NINHIDRIN O O OH O + H2O OH R | O O NINHIDRIN H3N – C – H | O- H3O+ O COO- H H | | N=C N – C – COO- ALDIMINE | | H R CO2 R (schiff base) H2O O O | O=C KETIMINE O- | NINHIDRIN R NH2 O- O AMINE NINHIDRIN O INTERMEDIATE N O NH3 O OH O O | RUHEMAN’S PURPLE | OH O O HIDRINDANTIN
1. Asam amino 2.Ninhidrin 3.Asam α-imino 4. Asam α-keto 5.Aldehid 6. Ninhidrin tereduksi 7. Zat antara kompleks 8. kompleks warna (Ruhman’s purple) Kompleks warna ini menyerap cahaya dgn λ = 570 nm. Intensitas warna  dasar untuk test kuantitatif Amina-amina bukan a.amino alfa, juga bereaksi dgn ninhidrin, membentuk warna biru ungu tetapi tanpa mengeluarkan CO2. Prolin dan hidroksi prolin dgn ninhidrin  warna kuning.
ASAM AMINO YG NAMA REAKSI REAGEN WARNA DITEMUKAN ARGININ SAKAGUCHI α-naftol & Na hipoklorit merah SISTEIN NITROPRUSID Na.nitroprusid dl NH4OHcons merah SISTEIN SULIVAN Na.1,2.naftoquinon-4-sulfo- merah nat dan NaHSO3 HISTIDIN,TIROSIN PAULY As.diazosulfanilat dl lrt.Alkali merah TRIPTOFAN ASAM GLIOKSILAT As.glioksilat dl 36N H2SO4 ungu (HOPKINS-COLE) TRIPTOFAN EHRLICH p-dimetilaminobenzaldehid biru dl 12N HCl TIROSIN MILLON HgNO3 dl HNO2 : dipanaskan merah TIROSIN FOLIN- CIOCALTEU As.fosfomolibdatungstat biru hijau TIROSIN,TRIPTOFAN XANTOPROTEIN HNO3 p.mendidih kuning FENILALANIN
Rx.GUGUS KARBOKSIL 1. Kondensasi ggs karboksil a.a dgn ATP H O O O O R – C – C – OH + O – P – O – P – O – P – O – RIBOSA-ADENIN (ATP) | | | | NH2 O- O- O- O O H O O HO – P – O – P – O- + R – C – C – O – P – O – RIBOSA-ADENIN | | | | O- O- NH2 O- Pirofosfat anor AMINOASIL ADENILAT
2. ESTERIFIKASI ggs karboksil a.a dgn alkohol O H+ R – CH – COOH + C2H5OH R – CH – C – OC2H5 + H20 | | +NH +NH 3 3 atau konversi menjadi asilklorida O PCl5 R – CH – COOH R – CH – C - Cl | POCl3 | +NH +NH 3 3 atau dekarboksilasi a.a. menjadi seny.amin R – CH – COOH R – CH2 + CO2 | | NH2 NH2 3. Rx dgn benzil hidroksoda O R2 – CH – COOH + OH – CH2 – R2 – CH – C – O – CH2 – + H 2O | | NH2 NH2 Rx ini untuk menghambat ggs karboksil salah satu a.a.
Rx.GUGUS AMINO 1. Rx dgn 1-fluoro-2,4-dinitro benzena (reagen SANGER) NO2 NO2 / H R / H R | | | | O2N – –F + H – N – CH – COOH O2N – – N – CH – COOH + HF 2. Rx dgn fenilisotiosianat (reagen EDMAN) S COOH S COOH H | H H | – N = C + N – CH – N – C – N – CH | | | H R R S S H2O C / N NH H+,nitrometan N NH H | O R HO – O – CH | FENILTIOHIDANTOIN O R AS.FENILTIOHIDANTOAT
3. Rx dgn asam nitrit R – CH – COOH + HNO2 R – CH – COOH + N2 + H2O + H+ | | NH2 OH 4. Rx dgn dansil klorida H H H | H R – C – N – H + Cl - SO2 – HCl + R – C – N – SO2 – | | COOH COOH – N(CH3)2 – N(CH3)2 1- dimetil amino Naffalen 5-sulfonil klorida 5. Rx dgn benzilklorokarbonat H O H O | H | H R – C – N – H + Cl – C – O – CH2 – HCl + R – C – N – C – O – CH2 – | | COOH COOH CBZ-KLORIDA CBZ-asam amino (karbobenzoksi-klorida)
6. Rx dgn t-butiloksikarbonil azida (t-BOC-azida) H O H O | | H R – C – NH2 + N3 – C – O – C(CH3)3 R – C – N – C – O – C(CH3)3 | | COOH t-BOC-azida COOH t-BOC-azida Kedua pereaksi ini  menghambat gugus amin salah satu a.a. (5&6) 7. Rx dgn trifloroasetat klorida O H O H | H R – C – NH – H + Cl – C – CF3 HCl + R – C – N – C – CF3 | | COOH Trifloroasetil COOH A.Amino Trifloroasetil klorida (mudah menguap) GLC
Rx.INTER MOLEKUL 1. Dehidrasi intermolekul as.glutamat CH2 – CH2 H2O CH2 – CH2 | | H | 3 4| H O=C C 2 5C | | COOH 1 COOH OH HN O N H H As. Pirolidon 5-karboksilat 1. Dehidrasi intermolekul membtk as.hidrida siklik O H O H | | C – OH H–N C – N 2H2O / / R – CH HC – R R – CH HC – R / / N–H OH – C N – C / / H O H O Rx ini u/ pemisahan asam amino Diketopiperazin u/ analisis kuantitatif.
