際際滷

際際滷Share a Scribd company logo

CMV TQ.pptx

Download as PPTX, PDF
V
vanluom2

yugyg

1 of 12
Download to read offline
REAL-TIME PCR S畛 D畛NG TAQMAN PROBE PHT HI畛N V 畛NH L働畛NG CMV-DNA
TCH CHI畉T CMV - DNA Kit th動董ng m畉i: QIAamp速DNA Mini and Blood Mini kit 働u i畛m: Thao t叩c nhanh, d畛 dng, ch鱈nh x叩c Ly tr鱈ch DNA ton ph畉n B畛nh ph畉m: m叩u ton ph畉n, huy畉t t動董ng, huy畉t thanh, t畛y x動董ng, c叩c d畛ch c董 th畛 kh叩c, d畛ch nu担i c畉y t畉 bo, c叩c m畉u ph叩p l箪. Th畛i gian th畛c hi畛n: 20 ph炭t S畛 d畛ng 動畛c v畛i m叩u t動董i ho畉c 担ng l畉nh, m叩u ch畛ng 担ng b畉ng citrat, heparin, EDTA
Qui tr狸nh th畛c hi畛n Ly gi畉i m畉u (200 ul m叩u ton ph畉n/huy畉t thanh) B叩m mng R畛a l畉n 1 R畛a l畉n 2 H嘆a tan DNA PCR/Realtime PCR
S畉n ph畉m # 100 bp CMV - DNA PCR S畉n ph畉m # 97 bp -globin DNA PCR 畉u 5 t畛 do c畛a TQ probe ph叩t hu畛nh quang CMV TQ PCR Nguy棚n t畉c
CMV TQ PCR T棚n thu畛c th畛 Thnh ph畉n S畛 l動畛ng K b畉o qu畉n NKCMV-TQPCRFAM Mix M畛i 1 & 2, MgCl2, Tris HCl, KCl, taq polymerase, dNTP, TQ probe (FAM) 175l x 9 tubes -18o 畉n -30oC NKHBG-TQPCRFAM Mix M畛i 1 & 2, MgCl2, Tris HCl, KCl, taq polymerase, dNTP, TQ probe (FAM) 175l x 6 tubes -18o 畉n -30oC NKCMVDNA chu畉n Plasmid ch竪n CMVDNA, 動畛c cung c畉p 畛 3 畛 pha lo達ng cho bi畉t n畛ng 畛 copies/th畛 t鱈ch (5l) 3 tube x 2 -18o 畉n -30oC Ch畛ng tr畉ng TE1X 100 l x 1 -18o 畉n -30oC Tube PCR Low profile white D但y n畉p + d但y tube RT
Chu畉n CMV Ch畛ng tr畉ng DNA t叩ch chi畉t t畛 M1 CMV-qPCR HBG-qPCR mix 5l 5l CMV-qPCR CMV-DNA chu畉n 105 5l CMV-qPCR 5l CMV-DNA chu畉n 104 DNA t叩ch chi畉t t畛 M2 CMV-qPCR HBG-qPCR mix 5l 5l Ch畛ng tr畉ng TE1X CMV-qPCR HBG-qPCR mix 5l 5l CMV-qPCR 5l CMV-DNA chu畉n 103 M畉u th畛
Gi叩m s叩t 畛 nh畉y c畛a CMV-qPCR mix Ct C叩ch bi畛t Ct l箪 t動畛ng gi畛a hai chu畉n Chu畉n Copies/ph畉n 畛ng Ct C叩ch bi畛t Ct l箪 t動畛ng gi畛a hai chu畉n Chu畉n Copies/ph畉n 畛ng 40.00 3.32 0 26.72 3.32 1,000 36.68 3.32 1 23.40 3.32 10,000 33.36 3.32 10 20.08 3.32 100,000 30.04 3.32 100 16.76 3.32 1,000,000
S1 S2 S3 動畛ng bi畛u di畛n khu畉ch 畉i c畛a c叩c gi畉ng chu畉n 動畛ng bi畛u di畛n khu畉ch 畉i c畛a c叩c gi畉ng C[-] 動畛ng baseline
Gi叩m s叩t kh畉 nng t叩ch chi畉t DNA t畛 m畉u th畛 Ki畛m ch畛ng b畉ng gen m達 h坦a -globin c畛a ng動畛i T叩ch chi畉t t畛t + PCR mix t畛t NKHBG-TQPCRFAM s畉 c坦 動畛ng bi畛u di畛n khu畉ch 畉i (k棚n FAM) N畉u kh担ng c坦 動畛ng bi畛u di畛n khu畉ch 畉i gen 硫-globin c畛a m畉u m畉u b畛 畛c ch畉 hay t叩ch chi畉t DNA kh担ng t畛t T叩ch chi畉t l畉i DNA t畛 m畉u
畛nh l動畛ng tuy畛t 畛i s畛 l動畛ng copies CMV ban 畉u S畛 l動畛ng copies CMV-DNA ban 畉u c坦 trong m畉u th畛 畛nh l動畛ng 動畛c ch鱈nh l SQ c坦 trong th畛 t鱈ch m畉u 動a vo ph畉n 畛ng H畛 s畛 K: h畛 thu h畛i sau t叩ch chi畉t c畛a m畉u v th畛 t鱈ch m畉u 動畛c t叩ch chi畉t
200 ul m叩u ton ph畉n QIAamp DNA 200 ul DNA 動畛c t叩ch chi畉t 5ul DNA 動畛c ch畉y PCR x copies/ph畉n 畛ng 200x copies/ml m叩u K = 200
畛nh l動畛ng t動董ng 畛i s畛 CMV ban 畉u t畛 l畛 CMV-DNA ph叩t hi畛n 動畛c so v畛i kh畛i l動畛ng c畛a m畉u th畛 kh担ng th畛 畛nh l動畛ng m畛t c叩ch ch鱈nh x叩c l bao nhi棚u gram hay bao nhi棚u ml T畛 l畛 nhi畛m CMV c畛a m畉u so v畛i kh畛i l動畛ng c畛a m畉u: Ct[HBG] v畛i Ct[CMV] = Ct[HBG]/Ct[CMV]

