際際滷

際際滷Share a Scribd company logo

ALGA COKLAT

Download as DOCX, PDF
Achmad Fathony
Achmad Fathony

Ekstraksi pigmen klorofil a dari alga coklat dilakukan dengan maserasi menggunakan pelarut metanol dan aseton. Kromatografi kolom dan KLT digunakan untuk memisahkan komponen pigmen. Spektrofotometer UV-Vis dan LC-MS digunakan untuk mengidentifikasi klorofil a berdasarkan panjang gelombang dan bobot molekulnya.

1 of 2
Download to read offline
INPUT Alga Coklat Ciri-ciri: - Talus (thallus) dipakai untuk menyatakan jaringan yang tidak berdiferensiasi (masih belum bisa dibedakan bagian-bagiannya). - Memiliki warna thallus merah, cokelat, hingga hijau - Komposisi kimia Alga coklat karbohidrat 19, 06 % Protein 5,53 % Lemak 0,74 % Air 11,71 % Serat kasar 28,39 % - Dinding sel mengandung cellulose akan rusak apabila terkena sifat asam, hemicelulose akan rusak jika terkena basa dan pectin yang tidak larut dalam pelarut organik tetapi larut dalam air panas. - Pigmen klorofil pada alga coklat terdapat dalam kloroplas. klorofil a Ciri-ciri: - Memiliki rumus C55H72O5N4Mg - Berikatan dengan grup metil (-CH3) - Terdapat didalam kloroplas dan didalam sel alga coklat - Pigmen utama pada tumbuhan yang berwarna hijau - Mempunyai 了 430, 616, 662 nm dalam pelarut aseton (polar) - Dalam funsinya klorofil a dapat mengoptimalkan fungsi metabolik, sistem imunitas, detoksifikasi, menyeimbangkan hormon, meredakan radang, antioksidan, antikanker dan sebagai fotosensitizer (terapi fotodinamika terhadap tumor dan kanker) - Struktur klorofil memiliki kesamaan struktur dengan hemoglobin. Perbedaanya terletak pada atom pusat dari molukel. Atom pusat klorofil adalah Mg (Magnesium) sedang atom pusat hemoglobin adalah Fe (Besi). - Klorofil dapat berubah warna menjadi coklat akibat substitusi magnesium oleh hidrogen membentuk peopitin, dan reaksi dapat berjalan lebih cepat pada larutan yang bersifat asam. PROSES Ekstraksi Pigmen - Perendaman sampel pelarut masuk konsentrasi didalam dan diluar sel berbeda terjadi pemecahan dinding sel merusak membran memutus sel lamella tengah zat aktif dalam bahan keluar. - Ekstraksi dilakukan dengan cara maserasi bertingkat yaitu dengan cara perendaman metanol : aseton dengan perbandingan (7:3v/v) selama 2x24 jam - Prinsip maserasi adalah perendaman sampel dengan pelarut organik - Pemberian methanol yaitu karena methanol dapat melarutkan semua bahan organic dalm bahan, sedangkan aseton berfungsi untuk mengangkat pigmen yang bersifat semi-polar - Maserasi adalah proses perendaman sampel dengan pelarut organic yang dilakukan pada temperature ruangan - Proses perendaman dalam maserasi sangat menguntungkan dalam isolasi senyawa bahan alam karena dalam perendaman sampel tumbuhan akan terjadi pemecahan dinding dan membrane sel akibat perbedaan tekanan antara didalam dan diluar sehingga metabolit sekunder yang ada dalam sitoplasma akan terlarut dalam pelarut organic dan ekstraksi senyawa akan sempurna karena dapat diatur lama perendaman dilakukan. Fraksinasi - Penggunaan dietil eter (non-polar) melarutkan sampel (pigmen) yang cenderung bersifat non polar massa jenis dietil lebih ringan daripada air sehingga senyawa organik yang larut dalam dietil eter berada dibagian atas. - Tujuan fraksinasi adalah agar terbentuk dua lapisan berdasarkan 2 jenis(berat jenis tinggi berada di bawah dan untuk berat jenis yang rendah berada di atas). - Fase atas diambil karena mengandung banyak pigmen - Pelarut di uapkan menggunakan rotary