Diabete
- 3. GLICEMIA normale : concentrazione di glucosio nel plasma tra 70 e 110 mg/100 ml mediamente 90 mg/100 ml
- 4. Il plasma 竪 il liquido in cui sono sospese le cellule del sangue. Il plasma 竪 ottenuto dal sangue a cui si aggiunge un anticoagulante, es. citrato o eparina. Il sangue viene quindi centrifugato per separare il plasma dalle cellule. Per ottenere il siero, il sangue viene lasciato coagulare, e poi centrifugato per separare la fase liquida dalla parte corpuscolare. Rispetto al plasma, il siero non contiene alcune proteine della coagulazione , principalmente il fibrinogeno
- 5. DIABETE MANCATA FUNZIONE DELLA INSULINA IPERGLICEMIA (alta concentrazione di glucosio nel sangue) GLICOSURIA (glucosio nelle urine)
- 6. Tipo di diabete Patogenesi Manifestaz. cliniche Trattamento Insulino- Dipendente (IDDM) o Tipo I Distruzione autoimmune cellule 硫 (autoanticorpi anti-insulina/cell. 硫 nel 95% dei casi) Deficit insulinico assoluto (risp. a glucagone): gluco-neogenesi e lipolisi chetosi Poliuria polidipsia polifagia dimagrimento chetosi acidosi Coma chetoacidosico Insulina, dieta, attivit fisica, monitoraggio glicemia: auto-test 3xdie glicemia a digiuno Hb glicosilata ogni 4- 6 mesi Insulino- indipendente (NIDDM) o Tipo II Insulino-resistenza associata a ridotta secrez. insulinica Deficit insulinico relativo (no chetoacidosi) Asintomatico, esordio graduale (faticabilit, infezioni ricorrenti, storia di diabete gestazionale) No chetosi Coma iperosmolare non acidosico Ipoglicemizzanti orali o insulina; dieta, regolare attivit fisica, monitoraggio: auto-test glicemia a digiuno Hb glicosilata ogni 4- 6 mesi
- 7. Definizione del diabete di tipo I (diabete mellito ) Il diabete mellito viene definito dalla presenza di una iperglicemia cronica, secondaria a un difetto di produzione e/o di azione dellinsulina. Liperglicemia cronica induce una serie di complicanze sistemiche che interessano in particolare occhi, reni, sistema cardiovascolare e sistema nervoso.
- 8. I markers del metabolismo glicidico Glicemia Variazioni fisiologiche (a digiuno 70-110 mg/dl; aumento post- prandiale, generalmente < 140 mg/dl; diminuzione con lesercizio fisico) Glicosuria Definizione: presenza di glucosio nelle urine Generalmente patologica, si verifica quando viene superata la soglia di riassorbimento renale del glucosio (circa 180 mg/dl) Se abbondante determina aumento del volume urinario poliuria (diuresi > 2500 cc/24h circa ) Emoglobina glicosilata (HbA1c) Frazione dellemoglobina capace di legare il glucosio, utilizzata come marker dei valori medi di glicemia nelle ultime settimane
- 12. nella reazione catalizzata dalla glucosio ossidasi (GOD), una flavoproteina di origine batterica preparata commercialmente da Aspergillus niger, il glucosio viene ossidato ad acido gluconico con produzione stechiometrica di H2O2 1 Glu + O2 + H2O Glu-COOH + 1 H2O2 la reazione della GOD viene accoppiata alla perossidasi (POD). L H2O2 viene scissa dalla POD in presenza di un accettore di O2 che si trasforma in un derivato colorato, la cui quantit viene determinata colorimetricamente (Assorbanza). Come accettori cromogenici di O2 vengono utilizzati derivati benzotiazolinici (ABTS) , oppure fenolo unitamente a 4- aminofenazone. 1 H2O2 H2O + 遜 O2 遜 O2 +ABTS 1 ABTS-O
- 14. La determinazione enzimatica della glicemia mediante GOD 竪 una metodica utilizzata nei sistemi di analisi automatizzata, gli Auto-Analyzers, che consentono di analizzare in successione numerosi campioni, prelevati automaticamente da una serie di contenitori. Sul metodo enzimatico la GOD-POD si basa anche luso di speciali cartine poste in commercio con nomi diversi Destrostix, Clinistix, B.M-test glucosio le quali bagnate con il campione da esaminare assumono colorazioni di diversa intensit, e raffrontate ad una scala cromatica standard permettono una lettura diretta ed immediata della concentrazione di glucosio nel campione. Sono utilizzate per la determinazione della glicosuria.
