際際滷

際際滷Share a Scribd company logo
TR働畛NG 畉I H畛C NNG LM HU畉
KHOA C KH - CNG NGH畛
鏈
BI TI畛U LU畉N
PHN TCH D働 L働畛NG THU畛C B畉O V畛 TH畛C
V畉T. CH畉T KHNG SINH. CH畉T DI畛T KHU畉N.
畛C T畛 VI N畉M.
I: PHN TCH D働 L働畛NG THU畛C B畉O V畛 TH畛C V畉T
a. Ph動董ng ph叩p h坦a sinh
Ph動董ng ph叩p Enzym:
Nguy棚n t畉c: ng動畛i ta 達 x但y d畛ng c叩c ph動董ng ph叩p x叩c 畛nh d動 l動畛ng thu畛c
BVTV trong th畛c ph畉m v畛i 畛 nh畉y t畛 袖 g ng. ph動董ng ph叩p d畛a tr棚n c董 ch畉
畛c ch畉 畉c hi畛u gi畛a nh坦m l但n h畛u c董 ho畉c carbomat v畛i ChE. X叩c 畛nh s畛
gi畉m ho畉t 畛 c畛a ChE (% 畛c ch畉) khi c坦 m畉t c畛a ch畉t 畛c t畛 坦 c坦 th畛 t鱈nh
動畛c hm l動畛ng ch畉t 畛c c坦 trong m畉u.
Cholinesteraza ( ChE ) l enzym th畛y ph但n c叩c Esteaxyl c畛a cholin, n坦 坦ng
vai tr嘆 quan tr畛ng trong ho畉t 畛ng th担ng tin gi畛a c叩c t畉 bo trong c董 th畛 s畛ng,
畉c bi畛t l c叩c t畉 bo c畛a h畛 th畉n kinh. ChE b畛 k狸m h達m b畛i c叩c nh坦m thu畛c
l但n h畛u c董 v carbamat.
Ph動董ng ph叩p GT-test Kit:
Nguy棚n t畉c : d畛a vo 畉c t鱈nh 畛c ch畉 axetylcholinestearaza c畛a c叩c lo畉i thu畛c
tr畛 s但u nh坦m phospho h畛u c董 v carbomat. ph畉n Axetylcholinnesteraza t畛 do
(kh担ng b畛 畛c ch畉) s畉 th畛y ph但n Axetylcholin t畉o acid Axetic v cholin. d畛a vo
ph畉n 畛ng t畉o mu gi畛a Axetylcholin c嘆n th畛a v畛i thu畛c th畛 GT ta x叩c 畛nh
l動畛ng thu畛c BVTV trong rau qu畉.
1. C叩c ph動董ng ph叩p ti畉n hnh
b. Ph動董ng ph叩p sinh h畛c
但y l c叩c ph動董ng ph叩p 動畛c s畛 d畛ng 畛 ki畛m tra 畛c t畛 v c担n tr湛ng. Trong
ph畉n l畛n c叩c tr動畛ng h畛p ch炭ng 動畛c coi nh動 c叩c ph辿p th畛 畛nh t鱈nh. C叩c
ph動董ng ph叩p ny d動畛c s畛 d畛ng kh叩 ph畛 bi畉n
c. Ph動董ng ph叩p h坦a l箪
- Ph動董ng ph叩p c畛c ph畛: 但y l ph動董ng ph叩p c坦 畛 nh畉y cao
- Ph動董ng ph叩p quang ph畛: Th動畛ng 動畛c s畛 d畛ng 畛 nghi棚n c畛u v 畛nh
l動畛ng c叩c ch畉t BVTV
-Ph動董ng ph叩p so mu: c董 s畛 c畛a ph動董ng ph叩p d畛a vo ph畉n 畛ng t畉o ph畛c
mu 畉c tr動ng cho c叩c ch畉t BVTV.
- Ph動董ng ph叩p s畉c k箪: C叩c ph動董ng ph叩p hay d湛ng: s畉c k箪 gi畉y, s畉c k箪 b畉n
m畛ng, s畉c k箪 kh鱈 (GC), s畉c k箪 l畛ng hi畛u nng cao (HPLC).