vacuum evaporator selanjutnya filtrat di pindahkan kedalam botol sampel untuk di uapkan dengan gas nitrogen Kromatografi Kolom - Metode yang digunakan untuk pemurnian senyawa dari campuran beberapa komponen lainnya berdasarkan retensi warna dan interaksinya selama pergerakan fase diam oleh fase gerak. - Fase diam merupakan salah satu komponen penting karena dengan adanya interaksi dengan fase diamlah terjadi perbedaan waktu retansi dan terpisahnya komponen senyawa. - Fase gerak merupakan pembawa senyawa. - Warna kuning merupakan betakaroten, warna hijau biru merupakan klorofil a, hijau kuning merupakan klorofil b dan warna kuning orange merupakan fukosantin. Kromatografi Lapis Tipis (KLT) - Fase diam (polar) fase gerak (non polar) penotolan sampel daya serap fase diam dan daya kapilaritas total warna bergerak naik (daya serap fase diam terhadap komponen kimia tidak sama, sehingga komponen kimia dapat bergerak dengan kecepatan berbeda berdasarkan tingkat kepolarannya). - Digunakan untuk mengetahui tingkat kemurnian senyawa hasil isolasi. - Prinsip kerjanya memisahkan sampel bedasarkan perbedaan kepolaran antara sampel dengan pelarut yang digunakan - POLARITAS Adalah sifat fisis kelistrikan karena ada dua kutub yang berbeda muatannya - Ikatan polar terjadi jika pasangan elektron yang digunakan bersama lebih tertarik dengan salah satu atom . Contoh: HCl;HBr;NH3;H2O - Ikatan non polar terjadi jika dua atom yang berikatan sama-sama tidak bermuatan. Pasangan elektron yang digunakan terletak pada garis asimetri. Contoh: ikatan dalam molekul unsur H2, Cl2 - Senyawapolar: senyawaiondansenyawakovalen polar - Senyawanonpolar:senyawayangmempunyai resultansemuamomendipolsamadengannol - Semakin dekat kepolaran antara sampel dengan eluen maka sampel akan semakin terbawa oleh fase gerak tersebut.
- Identifikasi pigmen secara kualitatif ditempuh dengan cara meng hitung nilai Rf atau Retardation factor - Ketebalan warna totol menunjukkan kualitas pigmen - Banyaknya spot menunjukkan jumlah pigmen minimal yang terdapat dalam ekstrak. Spektrofotometer UV-Vis - Beerdan lambertmenemukanhukumyang menerangkaninteraksi bahankimiadengan gelombangcahaya - mengukurtransmitansatauabsorbanssuatu contohyang dinyatakandalamfungsi panjang gelombang - Prinsipkerjaspektrofotometeradalahbilacahaya (monokromatikmaupuncampuran) jatuhpada suatumediumhomogen,sebagiandari sinar masukakan dipantulkan,sebagiandi serapdalam mediumitu,dansisanyaditeruskan - Analisa kuantitatif dan semi-kualitatif - Berhubungan dengan pengukuran jauhnya pengabsorbansian energy cahaya oleh suatu system kimia dari suatu unsure atau senyawa - Panjang gelombang absorbans tertinggi merupakan panjang gelombang maksimumnya - Panjang gelombang maksimum absorptifitas molar dapat dihitung dengan hukum lambert-beer Identifikasi Klorofil dengan LC-MS - Sampel diuapkan pada suhu tertentu diionisasi (ESI positif maupun ESI negatif) ion yang terbentuk difragmentasi sesuai dengan rasio massa/muatan (m/z) secara dielektik. - Teknik kombinasi pemisahan antara kromatografi cair menggunakan deteksi spektrofotometri massa - Dapat digunakan untuk senyawa-senyawa dengan titik lebur tinggi, berat molekul besar, termolabil dan non termolabil. - Electrospray Ionization (ESI) adalah teknik yang digunakan pada spektrofotometer massa untuk menghasilkan ion. - Ada dua macam mode ionisasi ESI-MS yaitu mode ion positif dan mode ion negatif. Pada mode ion positif terjadi penambahan satu proton (ion