- 16. Sono anche di uso comune piccoli strumenti dedicati, che si possono considerare come dei biosensori selettivi per il glucosio, con i quali 竪 possibile rilevare molto rapidamente il valore della glicemia; vengono utilizzati correntemente e personalmente dai soggetti diabetici. Definizione di Biosensore: 竪 un dispositivo analitico che utilizza un mediatore biologico per rilevare selettivamente e con molta sensibilit, analiti chimici o biologici. Ci嘆 viene solitamente ottenuto accoppiando il mediatore biologico ad un opportuno sistema di trasduzione, il quale converte la risposta biochimica in un segnale fisico quantificabile e processabile.
- 17. Biosensori
- 18. Componenti di un Biosensore Biorecettore Trasduttore Processore Analita: microorganismi, oligonucleotidi, metaboliti, antigeni, anticorpi, proteine, enzimi, ioni. Biorecettore: microorganismi, recettori, antigeni, anticorpi, enzimi, tessuti, oligonucleotidi. Trasduttore: elettrochimico (intensit di corrente, potenziale, conducibilit), ottico (assorbanza), colorimetrico (temperatura), acustico (frequenza), piezoelettrico (frequenza di vibrazione).
- 20. Altri stumenti, come AccuCheck, sfruttano un enzima diverso ed un metodo diverso di rilevazione dei risultati. Lenzima 竪 la glucosio ossidasi che ossida il glucosio a gluconolattone. Per la rilevazione dei risultati si utilizza un trasduttore elettrochimico amperometrico; . GOD Glucosio + O2 H2O2 + acido gluconico i sensori amperometrici riescono a misurare la variazione della pressione parziale di ossigeno che viene consumato con la riduzione al catodo o l'ossidazione di H2O2 all'anodo . I sensori amperometrici pi湛 sviluppati per lanalisi del glucosio sono quelli in cui un anodo di platino polarizzato a circa 600mV rispetto ad un elettrodo di riferimento Elettrodi di Clark modificati
- 21. Sensori amperometrici Elettrodo AgAgcl A KCl Reazione del glucosio provoca una riduzione della presione parziale di O2 che viene misurata con lelettrodo di Clark Page 40 Elettrodo Pt KCl Membrana O2 Permeabile Strato Enzimatico Elettrodo Clark: corrente proporzionale alla pressione parziale di O2 Campione sangue
- 22. Esochinasi: Glu + ATP > Glu-6P + ADP Glu-6P deidrogenasiGlu-6P + NADP > 6P- gluconato + NADPH
- 23. di NADPH (338nm) Dosaggio della Glicemia Esochinasi/Glu6P deidrogenasi
- 24. Insulina Ormone peptidico (51 AA, PM = 5807 Da);Liberazione del peptide C con formazione di Insulina (2 catene; a = 30 AA + b = 21 AA), legate da 2 ponti disolfuro);Metodo di determinazione: Immunometrico (Ab monoclonali);Valori di riferimento = 6-100 mU/L;Test funzionali = TTGV = somministrare per i.v. 0,5mg/kg glucosio e misurare linsulina in fase 1 (1-3-5-10 min): la somma dellinsulina ad 1 e a 3 min 竪 > 100 mU/L in condizioni normali.