ANALISIS ASAM AMINO/PROTEIN 1.KROMATOGRAFI KERTAS Sejumlah kecil (0,005 mL) lrt a.a.yg mengandung 0,01 mg a.a. diletakkan pada suatu titik (5 cm dari ujung kertas) Pelarut : air, suatu asam atau basa, dan pelarut organik (spt, n-butil alkohol) Sis Lis Asp His Gli Arg Ser LEMBAR Tre Glu KERTAS Ala Bak berisi pelarut Pro Tir PENYEMPROTAN NINHIDRIN Val Met ± 18 jam 0,5% dl aseton Trp Fen Ile 80 – 100 oC Les
2. KROMATOGRAFI LAPISAN TIPIS Lapisan tipis penunjang (penyerap tempel)  ADSORBENT -Bubuk sellulosa, alumina -Sephadex, silikagel Asp Glu Sis Scr Gli Tre Ala Gln Tir Lis Val His Met Ile Les Arg Trp Pro Fen ± 8 jam
3. KROMATOGRAFI KOLOM PENUKAR ION MOORE & STEIN menggunakan resin pertukaran ion (DOWEX) dan berbagai dapar serta perubahan temperatur untuk melakukan pemisahan pada kromatografi kolom dari semua a.a. dl hidrolisat protein Dgn cara ini analisi a.a.dapat dilakukan ± 4 jam. Sistem ini dapat digunakan baik dgn pengumpulan fraksi (fraction collector) maupun dgn alat pencatat automatis. KOLOM : Resin Polistiren (Amberlite IR-120) Analisis Protein : Histon Dapat juga dipakai u/penentuan a.amino dl : Hemoglobin -Plasma Ribo nuklease -Urin -Jaringan tumbuhan dan hewan
AMONIA Glu St.internal Asam & netral Ala Scr Gli Les Asp Lis Tre Val His Arg Pro Ile Met A B Fen Tir Sis 570 nm 570 nm pH 5,28 pH 3,25 pH 4,25 A. Kolom pendek (5,0 x 0,9 cm) = 60 mt B. Kolom panjang (55 x 0,9 cm) = 180 mt Analisis Automatis suatu Hidrolisat ENDOSPERMA JAGUNG MOORE-STEIN (DOWEX 50) PADA 55OC
4. ELEKTROFORESIS VOLTASI TINGGI (H.V.E) Pemisahan peptida dan asam amino dgn meletakkannya dalam medan listrik 2000-5000 Volt selama 0,5-2 jam HVE = merupakan tambahan yg berharga pada teknik pemisahan kromatografi PENDUKUNG : kertas lapisan tipis bubuk sellulosa Pemisahan tergantung pada 2 faktor : - Selisih muatan molekul pada pH yg dipilih - Berat molekul Bila muatan sama, BM < akan berimigrasi lebih jauh. Lempeng gelas tipis – + Katode Anode
Contoh diletakkan pada bagian tengah lapisan pendukung. Kmd dibasahi dgn lrt dapar dan dialiri arus listrik. Mol + bergerak ke arah katode pada pH yg dipilih Mol – bergerak ke arah anode Elektroferogram yg kering diberi mimhidrin mol2 terpisah pada pita2 yg nampak (biru U) Mis. pH 6,4  glutamat dan aspartat mempunyai selisih muatan -1, bergerak ke anode, dan mudah dipisahkan, berdasarkan perbedaan BM (30 menit, 2000 Volt) Lisin, Arginin, dan Histidin bergerak ke arah katode, sedang as. amino lainnya tetap berada pada tempat semula pH 3,5  peptida yg berasal dari pencernaan enzimatik protein