畛ng d畛ng: 但y l ph動董ng ph叩p 畛nh l動畛ng m畛i, n坦 動畛c 畛ng d畛ng cho nhi畛u
lo畉i h坦a ch畉t BVTV kh叩c nhau. trong s畛 坦 動畛c d湛ng ph畛 bi畉n h董n c畉 l GC
2. Th畛c hnh
x叩c 畛nh hm l動畛ng h坦a ch畉t BVTV thu畛c nh坦m l但n h畛u c董
2.1 Nguy棚n t畉c: Khi 動畛c t叩ch chi畉t, h坦a ch畉t b畉o v畛 th畛c v畉t photpho-nit董
h畛u c董 動畛c x叩c 畛nh b畉ng s畉c k箪 kh鱈 (GC) tr畛c ti畉p v畛i detector FPD.
2.2 H坦a ch畉t:
 Axeton, diclomtan,ete petrol tinh khi畉t ph但n t鱈ch
 Natri sunfat khan tinh khi畉t
 Ch畉t chu畉n cho nh坦m ch畉t BVTV nh坦m photpho h畛u c董.
2.3 D畛ng c畛 v h坦a ch畉t:
 c但n ph但n t鱈ch d=10-4g
 m叩y nghi畛n m畉u;
 c但n k畛 thu畉t d=10-2g
 m叩y c担 quay ch但n kh担ng;
 h畛 th畛ng s畉c k箪 kh鱈 (GC) v畛i detector FPD;
ph畛u chi畉t.
2.4 C叩ch ti畉n hnh
X但y d畛ng 動畛ng chu畉n
 Dung d畛ch chu畉n g畛c 100 ppm.
C但n 0,01g ch畉t chu畉n cho vo b狸nh 畛nh m畉t 100ml, th棚m n-hexan 畉n v畉ch
m畛c.
 Dung d畛ch chu畉n lm vi畛c
 H炭t 0,5; 1,0; 2,0ml chu畉n g畛c 畛 tr棚n cho vo b狸nh d畛nh m畛c 10ml v pha
lo達ng t畛i v畉ch b畉ng n-hexan 動畛c c叩c n畛ng 畛 chu畉n t動董ng 畛ng l 5;10 v
20ppm.
 B董m vo m叩y, theo h動畛ng d畉n c畛a ph畉n m畛m 畛 l畉p 動畛ng chu畉n v x叩c
畛nh th畛i gian l動u, di畛n t鱈ch pic.
 Ti畉n hnh chi畉t m畉u
 m畉u 動畛c th叩i nh畛 v tr畛n i畛u c畉n th畉n. c畉n x叩c 畛nh 100g m畉u cho vo
b狸nh n坦n 250ml, th棚m 200ml aceton nghi畛n 畛ng nh畉t trong 1 ph炭t. l畛c qua
thi畉t b畛 l畛c ch但n kh担ng, thu d畛ch chi畉t trong b狸nh h炭t 500ml. Cho 800ml d畛ch l畛c
m畉u vo ph畛u chi畉t 1lit, th棚m 100ml ete petrol v 100ml diclometan,l畉c m畉nh
trong 1 ph炭t. L畛p h畛u c董 b棚n trong c畛a ph畛u chi畉t ban 畉u 棚 lam kh担 b畉ng
c叩ch cho ch畉y qua ph畛u l畛c 動畛ng k鱈nh 10cm c坦 ch畛a natri sunfat khan b棚n
tr棚n gi畉y l畛c, thu d畛ch l畛c vo b狸nh c担 quay.
R畛a l畛p natri sunfat b畉ng 50ml diclometan. C担 畉c v bay h董i ch畉m b畉ng m叩y
c担 quay ch但n kh担ng 畛 450C. Khi c担 畉c c嘆n kho畉ng 2ml, th棚m 10ml axeton v
l畉i c担 畉n c嘆n kho畉ng 2ml. L畉p l畉i vi畛c c担 畉c 2 l畉n v畛i 10ml axeton. Kh担ng
c担 kh担 畛 tr叩nh ph但n h畛y m畉u.