- 28. Alterazioni biochimiche dei tessuti secondarie alliperglicemia cronica Glicosilazione di numerosi proteine cellulari e extra-cellulari Emoglobina glicosilata e fruttosamina circolanti (markers di equilibrio glicemico) Glicosilazione di collagene e proteine a lunga vita con formazione di complessi AGE (Advanced Glycation End-products) che alterano la matrice vascolare contribuiscono a microangiopatia /glomerulopatia. Stress ossidativo Aumentata produzione di ione superossido a livello della catena respiratoria mitocondriale, di radicali liberi disfuzione endoteliale che favorisce lateroma e le sue complicanze. Aumentata produzione di sorbitolo (via dei polioli) Glucosio sorbitolo poco diffusibile rigonfiamento cellulare osmotico es: cataratta
- 29. Le complicanze del diabete La microangiopatia diabetica Alterazioni specifiche del microcircolo retinopatia, nefropatia e neuropatia diabetiche La macroangiopatia diabetica Ateromatosi precoce e diffusa complicanze cardiovascolari Altre complicanze Aumentata sensibilit alle infezioni Cataratta Piede diabetico
- 30. La microangiopatia diabetica 1. La RETINOPATIA diabetica Retinopatia semplice proliferativa Altre complicanze visive: glaucoma, cataratta.. oftalmopatia diabetica complessa con calo del visus 2. La NEFROPATIA diabetica Glomerulopatia diabetica IRC progressiva Fattori aggravanti: macroangiopatia e ipertensione 3. La NEUROPATIA diabetica Patogenesi mista: microangiopatia + danni metabolici diretti (polioli, alterazioni della mielina)
- 31. Emoglobina A1 + glucosio Emoglobina glicosilata A1c (non enzimatica)
- 33. Presentazione clinica del diabete di tipo 1 Rappresenta < 10 % dei casi di diabete Una patologia dell et evolutiva essenzialmente bambini e adolescenti, pi湛 raramente adulti giovani (90 % < 20 anni) Tipicamente magri Con laumento dellobesit infantile fino a 20-25 % dei nuovi casi sono obesi Esordio tipicamente subacuto/acuto Subacuto: poliurodipsia, dimagrimento Acuto: cheto-acidosi
- 34. Fisiopatologia del diabete di tipo 1 La carenza insulinica determina lincapacit delle cellule (in particolare adipose e muscolari) ad utilizzare il glucosio, con 2 conseguenze immediate: 1. Accumulo di glucosio nel plasma iperglicemia marcata superamento della soglia renale di riassorbimento glicosuria poliuria 2. Utilizzo di fonti alternative di energia Riserve lipidiche perdita di massa grassa Riserve proteiche perdita di massa magra (muscolare) Nella cheto-acidosi diabetica si associano carenza insulinica e iperproduzione di glucagone dimagrimento
- 35. insulina circolante in diabete di tipo I trattato = Insulina esogena + insulina endogena Come distinguerle? Insulina esogenaConc. insulina endogena = Conc. peptide C
- 36. Tipo di diabete Patogenesi Manifestaz. cliniche Trattamento Insulino- Dipendente (IDDM) o Tipo I Distruzione autoimmune cellule 硫 (autoanticorpi anti-insulina/cell. 硫 nel 95% dei casi) Deficit insulinico assoluto (risp. a glucagone): gluco-neogenesi e lipolisi chetosi Poliuria polidipsia polifagia dimagrimento chetosi acidosi Coma chetoacidosico Insulina, dieta, attivit fisica, monitoraggio glicemia: auto-test 3xdie glicemia a digiuno Hb glicosilata ogni 4- 6 mesi Insulino- indipendente (NIDDM) o Tipo II Insulino-resistenza associata a ridotta secrez. insulinica Deficit insulinico relativo (no chetoacidosi) Asintomatico, esordio graduale (faticabilit, infezioni ricorrenti, storia di diabete gestazionale) No chetosi Coma iperosmolare non acidosico Ipoglicemizzanti orali o insulina; dieta, regolare attivit fisica, monitoraggio: auto-test glicemia a digiuno Hb glicosilata ogni 4- 6 mesi
- 37. Fisiopatologia del diabete di tipo 2 Caratterizzato da 2 elementi essenziali Insulino-resistenza: inadeguata utilizazione del glucosio da parte delle cellule, che non rispondono normalmente alla stimolazione insulinica; il difetto pu嘆 essere di tipo pre- recettoriale, recettoriale o post-recettoriale. Difetto della 硫-cellula: anche se inizialmente relativo (la secrezione insulinica 竪 a lungo conservata), 竪 ormai ammesso che linsorgenza del diabete di tipo 2 竪 legata a una produzione di insulina insufficiente a compensare la resistenza insulinica
- 38. Fattori di rischio per il diabete di tipo 2 Il diabete di tipo 2 竪 il pi湛 frequente (> 90 % dei casi di diabete) Tipicamente caratteristico dell et matura (> 40 anni), interessa pazienti sempre pi湛 giovani Fattori di rischio Familiarit ++ (ereditariet multigenica) Et Obesit Stile di vita: alimentazione e sedentariet Patologie associate (frequenti) Dislipidemia, sindrome metabolica..
- 41. MICROINFUSOREMICROINFUSORE Pompa per linfusione di insulina, costituita da: COMPUTER che consente la programmazione di 48 diverse velocit di infusione SISTEMA DI INFUSIONE: pistone siringa che eroga insulina (analogo ad azione rapida) in un piccolo catetere di Teflon da posizionare sottocute mediante un ago introduttore rimovibile