5. PENENTUAN PROTEIN DGN METODE LOWRY PEREAKSI : A : 2% Na2CO3 dl 0,1 N NaOH (b/v) B : 0,5% (b/v) CuSO4 5H2O C : % (b/v) Natrium Kalium Tartrat D : 500 ml A, 0,5 ml B dan 0,5 ml C (camp. Segar) E : larutan folin (diencerkan 3 kali dgn H2O) PROSEDURE : 1 ml lrt. (0,1 – 1 mg protein) + 5 ml lrt. D, diaduk, dan setelah 10mt di+ 0,5 ml lrt. E Campuran diaduk kembali dan absorbansnya atau Do dibaca setelah 30 mt pada 650 mm LARUTAN STANDARD : SERUM ALBUMIN BOVIN dl lrt NaCl (9 g/l) Konsentrasi  0,1 – 1 mg/ml
DO 650 nm A 0,7 0,6 0,5 Ax 0,4 0,3 0,2 0,1 0,1 0,2 0,3 Cx 0,4 0,5 mgProt/mL

More Related Content

Biolas 1.2

  • 2. REAKSI-REAKSI ASAM AMINO RUMUS UMUM : H H | 1 R 2 COOH R – C –COOH α | NH2 NH2 Ball & stick modul Fischer Projection
  • 3. TITRASI ASAM AMINO H+ OH- CH3 – CH – COOH CH3 – CH – COO- CH3 – CH – COO- + H2O | | | +NH +NH NH2 3 3 Zwitter ion H+ OH- CH3 – CH – COOH CH3 – CH – COOH CH3 – CH – COO- + H2O | | | +NH NH2 NH2 3 Netral 14 20 mL L-Alanin 0,1 M Dititrasi dgn : 0,1 M NaOH 9,7 0,1 M HCl 7 1 2,3 20 10 0 10 20 0,1 mHCl (ml) 0,1 mNaOH (ml)
  • 4. REAKSI KIMIA ASAM AMINO Gugus karboksil dan gugus amino asam amino memperlihatakan semua reaksi yg diharapkan dari fungsi-fungsi ini dlm pembentukan garam, pengesteran dan asilasi. Reaksi Warna : *NINHIDRIN Suatu zat pengoksidasi yg sangat kuat, menyebabkan dekarboksilasi oksidatif asam amino-alfa, menghasilkan CO2, NH3 dan suatu aldehid dengan satu atom karbon kurang dari a.a.induknya.
  • 5. O R – CH – COOH [R – CH – COOH] R – CH – COOH PANAS R – C – H | 3 4 CO2 5 1 NH2 NH O + H2O O O O H H OH N HO OH + H HO OH H 6 2 2 O O O 3H2O O O O O-NH4+ NH3 N N H 7 2 O 8 O O O
  • 6. MEKANISME Rx.NINHIDRIN O O OH O + H2O OH R | O O NINHIDRIN H3N – C – H | O- H3O+ O COO- H H | | N=C N – C – COO- ALDIMINE | | H R CO2 R (schiff base) H2O O O | O=C KETIMINE O- | NINHIDRIN R NH2 O- O AMINE NINHIDRIN O INTERMEDIATE N O NH3 O OH O O | RUHEMAN’S PURPLE | OH O O HIDRINDANTIN
  • 7. 1. Asam amino 2.Ninhidrin 3.Asam α-imino 4. Asam α-keto 5.Aldehid 6. Ninhidrin tereduksi 7. Zat antara kompleks 8. kompleks warna (Ruhman’s purple) Kompleks warna ini menyerap cahaya dgn λ = 570 nm. Intensitas warna  dasar untuk test kuantitatif Amina-amina bukan a.amino alfa, juga bereaksi dgn ninhidrin, membentuk warna biru ungu tetapi tanpa mengeluarkan CO2. Prolin dan hidroksi prolin dgn ninhidrin  warna kuning.