hidrogen) [M+H]+sedang pada mode ion negatif terjadi kehilangan satu proton [M-H] OUTPUT - Klorofil mudah teroksidasi terutama bila terdedahkan di udara pada plat KLT. Pada waktu mengekstrak, larutan klorofil a harus disimpan di tempat gelap dan idealnya harus disimpan pada suhu rendah dalam lingkungan gas nitrogen. Untuk pelarut harus selalu digunakan pelarut yang bebas peroksida (Harborne, 1996 ). - Penelitian kromatografi kolom didapat 4 komponen senyawa berdasarkan warna yaitu kuning merupakan betakaroten, hijau biru merupakan klorofil a, hijau kuning merupakan klorofil b, dan kuning orange merupakan fukosantin - Penelitian kromatografi lapis tipis dan pola spectra pigmen klorofil a sebelumnya telah dilakukan oleh Jeffrey, et al., (1997), dihasilkan pigmen klorofil a berwarna hijau biru dengan panjang gelombang pigmen klorofil dalam pelarut aseton 429 nm, 661,5 nm, dan 614,5 nm. Jeffrey et al., (2004) menyatakan serapan maksimum klorofil a yaitu 662.1, 616.5 dan 430. dan Pangestuti et al., (2008) menyatakan bahwa nilai Rf klorofil a memiliki kisaran Rf 0,38-0,42. - Identifikasi klorofil a dengan Spektrofotometer UV-Vis - Suatu spektrofotometer UV-Vis dapat mengukur dan merekam spektrum serapan senyawa tumbuhan dalam bentuk larutan. Spektrum tampak terentang panjang dari 400 nm (ungu) sampai 750 nm (merah), sedangkan spektrum ultraviolet terentang dari 100 nm sampai 400 nm (Fessenden dan Fessenden, 1994) - Identifikasi klorofil a dengan LC-MS - Ada 2 macam mode ionisasi ESI-MS yaitu mode ion positif dimana ada penambahan satu proton (ion hidrogen) [M+H]+ atau kation yang lain seperti ion sodium [M+Na]+ dan mode ion negatif yang kehilangan satu proton [M-H], akan tetapi seringkali ditemukan ionisasi ganda [M+nH]n+ (Wahyuni, 2009) - klorofil a dengan bobot molekul 911,27 m/z, dimana puncak ini diduga sebagai klorofil dengan penambahan molekul air dan puncak pertama 909,27 m/z, adalah klorofil a yang kehilangan molekul air (dehidro klorofil a). Kardono dkk., (2006) mengemukakan bahwa puncak ke-3 dan ke-4 adalah atom Na kelimpahan isotop.

More Related Content

ALGA COKLAT

  • 1. INPUT Alga Coklat Ciri-ciri: - Talus (thallus) dipakai untuk menyatakan jaringan yang tidak berdiferensiasi (masih belum bisa dibedakan bagian-bagiannya). - Memiliki warna thallus merah, cokelat, hingga hijau - Komposisi kimia Alga coklat karbohidrat 19, 06 % Protein 5,53 % Lemak 0,74 % Air 11,71 % Serat kasar 28,39 % - Dinding sel mengandung cellulose akan rusak apabila terkena sifat asam, hemicelulose akan rusak jika terkena basa dan pectin yang tidak larut dalam pelarut organik tetapi larut dalam air panas. - Pigmen klorofil pada alga coklat terdapat dalam kloroplas. klorofil a Ciri-ciri: - Memiliki rumus C55H72O5N4Mg - Berikatan dengan grup metil (-CH3) - Terdapat didalam kloroplas dan didalam sel alga coklat - Pigmen utama pada tumbuhan yang berwarna hijau - Mempunyai 了 430, 616, 662 nm dalam pelarut aseton (polar) - Dalam funsinya klorofil a dapat mengoptimalkan fungsi metabolik, sistem imunitas, detoksifikasi, menyeimbangkan hormon, meredakan radang, antioksidan, antikanker dan sebagai fotosensitizer (terapi fotodinamika terhadap tumor dan kanker) - Struktur klorofil memiliki kesamaan struktur dengan hemoglobin. Perbedaanya terletak pada atom pusat dari molukel. Atom pusat klorofil adalah Mg (Magnesium) sedang atom pusat hemoglobin adalah Fe (Besi). - Klorofil dapat berubah warna menjadi coklat akibat substitusi magnesium oleh hidrogen