 Ph但n t鱈ch h畛n h畛p m畉u photpho h畛u c董 v natri h畛u c董
 H嘆a tan c畉n d畛ch kh担 畉n 10ml b畉ng axeton
 B董m 1 袖l dung d畛ch ny vo m叩y s畉c k箪 kh鱈, s畛 d畛ng detector FPD v畛i c叩c
i畛u ki畛n sau: c畛t SPB- 5 (30m x 0,25mm x 0,25袖m ). Nhi畛t 畛 c畛t: 500C (1
ph炭t), tng 200C/ph炭t -1200C, tng 500C/ngy-2500C. ch畉 畛 b董m: kh担ng
chia d嘆ng, t畛c 畛 1ml/ph炭t. 叩p su畉t khi mang 100kpa.
Xi : Hm l動畛ng h坦a ch畉t BVTV i c坦 trong 1kg m畉u (mg/kg)
Si: di畛n t鱈ch pic t動董ng 畛ng m畉u ch畉t i
m : kh畛i l動畛ng m畉u ph但n t鱈ch
V : th畛 t鱈ch d畛ch m畉u cu畛i c湛ng, ml
Sm : di畛n t鱈ch pic t動董ng 畛ng c畛a m畉u chu畉n c坦 ch畉t i
m: kh畛i l動畛ng m畉u l畉y ph但n t鱈ch, g
2.5 x畛 l箪 k畉t qu畉
So s叩nh th畛i gian l動u c畛a m畛i 畛nh so v畛i ch畉t chu畉n 畛 畛nh t鱈nh
So s叩nh di畛n t鱈ch ho畉c chi畛u cao c畛a m畛i pic v畛i pic chu畉n 畛 畛nh l動畛ng
Hm l動畛ng c畛a t畛ng lo畉i h坦a ch畉t BVTV 動畛c t鱈nh theo c担ng th畛c:
Xi =
. .
.
i i
m
C V S
m S
II: PHN TCH D働 L働畛NG CH畉T KHNG SINH
1. C叩c ph動董ng ph叩p ti畉n hnh
1.1. Ph動董ng ph叩p vi sinh
 C叩c ph動董ng ph叩ptrong m担i tr動畛ng l畛ng
M畉u sau khi thanh tr湛ng s畉 動畛c c畉y c叩c ch畛ng vi khu畉n nahyj v畛i ch畉t
kh叩ng sinh nh動 (Bacillus, Streptococus). Sau th畛i gian nu担i c畉y n畉u nh動 c坦
t畉o ra axit lactic th狸 坦 la b畉ng ch畛ng cho vi畛c kh担ng c坦 m畉t ch畉t kh叩ng sinh
ho畉c c坦 畛 m畛t gi畛i h畉n nh畉t 畛nh. Vi畛c x叩c 畛nh c坦 th畛 ti畉n hnh b畉ng c叩ch
o PH ho畉c 担ng t畛 s畛a. S畛 tng t畉 bo vi khu畉n c坦 th畛 動畛c x叩c 畛nh b畉ng
o 畛 畛c.
C叩c ph動董ng ph叩p trong m担i tr動畛ng th畉ch
C叩c ch畉t kh叩ng sinh khi ti畉p x炭c v畛i m担i tr動畛ng th畉ch s畉 lan t畛a trong 坦. S畛
lan l畛a tu但n theo hm logarit c畛a n畛ng 畛 kh叩ng sinh. S畛 ph叩t tri畛n c畛a vi
sinh v畉t trong m担i tr動畛ng th畉ch sau th畛i gian nu担i c畉y cho ph辿p s畛 c坦 m畉t
c畛a ch畉t kh叩ng sinh.
