Osnovne tehnike staničnih kultura Book
- 1. Laboratorijska oprema za kulturu stanica Potrebne zalihe: • posude za kulturu stanica (tikvice, Petrijeve posude, ploče s više jažica) • pipete i motorizirani kontrolni pipet • šprice i igle • plastične epruvete za centrifugiranje • kriovi, krio-kutije, • filteri za špriceve i boce, • kontejneri za otpad, • deionizirana voda, • laboratorijska staklena posuđa • sredstva za dezinfekciju (izopropil ili 70% etanol, Na-hipoklorit)
- 2. Rad u aseptičnim uvjetima Slika 8. Raspored radnog područja. Primjer pravilnog rasporeda radnog prostora koji dopušta laminarni protok zraka. Tijekom manipulacije, na sredini radne površine, postavljaju se posude za kulturu stanica, dok se pipete postavljaju na lijevu stranu, a motorizirani regulator pipete je na desnoj strani.
- 3. Osnovni protokoli za staničnu subkultivaciju Subkultura adherentnih stanica • Vrijeme između ponovnog presađivanja (prolaz) varira s staničnom linijom i brzinom rasta Izvadite i bacite potrošeni medij za kulturu stanica iz posude za kulturu Odvojite stanice od proteolitičkih enzima (tripsin) i / ili mehaničkog (strugača) iz posude za kulturu Tripsin neutralizira Prikupljanje odvojenih stanica svježim medijem Nastavak uzgoja stanica u novoj posudi dok ne dostignu konfluenciju od 80 do 100%
- 4. Osnovni protokoli za staničnu subkultivaciju Subkultura suspenzijskih staničnih linija • Stanice s namjerom stvaranja agregata ili nakupina moraju biti prekinute u suspenziji pojedinačnih stanica za daljnju kultivaciju ili u svrhu brojanja stanica Pregledajte stanice i procijenite stanje Dodajte svježi medij za dobivanje odgovarajuće gustoće sjetve Nastavak kultivacije stanica u novoj posudi Ponovite svaka 2 do 3 dana
- 5. Osnovni protokoli za staničnu subkultivaciju Stanice suspenzije Adherentne stanice Lakše za kulturu, može se razrijediti bez uklanjanja svih starih medija Više koraka potrebnih za kulturu zahtijevaju potpunu promjenu medija Nemojte zahtijevati mehaničku ili kemijsku disocijaciju Zahtijevaju tripsinizaciju u subkulturi, stresna je za stanice Nije lako odrediti konfluenciju, zahtijevaju dnevni broj stanica Može se lako pregledati pod mikroskopom kako bi se odredila konfluencija Rast ograničen koncentracijom stanica Rast ograničen površinom Tablica 4. Usporedba subkultiviranja suspenzija i adherentnih staničnih kultura
- 6. Osnovni protokoli za subkultivaciju stanica Krioprezervacija stanica i tijek vuče •Uklonite medij centrifugiranjem • Sakupite stanice u hladne bočice • Dodajte hladne medije i krio- zaštitne tvari Priprema stanica za zamrzavanje • Polako stanice zamrzavaju na temperaturi od -1 ° C / min u hladnjaku Zamrzavanje stanica •Prenesite bočice na -80 ° C ili / i tekući dušik Dugoročno pohranjivanje Vučenje i oporavak stanica • Blago zagrijati u rukama • Razrijediti srednjom • Centrifugom i baciti mediju • Dodati svježi medij i prenijeti u posudu za kulturu stanica
- 7. Primjena kultura stanica Primjena kultura stanica Istraživanje raka virologiju Ispitivanje toksičnosti Proizvodnja cjepiva Genetski modificirani proteinZamjena tkiva ili organa Genetičko inženjerstvo Genetska terapija Probiranje lijekova i razvoj Modelni sustav