membentuk peopitin, dan reaksi dapat berjalan lebih cepat pada larutan yang bersifat asam. PROSES Ekstraksi Pigmen - Perendaman sampel pelarut masuk konsentrasi didalam dan diluar sel berbeda terjadi pemecahan dinding sel merusak membran memutus sel lamella tengah zat aktif dalam bahan keluar. - Ekstraksi dilakukan dengan cara maserasi bertingkat yaitu dengan cara perendaman metanol : aseton dengan perbandingan (7:3v/v) selama 2x24 jam - Prinsip maserasi adalah perendaman sampel dengan pelarut organik - Pemberian methanol yaitu karena methanol dapat melarutkan semua bahan organic dalm bahan, sedangkan aseton berfungsi untuk mengangkat pigmen yang bersifat semi-polar - Maserasi adalah proses perendaman sampel dengan pelarut organic yang dilakukan pada temperature ruangan - Proses perendaman dalam maserasi sangat menguntungkan dalam isolasi senyawa bahan alam karena dalam perendaman sampel tumbuhan akan terjadi pemecahan dinding dan membrane sel akibat perbedaan tekanan antara didalam dan diluar sehingga metabolit sekunder yang ada dalam sitoplasma akan terlarut dalam pelarut organic dan ekstraksi senyawa akan sempurna karena dapat diatur lama perendaman dilakukan. Fraksinasi - Penggunaan dietil eter (non-polar) melarutkan sampel (pigmen) yang cenderung bersifat non polar massa jenis dietil lebih ringan daripada air sehingga senyawa organik yang larut dalam dietil eter berada dibagian atas. - Tujuan fraksinasi adalah agar terbentuk dua lapisan berdasarkan 2 jenis(berat jenis tinggi berada di bawah dan untuk berat jenis yang rendah berada di atas). - Fase atas diambil karena mengandung banyak pigmen - Pelarut di uapkan menggunakan rotary vacuum evaporator selanjutnya filtrat di pindahkan kedalam botol sampel untuk di uapkan dengan gas nitrogen Kromatografi Kolom - Metode yang digunakan untuk pemurnian senyawa dari campuran beberapa komponen lainnya berdasarkan retensi warna dan interaksinya selama pergerakan fase diam oleh fase gerak. - Fase diam merupakan salah satu komponen penting karena dengan adanya interaksi dengan fase diamlah terjadi perbedaan waktu retansi dan terpisahnya komponen senyawa. - Fase gerak merupakan pembawa senyawa. - Warna kuning merupakan betakaroten, warna hijau biru merupakan klorofil a, hijau kuning merupakan klorofil b dan warna kuning orange merupakan fukosantin. Kromatografi Lapis Tipis (KLT) - Fase diam (polar) fase gerak (non polar) penotolan sampel daya serap fase diam dan daya kapilaritas total warna bergerak naik (daya serap fase diam terhadap komponen kimia tidak sama, sehingga komponen kimia dapat bergerak dengan kecepatan berbeda berdasarkan tingkat kepolarannya). - Digunakan untuk mengetahui tingkat kemurnian senyawa hasil isolasi. - Prinsip kerjanya memisahkan sampel bedasarkan perbedaan kepolaran antara sampel dengan pelarut yang digunakan - POLARITAS Adalah sifat fisis kelistrikan karena ada dua kutub yang berbeda muatannya - Ikatan polar terjadi jika pasangan elektron yang digunakan bersama lebih tertarik dengan salah satu atom . Contoh: HCl;HBr;NH3;H2O - Ikatan non polar terjadi jika dua atom yang berikatan sama-sama tidak bermuatan. Pasangan elektron yang digunakan terletak pada garis asimetri. Contoh: ikatan dalam molekul unsur H2, Cl2 - Senyawapolar: senyawaiondansenyawakovalen polar - Senyawanonpolar:senyawayangmempunyai resultansemuamomendipolsamadengannol - Semakin dekat kepolaran antara sampel dengan eluen maka sampel akan semakin terbawa oleh fase gerak tersebut.
