際際滷

際際滷Share a Scribd company logo
Konfok叩ln鱈 mikroskopie Pavel Sv鱈til, Jan Kucha
Klasick叩 mikroskopie Pedpokl叩d叩 nekonen malou tlou邸泥ku prepar叩tu Pi zkoum叩n鱈 siln箪ch vzork哲 je kvalita zobrazen鱈 nep鱈zniv ovlivov叩na pekr箪v叩n鱈m obrazu roviny, do n鱈転 je mikroskop pr叩v zaosten, sneostr箪mi obrazy rovin le転鱈c鱈ch nad n鱈 apod n鱈.  Lze zkoumat jenvzorky otlou邸泥ce men邸鱈, ne転 je hloubka ostrosti objektivu, kter叩 z叩vis鱈 na jehonumerick辿 apertue (Z min  = 0,25 n了/NA 2 ).
Klasick叩 mikroskopie Obrazem bodu nen鱈 bod, ale tzv. Airyho krou転ky difrakn鱈 obrazec vznikaj鱈c鱈 ohybem zobrazuj鱈c鱈hose svtla na ok叩ch objektivu. Pi zobrazen鱈 bl鱈zk箪ch bod哲 se mohou jejich Airyhokrou転ky pekr箪vat, a転 se stanou t辿m nerozli邸iteln箪mi.
Zobrazen鱈 klasickou mikroskopi鱈 Apertura 0,03  Apertura 0,2
Vznik konfok叩ln鱈 mikroskopie Marvin Minsky 1957  patentoval n叩pad na konfok叩ln鱈 mikroskopii, ale nena邸el vhodn箪 zdroj svtal M. Petr叩 a M. Hadravsk箪 1967  Tandem Scanning Confocal Microscope  Koncem 70. Let  prvn鱈 spolehliv箪 konfok叩ln鱈 mikroskop srozm鱈tan箪m laserov箪m paprskem.
Laserov箪 rastrovac鱈 konfok叩ln鱈 mikroskop Osvtlen鱈: bodov箪 zdroj svtla (laserov箪 paprsek fokusovan箪 na clonu) Clona: je objektivem mikroskopuzobrazena na vzorek, do bodu opr哲mru rovnaj鱈c鱈m se rozli邸ovac鱈 schopnosti objektivu (difrakn鱈 mez).  Objektiv: sb鱈r叩 svtlo vzorkem odra転en辿 nebo rozpt箪len辿.  Zptn箪 pr哲chod objektivem: obraz bodov辿 clonky => foton叩sobi  Druh叩 konfok叩ln鱈 bodov叩 clonka, blokuj鱈c鱈
Princip 叩rkovan: paprsky jdouc鱈 z mimoohniskov箪ch rovin, zachycen辿 clonou.
Rastrov叩n鱈 rozm鱈t叩n鱈m laserov辿hopaprsku  p鱈n箪m posouv叩n鱈m vzorku ped objektivem posouv叩n鱈m objektivu nad vzorkem  Po鱈taov辿 zpracov叩n鱈:
Popis cel辿ho syst辿mu
V箪hody konfok叩ln鱈 mikroskopie Potlaen鱈 mlhav辿hopozad鱈 obrazu Optick叩 tomografie  Nen鱈 limitov叩na Rayleighov箪m kriteriem: (Obraz vznik叩 skl叩d叩n鱈m zjednotliv箪ch bod哲, kter辿 jsou nav鱈c pozorov叩ny pes clonku, jej鱈転 rozmry b箪vaj鱈 men邸鱈 ne転 pr哲mr Airyhokrou転k哲.)