  • 8. ASAM AMINO YG NAMA REAKSI REAGEN WARNA DITEMUKAN ARGININ SAKAGUCHI α-naftol & Na hipoklorit merah SISTEIN NITROPRUSID Na.nitroprusid dl NH4OHcons merah SISTEIN SULIVAN Na.1,2.naftoquinon-4-sulfo- merah nat dan NaHSO3 HISTIDIN,TIROSIN PAULY As.diazosulfanilat dl lrt.Alkali merah TRIPTOFAN ASAM GLIOKSILAT As.glioksilat dl 36N H2SO4 ungu (HOPKINS-COLE) TRIPTOFAN EHRLICH p-dimetilaminobenzaldehid biru dl 12N HCl TIROSIN MILLON HgNO3 dl HNO2 : dipanaskan merah TIROSIN FOLIN- CIOCALTEU As.fosfomolibdatungstat biru hijau TIROSIN,TRIPTOFAN XANTOPROTEIN HNO3 p.mendidih kuning FENILALANIN
  • 9. Rx.GUGUS KARBOKSIL 1. Kondensasi ggs karboksil a.a dgn ATP H O O O O R – C – C – OH + O – P – O – P – O – P – O – RIBOSA-ADENIN (ATP) | | | | NH2 O- O- O- O O H O O HO – P – O – P – O- + R – C – C – O – P – O – RIBOSA-ADENIN | | | | O- O- NH2 O- Pirofosfat anor AMINOASIL ADENILAT
  • 10. 2. ESTERIFIKASI ggs karboksil a.a dgn alkohol O H+ R – CH – COOH + C2H5OH R – CH – C – OC2H5 + H20 | | +NH +NH 3 3 atau konversi menjadi asilklorida O PCl5 R – CH – COOH R – CH – C - Cl | POCl3 | +NH +NH 3 3 atau dekarboksilasi a.a. menjadi seny.amin R – CH – COOH R – CH2 + CO2 | | NH2 NH2 3. Rx dgn benzil hidroksoda O R2 – CH – COOH + OH – CH2 – R2 – CH – C – O – CH2 – + H 2O | | NH2 NH2 Rx ini untuk menghambat ggs karboksil salah satu a.a.
  • 11. Rx.GUGUS AMINO 1. Rx dgn 1-fluoro-2,4-dinitro benzena (reagen SANGER) NO2 NO2 / H R / H R | | | | O2N – –F + H – N – CH – COOH O2N – – N – CH – COOH + HF 2. Rx dgn fenilisotiosianat (reagen EDMAN) S COOH S COOH H | H H | – N = C + N – CH – N – C – N – CH | | | H R R S S H2O C / N NH H+,nitrometan N NH H | O R HO – O – CH | FENILTIOHIDANTOIN O R AS.FENILTIOHIDANTOAT
  • 12. 3. Rx dgn asam nitrit R – CH – COOH + HNO2 R – CH – COOH + N2 + H2O + H+ | | NH2 OH 4. Rx dgn dansil klorida H H H | H R – C – N – H + Cl - SO2 – HCl + R – C – N – SO2 – | | COOH COOH – N(CH3)2 – N(CH3)2 1- dimetil amino Naffalen 5-sulfonil klorida 5. Rx dgn benzilklorokarbonat H O H O | H | H R – C – N – H + Cl – C – O – CH2 – HCl + R – C – N – C – O – CH2 – | | COOH COOH CBZ-KLORIDA CBZ-asam amino (karbobenzoksi-klorida)
  • 13. 6. Rx dgn t-butiloksikarbonil azida (t-BOC-azida) H O H O | | H R – C – NH2 + N3 – C – O – C(CH3)3 R – C – N – C – O – C(CH3)3 | | COOH t-BOC-azida COOH t-BOC-azida Kedua pereaksi ini  menghambat gugus amin salah satu a.a. (5&6) 7. Rx dgn trifloroasetat klorida O H O H | H R – C – NH – H + Cl – C – CF3 HCl + R – C – N – C – CF3 | | COOH Trifloroasetil COOH A.Amino Trifloroasetil klorida (mudah menguap) GLC
  • 14. Rx.INTER MOLEKUL 1. Dehidrasi intermolekul as.glutamat CH2 – CH2 H2O CH2 – CH2 | | H | 3 4| H O=C C 2 5C | | COOH 1 COOH OH HN O N H H As. Pirolidon 5-karboksilat 1. Dehidrasi intermolekul membtk as.hidrida siklik O H O H | | C – OH H–N C – N 2H2O / / R – CH HC – R R – CH HC – R / / N–H OH – C N – C / / H O H O Rx ini u/ pemisahan asam amino Diketopiperazin u/ analisis kuantitatif.