  • 2. - Identifikasi pigmen secara kualitatif ditempuh dengan cara meng hitung nilai Rf atau Retardation factor - Ketebalan warna totol menunjukkan kualitas pigmen - Banyaknya spot menunjukkan jumlah pigmen minimal yang terdapat dalam ekstrak. Spektrofotometer UV-Vis - Beerdan lambertmenemukanhukumyang menerangkaninteraksi bahankimiadengan gelombangcahaya - mengukurtransmitansatauabsorbanssuatu contohyang dinyatakandalamfungsi panjang gelombang - Prinsipkerjaspektrofotometeradalahbilacahaya (monokromatikmaupuncampuran) jatuhpada suatumediumhomogen,sebagiandari sinar masukakan dipantulkan,sebagiandi serapdalam mediumitu,dansisanyaditeruskan - Analisa kuantitatif dan semi-kualitatif - Berhubungan dengan pengukuran jauhnya pengabsorbansian energy cahaya oleh suatu system kimia dari suatu unsure atau senyawa - Panjang gelombang absorbans tertinggi merupakan panjang gelombang maksimumnya - Panjang gelombang maksimum absorptifitas molar dapat dihitung dengan hukum lambert-beer Identifikasi Klorofil dengan LC-MS - Sampel diuapkan pada suhu tertentu diionisasi (ESI positif maupun ESI negatif) ion yang terbentuk difragmentasi sesuai dengan rasio massa/muatan (m/z) secara dielektik. - Teknik kombinasi pemisahan antara kromatografi cair menggunakan deteksi spektrofotometri massa - Dapat digunakan untuk senyawa-senyawa dengan titik lebur tinggi, berat molekul besar, termolabil dan non termolabil. - Electrospray Ionization (ESI) adalah teknik yang digunakan pada spektrofotometer massa untuk menghasilkan ion. - Ada dua macam mode ionisasi ESI-MS yaitu mode ion positif dan mode ion negatif. Pada mode ion positif terjadi penambahan satu proton (ion hidrogen) [M+H]+sedang pada mode ion negatif terjadi kehilangan satu proton [M-H] OUTPUT - Klorofil mudah teroksidasi terutama bila terdedahkan di udara pada plat KLT. Pada waktu mengekstrak, larutan klorofil a harus disimpan di tempat gelap dan idealnya harus disimpan pada suhu rendah dalam lingkungan gas nitrogen. Untuk pelarut harus selalu digunakan pelarut yang bebas peroksida (Harborne, 1996 ). - Penelitian kromatografi kolom didapat 4 komponen senyawa berdasarkan warna yaitu kuning merupakan betakaroten, hijau biru merupakan klorofil a, hijau kuning merupakan klorofil b, dan kuning orange merupakan fukosantin - Penelitian kromatografi lapis tipis dan pola spectra pigmen klorofil a sebelumnya telah dilakukan oleh Jeffrey, et al., (1997), dihasilkan pigmen klorofil a berwarna hijau biru dengan panjang gelombang pigmen klorofil dalam pelarut aseton 429 nm, 661,5 nm, dan 614,5 nm. Jeffrey et al., (2004) menyatakan serapan maksimum klorofil a yaitu 662.1, 616.5 dan 430. dan Pangestuti et al., (2008) menyatakan bahwa nilai Rf klorofil a memiliki kisaran Rf 0,38-0,42. - Identifikasi klorofil a dengan Spektrofotometer UV-Vis - Suatu spektrofotometer UV-Vis dapat mengukur dan merekam spektrum serapan senyawa tumbuhan dalam bentuk larutan. Spektrum tampak terentang panjang dari 400 nm (ungu) sampai 750 nm (merah), sedangkan spektrum ultraviolet terentang dari 100 nm sampai 400 nm (Fessenden dan Fessenden, 1994) - Identifikasi klorofil a dengan LC-MS - Ada 2 macam mode ionisasi ESI-MS yaitu mode ion positif dimana ada penambahan satu proton (ion hidrogen) [M+H]+ atau kation yang lain seperti ion sodium [M+Na]+ dan mode ion negatif yang kehilangan satu proton [M-H], akan tetapi seringkali ditemukan ionisasi ganda [M+nH]n+ (Wahyuni, 2009) - klorofil a dengan bobot molekul 911,27 m/z, dimana puncak ini diduga sebagai klorofil dengan penambahan molekul air dan puncak pertama 909,27 m/z, adalah klorofil a yang kehilangan molekul air (dehidro klorofil a). Kardono dkk., (2006) mengemukakan bahwa puncak ke-3 dan ke-4 adalah atom Na kelimpahan isotop.