1.2 Ph動董ng ph叩p i畛n di
 M畉u 動畛c 動a vo c叩c l畛 畛c tr棚n m畉t th畉ch. Sau khi ti畉n hnh i畛n di tr棚n
t畉m th畉ch c叩c ch畉t kh叩ng sinh s畉 動畛c ph但n t叩ch v nh畛 坦 畛nh t鱈nh 動畛c,
ngoi ra lo畉i tr畛 動畛c 畉nh h動畛ng c畛a c叩c ch畉t kh叩c. T畉m th畉ch th畛 2 動畛c
c畉y m畛t hay nhi畛u ch畛ng vi sinh v畉t kh叩c nhau t湛y t畛ng lo畉i kh叩ng sinh. Sau
khi nu担i c畉y ti畉n hnh o 動畛ng k鱈nh kh叩ng khu畉n t畛 坦 c坦 th畛 畛nh l動畛ng
動畛c lo畉i kh叩ng sinh c坦 trong m畉u.
Ph動董ng ph叩p ny c坦 c叩c 動u i畛m: lo畉i tr畛 動畛c 畉nh h動畛ng c畛a c叩c ch畉t
kh叩c; X叩c 畛nh 動畛c c叩c lo畉i ch畉t kh叩ng sinh; 畛nh l動畛ng kh叩ng sinh.
1.3 Ph動董ng ph叩p h坦a l箪
 Ph動董ng ph叩p ph坦ng x畉 - enzym: D畛a tr棚n ph畉n 畛ng sinh h坦a gi畛a ch畉t
kh叩ng sinh v m畛t cofacter c坦 g畉n 畛ng v畛 C14. Qu叩 tr狸nh 畛nh l動畛ng 動畛c ti畉n
hnh 10-15 ph炭t, gi畛i h畉n ph叩t hi畛n 畉t 0,05UI/ml 畛i v畛i penicilin
Ph動董ng ph叩p ph坦ng x畉-mi畛n nhi畛m
 Ph動董ng ph叩p ph坦ng x畉 - mi畛n nhi畛m: C董 s畛 ph動董ng ph叩p d畛a tr棚n o s畛
thay 畛i ho畉t 畛 c畛a m畛t enzym d動畛i 畉nh h動畛ng c畛a m畛t kh叩ng th畛 th鱈ch h畛p.
Ph動董ng ph叩p ny c坦 thu畉n l畛 l kh担ng ph畉i s畛 d畛ng ch畉t 畛ng v畛 ph坦ng x畉 v
c坦 畛 nh畉y g畉n v畛i c叩c ph動董ng ph叩p hi畛n hnh.
 Ph動董ng ph叩p hu畛nh quang: Ph動董ng ph叩p d畛a tr棚n vi畛c g畉n ch畉t ph叩t
quang l棚n ph但n t畛 ch畉t kh叩ng sinh v ti畉n hnh o b畛i m叩y hu畛nh quang d湛ng
叩nh s叩ng ph但n c畛c ho畉c kh担ng ph但n c畛c. ph動董ng ph叩p ny d湛ng x叩c 畛nh
tetracylin, sau khi un n坦ng tr担ng m担i tr動畛ng trung t鱈nh ho畉c ki畛m t畉o thnh
ph畛c ch畉t ph叩t quang. Gi畛i han ph叩t hi畛n c畛a ph動董ng ph叩p 2g/g.
 Ph動董ng ph叩p quang sinh h畛c : ATP t畉o ra b畛i vi khu畉n 動畛c chuy畛n thnh
ADP Luciferza, k竪m theo 坦 l qu叩 tr狸nh ph叩t quang v 動畛c o b畉ng tr畉c
quang k畉.
 Ph動董ng ph叩p quang ph畛: D湛ng thi畉t b畛 quang ph畛 UV-Vis v RI cho ph辿p
x叩c 畛nh v 畛nh l動畛ng penicilin, steptomycin, tetracylin
 Ph動董ng ph叩p s畉c k鱈: S畉c k鱈 l畛p m畛ng: d湛ng x叩c 畛nh d動 l動畛ng kh叩ng sinh
trong s畛a. 畛nh l動畛ng c坦 th畛 d湛ng ph動董ng ph叩p hu畛nh quang. Gi畛i h畉n ph叩t
hi畛n c畛a ph動董ng ph叩p: tetracylin 0,025 g/ml; Choloramphenicol 1g/ml;
neomycin 15 g/ml; treptomycin 0,5 g/ml.S畉c k鱈 kh鱈: 叩p d畛ng trong s畛a. Gi畛i h畉n
ph叩t hi畛n:
Tetracylin 0,5  10 g/ml; Choloramphenicol 0,01 g/ml;
penicilin 0,005UI/ml. S畉c k鱈 l畛ng hi畛u n但ng cao (HPLC) 但y l ph動董ng ph叩p
hi畛n nay 動畛c d湛ng r畉t ph畛 bi畉n 畛 畛nh t鱈nh v 畛nh l動畛ng ch畉t kh叩ng sinh.