More Related Content

CMV TQ.pptx

  • 1. REAL-TIME PCR S畛 D畛NG TAQMAN PROBE PHT HI畛N V 畛NH L働畛NG CMV-DNA
  • 2. TCH CHI畉T CMV - DNA Kit th動董ng m畉i: QIAamp速DNA Mini and Blood Mini kit 働u i畛m: Thao t叩c nhanh, d畛 dng, ch鱈nh x叩c Ly tr鱈ch DNA ton ph畉n B畛nh ph畉m: m叩u ton ph畉n, huy畉t t動董ng, huy畉t thanh, t畛y x動董ng, c叩c d畛ch c董 th畛 kh叩c, d畛ch nu担i c畉y t畉 bo, c叩c m畉u ph叩p l箪. Th畛i gian th畛c hi畛n: 20 ph炭t S畛 d畛ng 動畛c v畛i m叩u t動董i ho畉c 担ng l畉nh, m叩u ch畛ng 担ng b畉ng citrat, heparin, EDTA
  • 3. Qui tr狸nh th畛c hi畛n Ly gi畉i m畉u (200 ul m叩u ton ph畉n/huy畉t thanh) B叩m mng R畛a l畉n 1 R畛a l畉n 2 H嘆a tan DNA PCR/Realtime PCR
  • 4. S畉n ph畉m # 100 bp CMV - DNA PCR S畉n ph畉m # 97 bp -globin DNA PCR 畉u 5 t畛 do c畛a TQ probe ph叩t hu畛nh quang CMV TQ PCR Nguy棚n t畉c
  • 5. CMV TQ PCR T棚n thu畛c th畛 Thnh ph畉n S畛 l動畛ng K b畉o qu畉n NKCMV-TQPCRFAM Mix M畛i 1 & 2, MgCl2, Tris HCl, KCl, taq polymerase, dNTP, TQ probe (FAM) 175l x 9 tubes -18o 畉n -30oC NKHBG-TQPCRFAM Mix M畛i 1 & 2, MgCl2, Tris HCl, KCl, taq polymerase, dNTP, TQ probe (FAM) 175l x 6 tubes -18o 畉n -30oC NKCMVDNA chu畉n Plasmid ch竪n CMVDNA, 動畛c cung c畉p 畛 3 畛 pha lo達ng cho bi畉t n畛ng 畛 copies/th畛 t鱈ch (5l) 3 tube x 2 -18o 畉n -30oC Ch畛ng tr畉ng TE1X 100 l x 1 -18o 畉n -30oC Tube PCR Low profile white D但y n畉p + d但y tube RT
  • 6. Chu畉n CMV Ch畛ng tr畉ng DNA t叩ch chi畉t t畛 M1 CMV-qPCR HBG-qPCR mix 5l 5l CMV-qPCR CMV-DNA chu畉n 105 5l CMV-qPCR 5l CMV-DNA chu畉n 104 DNA t叩ch chi畉t t畛 M2 CMV-qPCR HBG-qPCR mix 5l 5l Ch畛ng tr畉ng TE1X CMV-qPCR HBG-qPCR mix 5l 5l CMV-qPCR 5l CMV-DNA chu畉n 103 M畉u th畛
