際際滷

際際滷Share a Scribd company logo

Isolasi dna gyshaa

Download as PPTX, PDF
Gyshaa Annishaa
Gyshaa Annishaa
1 of 17
Uswatunnisa (105040200111114) Senin, 11.00 (Ass. Gita)
Pemisahan materi DNA dari komponen-komponen sel lainnya
Visualisasi DNA dengan elektroforesis gel, Peninjauan pola fragmen DNA hasil pemotongan secara enzimatik melalui teknik Hibridisasi Southern, Isolasi DNA genomik dalam rangka pembuatan pustaka genomik, Isolasi DNA yang diperlukan sebagai cetakan (template) dalam prosedur perbanyakan DNA secara in vitro melalui teknik PCR
Alat Bahan Mortar dan pestle Daun Kakao Gelas ukur Nitrogen cair dan PVP Oven CTAB dan 硫 mercaptoetanol Pipet tetes CIA/CHISAM Tube Isopropanol Sentrifuse Buffer pencuci Kulkas TE RNA se Ethanol
Siapkan alat dan bahan Timbang bahan (daun cacao) 0,3 gr. Tambahkan N2 cair (suhu - 168甬C), tumbuk hingga halus menggunakan mortar & pestle
Masukkan CTAB 1ml terlebih dahulu ke dalam tip Tambahan bahan yang sudah ditumbuk halus Tambahkan 硫 mercaptoetanol vortex bahan agar semua bahan larut dan menjadi homogen
Inkubasi dengan suhu 賊 65甬C selama 30 menit Balik tabung tiap 15 menit agar bahan tercampur rata.
Tambahkan CIA/CHISAM 700 mikroLiter lalu kembali di Vortex Sentrifugasi pertama dengan 6000 rpm selama 10 menit Tambahkan CIA/CHISAM 700 mikroliter pada supernatan DNA
Sentrifugasi kedua dengan 6000 rpm selama 10 menit Supernatan ditambahkan isopropanol dingin 300 mikroliter Inkubasi freezer selama 30 menit
Sentrifugasi ketiga dengan 1200 rpm selama 5 menit DNA pellet ditambahi buffer pencuci 2x. Masing- masing 300 mikroliter
Resuspensi dengan TE 100 mikroliter Ditambah dengan RNA se 2 mikroliter Inkubasi kurang lebih 37尊C selama 30 menit
Tambahkan ethanol dingin 300 mikroliter Sentrifuse dengan 1200 rpm selama 5 menit DNA pellet diresuspensi TE 50 mikroliter Elektroforensis
Elektroforesis Prinsip Dasar: memisahkan molekul berdasarkan berat molekulnya menggunakan aliran listrik (lewat pori-pori gel Elektroforesis) Kualitas DNA 1. Berat Molekul 2. Kemurnian Molekul
Spektrofotometer Menggunakan serapan gelombang Komponen akan mengendap sesuai beratnya.
Denaturasi. Dilakukan pada suhu 92-95尊C. Proses ini merupakan perombakan ikatan hidrogen (double- single) Annealing. Dilakukan pada suhu 50-55尊C. Proses ini merupakan penempelan primer Elongation. Dilakukan pada suhu 72尊C. Proses ini merupakan pemanjangan rantai DNA sesuai urutan basa primernya
DNA template Enzim Tag dNTP Primer NFW (Nuclease Free Water) Buffer PCR MgCL2
Uswatunnisa (105040200111114) Senin, 11.00 (Ass. Gita)

More Related Content

Isolasi dna gyshaa

  • 2. Pemisahan materi DNA dari komponen-komponen sel lainnya
  • 3. Visualisasi DNA dengan elektroforesis gel, Peninjauan pola fragmen DNA hasil pemotongan secara enzimatik melalui teknik Hibridisasi Southern, Isolasi DNA genomik dalam rangka pembuatan pustaka genomik, Isolasi DNA yang diperlukan sebagai cetakan (template) dalam prosedur perbanyakan DNA secara in vitro melalui teknik PCR
  • 4. Alat Bahan Mortar dan pestle Daun Kakao Gelas ukur Nitrogen cair dan PVP Oven CTAB dan 硫 mercaptoetanol Pipet tetes CIA/CHISAM Tube Isopropanol Sentrifuse Buffer pencuci Kulkas TE RNA se Ethanol
  • 5. Siapkan alat dan bahan Timbang bahan (daun cacao) 0,3 gr. Tambahkan N2 cair (suhu - 168甬C), tumbuk hingga halus menggunakan mortar & pestle
  • 6. Masukkan CTAB 1ml terlebih dahulu ke dalam tip Tambahan bahan yang sudah ditumbuk halus Tambahkan 硫 mercaptoetanol vortex bahan agar semua bahan larut dan menjadi homogen
  • 7. Inkubasi dengan suhu 賊 65甬C selama 30 menit Balik tabung tiap 15 menit agar bahan tercampur rata.
  • 8. Tambahkan CIA/CHISAM 700 mikroLiter lalu kembali di Vortex Sentrifugasi pertama dengan 6000 rpm selama 10 menit Tambahkan CIA/CHISAM 700 mikroliter pada supernatan DNA
  • 9. Sentrifugasi kedua dengan 6000 rpm selama 10 menit Supernatan ditambahkan isopropanol dingin 300 mikroliter Inkubasi freezer selama 30 menit
  • 10. Sentrifugasi ketiga dengan 1200 rpm selama 5 menit DNA pellet ditambahi buffer pencuci 2x. Masing- masing 300 mikroliter
  • 11. Resuspensi dengan TE 100 mikroliter Ditambah dengan RNA se 2 mikroliter Inkubasi kurang lebih 37尊C selama 30 menit
  • 12. Tambahkan ethanol dingin 300 mikroliter Sentrifuse dengan 1200 rpm selama 5 menit DNA pellet diresuspensi TE 50 mikroliter Elektroforensis
  • 13. Elektroforesis Prinsip Dasar: memisahkan molekul berdasarkan berat molekulnya menggunakan aliran listrik (lewat pori-pori gel Elektroforesis) Kualitas DNA 1. Berat Molekul 2. Kemurnian Molekul
  • 15. Denaturasi. Dilakukan pada suhu 92-95尊C. Proses ini merupakan perombakan ikatan hidrogen (double- single) Annealing. Dilakukan pada suhu 50-55尊C. Proses ini merupakan penempelan primer Elongation. Dilakukan pada suhu 72尊C. Proses ini merupakan pemanjangan rantai DNA sesuai urutan basa primernya
  • 16. DNA template Enzim Tag dNTP Primer NFW (Nuclease Free Water) Buffer PCR MgCL2

Editor's Notes

  1. Sumber: http://id.shvoong.com/medicine-and-health/genetics/2040101-isolasi-dna/#ixzz1QMP5JN3t
  2. Sumber:http://biologi.blogsome.com/2009/11/02/isolasi-dna/
  3. Nitrogen berfungsi membantu proses penggerusan daun karena dapat membekukan daun.
  4. Pada Sentrifugasi yang pertama didapatkan 3 lapisan, supernatan, sisa-sisa organel, dan fenol
  5. Hasil sentrifugasi kedua menghasilkan 2 lapisan. Supernatan dan CIA/CHISAM yang berupa bagian warna kuning.