2. Th畛c hnh: ph但n t鱈ch d動 l動畛ng kh叩ng sinh trong streptomycin
2.1 Nguy棚n t畉c: Thu畛 ph但n streptomycin b畉ng ki畛m cho maltol l Methyl-3-
hydroxy- 7pyron. S畛 t畉o thnh maltol x畉y ra hon ton 畛nh l動畛ng cho ph辿p
x叩c 畛nh 動畛c streptomycin Maltol sinh ra 動畛c t叩ch kh畛i h畛n h畛p th畛y ph但n
b畉ng c叩ch d湛ng clorofooc 畛 chi畉t kh畛i dung d畛ch m畉u trong m担i tr動畛ng axit,
sau 坦 gi畉i chi畉t maltol b畉ng dung d畛ch ki畛m trong n動畛c. Cho maltol t叩c d畛ng
v畛i ph竪n s畉t (III) amonium, dung d畛ch 2% s畉 sinh ra ph畛c mu 畛 t鱈a 畉c tr動ng
v o m畉t 畛 quang c畛a ph畛c mu ny 畛 s坦ng 525 nm 畛 x叩c 畛nh
streptomycin. N畛ng 畛 c畛a streptomycin 動畛c x叩c 畛nh theo ph動董ng ph叩p
動畛ng chu畉n
 L畉y m畉u: - N棚n l畉y m畉u 畛 d畉ng c嘆n nguy棚n bao g坦i
- N畉u ph畉i l畉y m畉u m畛t ph畉n:
 D畛ng c畛 ch畛a m畉u ph畉i s畉ch, kh担, kh担ng c坦 l畛 r嘆, mi畛ng r畛ng c坦 n畉p 畉y,
v担 tr湛ng, c坦 k鱈ch th動畛c ph湛 h畛p v畛i m畉u c畉n l畉y.
 T畛t nh畉t l d畛ng c畛 ch畛a m畉u b畉ng nh畛a hay kim lo畉i, h畉n ch畉 s畛 d畛ng d畛ng
c畛 b畉ng th畛y tinh.
 D湛ng c叩c d畛ng c畛 v担 tr湛ng 畛 l畉y m畉u vo d畛ng c畛 ch畛a, kh担ng d湛ng tay
ti畉p x炭c v畛i m畉u.
 S畉n ph畉m kh担, c坦 th畛 d湛ng h畛p kim lo畉i hay bao PE c坦 th畛 b畛t k鱈n 動畛c.
 L畉y 鱈t nh畉t 100g cho m畛i m畉u, kh担ng 動畛c l畉y m畉u 畉y b狸nh ch畛a
 畛i v畛i m畉u l畛ng ph畉i ph畉i ki畛m so叩t nhi畛t 畛 t畉i th畛i i畛m l畉y m畉u.