  • 7. Gi叩m s叩t 畛 nh畉y c畛a CMV-qPCR mix Ct C叩ch bi畛t Ct l箪 t動畛ng gi畛a hai chu畉n Chu畉n Copies/ph畉n 畛ng Ct C叩ch bi畛t Ct l箪 t動畛ng gi畛a hai chu畉n Chu畉n Copies/ph畉n 畛ng 40.00 3.32 0 26.72 3.32 1,000 36.68 3.32 1 23.40 3.32 10,000 33.36 3.32 10 20.08 3.32 100,000 30.04 3.32 100 16.76 3.32 1,000,000
  • 8. S1 S2 S3 動畛ng bi畛u di畛n khu畉ch 畉i c畛a c叩c gi畉ng chu畉n 動畛ng bi畛u di畛n khu畉ch 畉i c畛a c叩c gi畉ng C[-] 動畛ng baseline
  • 9. Gi叩m s叩t kh畉 nng t叩ch chi畉t DNA t畛 m畉u th畛 Ki畛m ch畛ng b畉ng gen m達 h坦a -globin c畛a ng動畛i T叩ch chi畉t t畛t + PCR mix t畛t NKHBG-TQPCRFAM s畉 c坦 動畛ng bi畛u di畛n khu畉ch 畉i (k棚n FAM) N畉u kh担ng c坦 動畛ng bi畛u di畛n khu畉ch 畉i gen 硫-globin c畛a m畉u m畉u b畛 畛c ch畉 hay t叩ch chi畉t DNA kh担ng t畛t T叩ch chi畉t l畉i DNA t畛 m畉u
  • 10. 畛nh l動畛ng tuy畛t 畛i s畛 l動畛ng copies CMV ban 畉u S畛 l動畛ng copies CMV-DNA ban 畉u c坦 trong m畉u th畛 畛nh l動畛ng 動畛c ch鱈nh l SQ c坦 trong th畛 t鱈ch m畉u 動a vo ph畉n 畛ng H畛 s畛 K: h畛 thu h畛i sau t叩ch chi畉t c畛a m畉u v th畛 t鱈ch m畉u 動畛c t叩ch chi畉t
  • 11. 200 ul m叩u ton ph畉n QIAamp DNA 200 ul DNA 動畛c t叩ch chi畉t 5ul DNA 動畛c ch畉y PCR x copies/ph畉n 畛ng 200x copies/ml m叩u K = 200
  • 12. 畛nh l動畛ng t動董ng 畛i s畛 CMV ban 畉u t畛 l畛 CMV-DNA ph叩t hi畛n 動畛c so v畛i kh畛i l動畛ng c畛a m畉u th畛 kh担ng th畛 畛nh l動畛ng m畛t c叩ch ch鱈nh x叩c l bao nhi棚u gram hay bao nhi棚u ml T畛 l畛 nhi畛m CMV c畛a m畉u so v畛i kh畛i l動畛ng c畛a m畉u: Ct[HBG] v畛i Ct[CMV] = Ct[HBG]/Ct[CMV]