  • 15. ANALISIS ASAM AMINO/PROTEIN 1.KROMATOGRAFI KERTAS Sejumlah kecil (0,005 mL) lrt a.a.yg mengandung 0,01 mg a.a. diletakkan pada suatu titik (5 cm dari ujung kertas) Pelarut : air, suatu asam atau basa, dan pelarut organik (spt, n-butil alkohol) Sis Lis Asp His Gli Arg Ser LEMBAR Tre Glu KERTAS Ala Bak berisi pelarut Pro Tir PENYEMPROTAN NINHIDRIN Val Met ± 18 jam 0,5% dl aseton Trp Fen Ile 80 – 100 oC Les
  • 16. 2. KROMATOGRAFI LAPISAN TIPIS Lapisan tipis penunjang (penyerap tempel)  ADSORBENT -Bubuk sellulosa, alumina -Sephadex, silikagel Asp Glu Sis Scr Gli Tre Ala Gln Tir Lis Val His Met Ile Les Arg Trp Pro Fen ± 8 jam
  • 17. 3. KROMATOGRAFI KOLOM PENUKAR ION MOORE & STEIN menggunakan resin pertukaran ion (DOWEX) dan berbagai dapar serta perubahan temperatur untuk melakukan pemisahan pada kromatografi kolom dari semua a.a. dl hidrolisat protein Dgn cara ini analisi a.a.dapat dilakukan ± 4 jam. Sistem ini dapat digunakan baik dgn pengumpulan fraksi (fraction collector) maupun dgn alat pencatat automatis. KOLOM : Resin Polistiren (Amberlite IR-120) Analisis Protein : Histon Dapat juga dipakai u/penentuan a.amino dl : Hemoglobin -Plasma Ribo nuklease -Urin -Jaringan tumbuhan dan hewan
  • 18. AMONIA Glu St.internal Asam & netral Ala Scr Gli Les Asp Lis Tre Val His Arg Pro Ile Met A B Fen Tir Sis 570 nm 570 nm pH 5,28 pH 3,25 pH 4,25 A. Kolom pendek (5,0 x 0,9 cm) = 60 mt B. Kolom panjang (55 x 0,9 cm) = 180 mt Analisis Automatis suatu Hidrolisat ENDOSPERMA JAGUNG MOORE-STEIN (DOWEX 50) PADA 55OC
  • 19. 4. ELEKTROFORESIS VOLTASI TINGGI (H.V.E) Pemisahan peptida dan asam amino dgn meletakkannya dalam medan listrik 2000-5000 Volt selama 0,5-2 jam HVE = merupakan tambahan yg berharga pada teknik pemisahan kromatografi PENDUKUNG : kertas lapisan tipis bubuk sellulosa Pemisahan tergantung pada 2 faktor : - Selisih muatan molekul pada pH yg dipilih - Berat molekul Bila muatan sama, BM < akan berimigrasi lebih jauh. Lempeng gelas tipis – + Katode Anode
  • 20. Contoh diletakkan pada bagian tengah lapisan pendukung. Kmd dibasahi dgn lrt dapar dan dialiri arus listrik. Mol + bergerak ke arah katode pada pH yg dipilih Mol – bergerak ke arah anode Elektroferogram yg kering diberi mimhidrin mol2 terpisah pada pita2 yg nampak (biru U) Mis. pH 6,4  glutamat dan aspartat mempunyai selisih muatan -1, bergerak ke anode, dan mudah dipisahkan, berdasarkan perbedaan BM (30 menit, 2000 Volt) Lisin, Arginin, dan Histidin bergerak ke arah katode, sedang as. amino lainnya tetap berada pada tempat semula pH 3,5  peptida yg berasal dari pencernaan enzimatik protein
  • 21. 5. PENENTUAN PROTEIN DGN METODE LOWRY PEREAKSI : A : 2% Na2CO3 dl 0,1 N NaOH (b/v) B : 0,5% (b/v) CuSO4 5H2O C : % (b/v) Natrium Kalium Tartrat D : 500 ml A, 0,5 ml B dan 0,5 ml C (camp. Segar) E : larutan folin (diencerkan 3 kali dgn H2O) PROSEDURE : 1 ml lrt. (0,1 – 1 mg protein) + 5 ml lrt. D, diaduk, dan setelah 10mt di+ 0,5 ml lrt. E Campuran diaduk kembali dan absorbansnya atau Do dibaca setelah 30 mt pada 650 mm LARUTAN STANDARD : SERUM ALBUMIN BOVIN dl lrt NaCl (9 g/l) Konsentrasi  0,1 – 1 mg/ml
  • 22. DO 650 nm A 0,7 0,6 0,5 Ax 0,4 0,3 0,2 0,1 0,1 0,2 0,3 Cx 0,4 0,5 mgProt/mL