2.2 D畛ng c畛 v thi畉t b畛:
M叩y ly t但m Pipet c叩c lo畉iM叩y ly t但m Pipet c叩c lo畉iM叩y ly t但m
M叩y xay sinh t畛 B狸nh 畛nh m畛c
M叩y tr畉c quang UV-VIS Ph畛u chi畉tM叩y tr畉c quang UV-VIS Ph畛u chi畉tM叩y tr畉c quang UV-VIS
2.3 H坦a ch畉t:
D湛ng ho叩 ch畉t c坦 畛 tinh khi畉t ph但n t鱈ch
- Axit clohydric, dung d畛ch 1M
- Natrihydroxyt, dung d畛ch 1N
- Thu畛c th畛: ph竪n s畉t (III) amonium, dung d畛ch 2% trong
axit sunfuric 1N
- Clorofooc
- Dung d畛ch g畛c ti棚u chu畉n streptomycin sunphat n畛ng 畛 1mg/ml
- N動畛c c畉t 2 l畉n
2.4 C叩ch ti畉n hnh:
 Chu畉n b畛 m畉u ph但n t鱈ch
 M畉u th畛t c畉n ph但n t鱈ch 動畛c th叩i nh畛, nghi畛n m畛n, tr畛n 畛u v c但n 1 l動畛ng
a = 20g cho vo m叩y xay sinh t畛. Th棚m 10 ml n動畛c c畉t vo v cho m叩y ch畉y
trong 5 ph炭t. Cho 5 ml axit clohydric 1 M vo v 畛nh m畛c 畉n 50 ml b畉ng
n動畛c c畉t. un trong b畉p c叩ch thu畛 s担i trong 10 ph炭t. 畛 ngu畛i, ly t但m l畉ng
c畉n, l畉y dung d畛ch n動畛c trong cho vo ph畛u chi畉t, th棚m 10 ml clorofooc, l畉c
trong 10 ph炭t sau 坦 畛 y棚n trong 15 ph炭t cho ph但n l畛p hon ton trong ph畛u
chi畉t r畛i t叩ch l畉y t動畛ng h畛u c董 vo ph畛u chi畉t kh叩c, th棚m 2 ml natrihydroxyt
1N v 4 ml thu畛c th畛 ph竪n s畉t (III) amonium 2% trong axit v n動畛c c畉t 畉n 20
ml. L畉c m畉nh trong 30 ph炭t, sau 坦 畛 y棚n trong 20 ph炭t r畛i t叩ch l畉y ph畉n
dung d畛ch n動畛c. Dung d畛ch ny d湛ng 畛 o m畉t 畛 quang, x叩c 畛nh
streptomycin 畛 b動畛c s坦ng 525 nm.
 Pha d達y chu畉n: D湛ng dung d畛ch g畛c ti棚u chu畉n c畛a streptomycin sunphat
n畛ng 畛 1mg/ml, t鱈nh to叩n l動畛ng ph湛 h畛p 畛 pha d達y dung d畛ch chu畉n c坦 n畛ng
畛 0,1- 0,5 - 1,0 - 1,5 - 2,0 - 2,5 亮g/ml trong c叩c b狸nh 畛nh m畛c c坦 th畛 t鱈ch 20
ml sau 坦 thu畛 ph但n b畉ng ki畛m, un c叩ch thu畛 cho s担i 10 ph炭t, 畛 ngu畛i r畛i
cho 2 ml dung d畛ch thu畛c th畛 ph竪n s畉t (III) amonium 2%, 畛nh m畛c b畉ng
n動畛c c畉t 畉n 20 ml r畛i 畛 sau 20 ph炭t m畛i ti畉n hnh o .
 Ti畉n hnh th畛:
+ 畉t s坦ng o v b畉t m叩y ch畉y cho 畛n 畛nh (5 ph炭t);
+ o m畉t 畛 quang c畛a m畉u chu畉n v m畉u ph但n t鱈ch 畛 b動畛c s坦ng 525 nm
b畉ng Cuv辿t c坦 chi畛u dy 2 cm. D湛ng m畉u tr畉ng 畛 k棚nh so s叩nh lm m畉u so
s叩nh v o m畛i m畉u 3 l畉n;
+ L畉p 畛 th畛 動畛ng chu畉n theo h畛 to畉 畛 D-C. Trong 坦 D l m畉t 畛 quang
c畛a dung d畛ch m畉u chu畉n c坦 n畛ng 畛 C t動董ng 畛ng ;
+ X叩c 畛nh n畛ng 畛 Cx c畛a ch畉t ph但n t鱈ch theo 動畛ng chu畉n 達 d畛ng 動畛c.