Nev箪hody konfok叩ln鱈 mikroskopie Zat鱈転enost statistick箪m 邸umem, jeho転 velikost je 炭mrn叩 N/N, kde N je poet detegovan箪ch foton哲.  Nelze snadno e邸it zv箪邸en鱈m intenzity z叩en鱈 (Interakce s /fluorescenn鱈m/ prepar叩tem)
Po鱈taov辿 zpracov叩n鱈 Rastrovac鱈 algoritmizace Prostorov叩 rekonstrukce Tvorba stereoskopick箪ch p叩r哲 Fluorescence v re叩ln箪ch barv叩ch pomoc鱈 t鱈 foton叩sobi哲 (RGB)
Vyu転it鱈 konfok叩ln鱈 mikroskopie  technick辿 studium povrchov箪ch vlastnost鱈 materi叩l哲 mikrotesty tvrdosti kov哲 iplastick箪ch materi叩l哲 men鱈 se v箪邸ky strukturn鱈ch element哲 na polovodiov箪ch ipech  v reflexn鱈m modu zobrazov叩n鱈 se zkoum叩 textura aslo転en鱈 povrch哲 ieroze materi叩l哲.  zkoum叩n鱈 vlastnost鱈 nov箪ch polymer哲  testov叩n鱈 j鱈dla, kter辿 obsahuje velk辿 mno転stv鱈 vody, nebo oleje.
Vyu転it鱈 konfok叩ln鱈 mikroskopie  L辿kask辿 a biologick辿 studium slo転it辿 architektury neuronov箪ch s鱈t鱈 vmozkov辿 tk叩ni (Golgihometoda kontrastov叩n鱈 neuron哲 叩stekami st鱈bra) studium intracelul叩rn鱈 koncentrace fyziologicky v箪znamn箪ch iont哲 (nap. K + , Ca 2+ )  men鱈 membr叩nov辿ho potenci叩lu,  studium struktury typu zubn鱈 skloviny  men鱈 vnitrobunn辿ho pH. Imunofluorescenn鱈mi metodami: rozlo転en鱈 receptor哲 vmembr叩n叩ch, organizace cytoskeletu, mitotick箪 apar叩t
Srovn叩n鱈  A: nekonfok叩ln鱈 mikroskop B: konfok叩ln鱈 mikroskop
Srovn叩n鱈 2 Klasick箪 fluorescenn鱈 vs. konfok叩ln鱈 mikroskop
雨一叩噛一温
Literatura Ko叩rek: vod do klinick辿 cytogenetiky Jarom鱈r Pl叩邸ek: Konfok叩ln鱈 mikroskopie (in: Vesm鱈r, 1995/9) www.wikipedia.cz Str叩nky v箪robc哲 (Leica)

More Related Content

Konfokalni Mikroskopie

  • 1. Konfok叩ln鱈 mikroskopie Pavel Sv鱈til, Jan Kucha
  • 2. Klasick叩 mikroskopie Pedpokl叩d叩 nekonen malou tlou邸泥ku prepar叩tu Pi zkoum叩n鱈 siln箪ch vzork哲 je kvalita zobrazen鱈 nep鱈zniv ovlivov叩na pekr箪v叩n鱈m obrazu roviny, do n鱈転 je mikroskop pr叩v zaosten, sneostr箪mi obrazy rovin le転鱈c鱈ch nad n鱈 apod n鱈. Lze zkoumat jenvzorky otlou邸泥ce men邸鱈, ne転 je hloubka ostrosti objektivu, kter叩 z叩vis鱈 na jehonumerick辿 apertue (Z min = 0,25 n了/NA 2 ).
  • 3. Klasick叩 mikroskopie Obrazem bodu nen鱈 bod, ale tzv. Airyho krou転ky difrakn鱈 obrazec vznikaj鱈c鱈 ohybem zobrazuj鱈c鱈hose svtla na ok叩ch objektivu. Pi zobrazen鱈 bl鱈zk箪ch bod哲 se mohou jejich Airyhokrou転ky pekr箪vat, a転 se stanou t辿m nerozli邸iteln箪mi.
  • 4. Zobrazen鱈 klasickou mikroskopi鱈 Apertura 0,03 Apertura 0,2
  • 5. Vznik konfok叩ln鱈 mikroskopie Marvin Minsky 1957 patentoval n叩pad na konfok叩ln鱈 mikroskopii, ale nena邸el vhodn箪 zdroj svtal M. Petr叩 a M. Hadravsk箪 1967 Tandem Scanning Confocal Microscope Koncem 70. Let prvn鱈 spolehliv箪 konfok叩ln鱈 mikroskop srozm鱈tan箪m laserov箪m paprskem.
  • 6. Laserov箪 rastrovac鱈 konfok叩ln鱈 mikroskop Osvtlen鱈: bodov箪 zdroj svtla (laserov箪 paprsek fokusovan箪 na clonu) Clona: je objektivem mikroskopuzobrazena na vzorek, do bodu opr哲mru rovnaj鱈c鱈m se rozli邸ovac鱈 schopnosti objektivu (difrakn鱈 mez). Objektiv: sb鱈r叩 svtlo vzorkem odra転en辿 nebo rozpt箪len辿. Zptn箪 pr哲chod objektivem: obraz bodov辿 clonky => foton叩sobi Druh叩 konfok叩ln鱈 bodov叩 clonka, blokuj鱈c鱈
  • 7. Princip 叩rkovan: paprsky jdouc鱈 z mimoohniskov箪ch rovin, zachycen辿 clonou.
  • 8. Rastrov叩n鱈 rozm鱈t叩n鱈m laserov辿hopaprsku p鱈n箪m posouv叩n鱈m vzorku ped objektivem posouv叩n鱈m objektivu nad vzorkem Po鱈taov辿 zpracov叩n鱈:
  • 10. V箪hody konfok叩ln鱈 mikroskopie Potlaen鱈 mlhav辿hopozad鱈 obrazu Optick叩 tomografie Nen鱈 limitov叩na Rayleighov箪m kriteriem: (Obraz vznik叩 skl叩d叩n鱈m zjednotliv箪ch bod哲, kter辿 jsou nav鱈c pozorov叩ny pes clonku, jej鱈転 rozmry b箪vaj鱈 men邸鱈 ne転 pr哲mr Airyhokrou転k哲.)
  • 11. Nev箪hody konfok叩ln鱈 mikroskopie Zat鱈転enost statistick箪m 邸umem, jeho転 velikost je 炭mrn叩 N/N, kde N je poet detegovan箪ch foton哲. Nelze snadno e邸it zv箪邸en鱈m intenzity z叩en鱈 (Interakce s /fluorescenn鱈m/ prepar叩tem)
  • 12. Po鱈taov辿 zpracov叩n鱈 Rastrovac鱈 algoritmizace Prostorov叩 rekonstrukce Tvorba stereoskopick箪ch p叩r哲 Fluorescence v re叩ln箪ch barv叩ch pomoc鱈 t鱈 foton叩sobi哲 (RGB)
  • 13. Vyu転it鱈 konfok叩ln鱈 mikroskopie technick辿 studium povrchov箪ch vlastnost鱈 materi叩l哲 mikrotesty tvrdosti kov哲 iplastick箪ch materi叩l哲 men鱈 se v箪邸ky strukturn鱈ch element哲 na polovodiov箪ch ipech v reflexn鱈m modu zobrazov叩n鱈 se zkoum叩 textura aslo転en鱈 povrch哲 ieroze materi叩l哲. zkoum叩n鱈 vlastnost鱈 nov箪ch polymer哲 testov叩n鱈 j鱈dla, kter辿 obsahuje velk辿 mno転stv鱈 vody, nebo oleje.
  • 14. Vyu転it鱈 konfok叩ln鱈 mikroskopie L辿kask辿 a biologick辿 studium slo転it辿 architektury neuronov箪ch s鱈t鱈 vmozkov辿 tk叩ni (Golgihometoda kontrastov叩n鱈 neuron哲 叩stekami st鱈bra) studium intracelul叩rn鱈 koncentrace fyziologicky v箪znamn箪ch iont哲 (nap. K + , Ca 2+ ) men鱈 membr叩nov辿ho potenci叩lu, studium struktury typu zubn鱈 skloviny men鱈 vnitrobunn辿ho pH. Imunofluorescenn鱈mi metodami: rozlo転en鱈 receptor哲 vmembr叩n叩ch, organizace cytoskeletu, mitotick箪 apar叩t
  • 15. Srovn叩n鱈 A: nekonfok叩ln鱈 mikroskop B: konfok叩ln鱈 mikroskop
  • 16. Srovn叩n鱈 2 Klasick箪 fluorescenn鱈 vs. konfok叩ln鱈 mikroskop
  • 18. Literatura Ko叩rek: vod do klinick辿 cytogenetiky Jarom鱈r Pl叩邸ek: Konfok叩ln鱈 mikroskopie (in: Vesm鱈r, 1995/9) www.wikipedia.cz Str叩nky v箪robc哲 (Leica)