 M畉u tr畉ng:
M畉u tr畉ng ph畉i 動畛c chu畉n b畛 c湛ng m畛t i畛u ki畛n nh動 m畉u ph但n t鱈ch nh動ng
thay m畉u ph但n t鱈ch tr棚n b畉ng n動畛c c畉t sao cho c坦 c湛ng th畛 t鱈ch
2.5 X畛 l箪 k畉t qu畉:
Hm l動畛ng c畛a streptomycin trong m畉u ph但n t鱈ch 動畛c t鱈nh theo c担ng th畛c
sau:
Co= (Cx.V) / a T鱈nh b畉ng g/g
Trong 坦:
- a l l動畛ng m畉u c但n (畛 但y a = 20 g)
- V l th畛 t鱈ch pha m畉u (V = 20 ml)
- Cx l n畛ng 畛 streptomycin x叩c 畛nh 動畛c theo 動畛ng chu畉n
III : CH畉T DI畛T KHU畉N
1. C叩c ph動董ng ph叩p ph但n t鱈ch:
a. Ph動董ng ph叩p bi畉n 畛i s畛 chuy畛n h坦a c畛a n畉m men
Ph動董ng ph叩p th動畛ng d湛ng l test qu叩 tr狸nh l棚n men.Th畛c ph畉m 動畛c 動a i
l棚n men c坦 b畛 sung m畛t l動畛ng chu畉n n畉m men saccharomyces cerevisiae r畉t
ho畉t 畛ng. Sau khi nu担i c畉y ki畛m tra th畛 t鱈ch kh鱈 CO2 t畉o thnh cho ph辿p k畉t
lu畉n c坦 hay kh担ng c坦 m畉t ch畉t di畛t khu畉n.
2.1. Ph動董ng ph叩p vi sinh:
b. Ph動董ng ph叩p ph叩t tri畛n trong m担i tr動畛ng th畉ch
C董 s畛 c畛a ph動董ng ph叩p l cho m畉u vo trong m担i tr動畛ng th畉ch. N畉u m畉u c坦
ch畉t di畛t khu畉n s畉 ngn c畉n s畛 ph叩t tri畛n c畛a vi sinh v畉t tr棚n b畛 m畉t th畉ch.
動畛c so s叩nh v畛i m畉u ki畛m ch畛ng ti畉n hnh trong c湛ng i畛u ki畛n. ph動董ng
ph叩p hay d湛ng: ph動董ng ph叩p Drieux v Thierry 叩p d畛ng cho t畉t c畉 c叩c s畉n
ph畉m ngo畉i tr畛 b董. Ph動董ng ph叩p Mossel v Eijgelaar 叩p d畛ng cho ph但n t鱈ch
b董.
2.2 Ph動董ng ph叩p h坦a l箪:
 Acid sorbic v sorbat
C叩c ph動董ng ph叩p hay d湛ng: ph動董ng ph叩p so mu, ph動董ng ph叩p quang
ph畛 h畉p th畛 t畛 ngo畉i, ph動董ng ph叩p s畉c k鱈 kh鱈 (GC), ph動董ng ph叩p s畉c k鱈 l畛ng
hi畛u nng cao (HPLC)
 Acid Benzoic d畉n xu畉t
D畉n xu畉t c畛a benzoic c坦 nhi畛u lo畉i: axit orthoclorobenzoic,
paraclorobenzoic, salicylic, parahydroxybenzoic v c叩c ester metyl, propyl,
butyl c畛a axit parahydroxybenzoic.Ph動董ng ph叩p th動畛ng d湛ng : s畉c k鱈 gi畉y, s畉c
k鱈 b畉n m畛ng, ph動董ng ph叩p HPLC
 Anhydric sunfur董 v sunfit
Anhydric sunfur董 動畛c 動a vo th畛c ph畉m l畛ng d動畛i d畉ng kh鱈 sunfur董, n坦
s畉 k畉t h畛p v畛i 動畛ng, etanol v c叩c ch畉t mu. N坦 th動畛ng t畛n t畉i m畛t ph畉n
d動畛i d畉ng SO2 t畛 do c坦 m湛i 畉c tr動ng v c坦 t鱈nh di畛t khu畉n.
Sau khi 畛t n坦ng m畉u v b畛 sung n動畛c, axit photphoric, c坦 th畛 x叩c 畛nh
anhydric sunfur董 theo 2 c叩ch:
+ Nh畉n bi畉t m湛i
+ Con 動畛ng h坦a h畛c: d湛ng bng gi畉y amidon c坦 t畉m kali, khi c坦 m畉t SO2 ,
bng gi畉y s畉 hi畛n mu xanh. C坦 nhi畛u ph動董ng ph叩p k畛 thu畉t d湛ng 畛nh l動畛ng
 Biphenyl v orthophenyl-phenol
C叩c h畛p ch畉t ny 動畛c s畛 d畛ng trong x畛 l箪 b畛 m畉t cam qu箪t  Ch炭ng
動畛c x叩c 畛nh theo ph動董ng ph叩p Gunther,Blinn va Barkley:
Nghi畛n qu畉, x畛 l箪 b畉ng h董i n動畛c thu ph畉n ch動ng b畉ng xyclohexan.
Orthophenyl-phenol 動畛c chi畉t b畉ng dung d畛ch x炭t lo達ng, biphenyl v畉n c嘆n
trong xyclohexan. Ti畉n hnh so mu 畛 248nm
 D畉n xu畉t halogen c畛a axit axetic
C担ng th畛c chung CH2XCOOH.Trong 坦 axit monobromaxetic 動畛c d湛ng
nhi畛u h董n c畉. C坦 nhi畛u ph動董ng ph叩p 動畛c d湛ng:Ph動董ng ph叩p Florentin-
Munch,Cristol-Benezech,Jaulnes,Vivario.
 Axit boric
C坦 nhi畛u ph動董ng ph叩p x叩c 畛nh axit boric trong th畛c ph畉m, ta c坦 th畛 k畛 t畛i
2 ph動董ng ph叩p ch鱈nh:Ph動董ng ph叩p chu畉n 畛,Ph動董ng ph叩p so mu
 Fomrmaldehyt v d畉n xu畉t
Diemair v Postel 動a ra ph動董ng ph叩p ki畛m h坦a formol b畉ng ph畉n 畛ng v畛i
axit cromotropic v畛i s畛 c坦 m畉t c畛a H2SO4.N畉u c坦 formol s畉 xu畉t hi畛n mu
t鱈m.Censi v Cremonini 動a ra ph動董ng ph叩p 畛nh l動畛ng formol b畉ng c叩ch
d湛ng 2,4-dinitrophenylhydrazin.
 Axit formic
Ph動董ng ph叩p Lecoq:Chi畉t b畉ng ete petrol, sau 坦 ph畉n chi畉t ete 動畛c
ki畛m h坦a b畉ng dung d畛ch x炭t 0,1N.T叩ch pha n動畛c v ti畉n hnh axit h坦a b畉ng
H2SO4 1N, sau 坦 ch動ng c畉t 畉n khi ch畛 c嘆n kho畉ng vi ml d畛ch chi畉t.Gia
nhi畛t ph畉n n動畛c ch動ng 15 ph炭t b畉ng un c叩ch th畛y, b畛 sung vi h畉t tinh th畛
HgCl2.N畉u c坦 m畉t axit formic, se t畉o k畉t t畛a tr畉ng.Gi畛i h畉n ki畛m tra c畛a
ph動董ng ph叩p hm l動畛ng axit  300mg/l .
 H畛p ch畉t flo
Ph動董ng ph叩p Truhaut: sau khi tro h坦a, chuy畛n ton b畛 flo thnh axit
hydroflosilic b畉ng c叩ch cho t叩c d畛ng v畛i H2SO4 v畛i s畛 c坦 m畉t c畛a silic.Ch動ng
c畉t cu畛n h董i n動畛c, thu axit flohydric (do th畛y ph但n axit hydroflosilic). Chu畉n 畛
flo b畉ng un d畛ch thori nitrat v畛i ch畛 th畛 natri alizarin-sulfonat ho畉c
parasulfophenyl-azo-dihydroxynaphtalen-disulfonic(SPADN3).
 H畛p ch畉t amonium
Ph動董ng ph叩p Diemair-Postel: chi畉t amoni b畉ng h畛n h畛p n動畛c-axeton,ti畉p
theo b畉ng dicloetan , thu b畉ng bromophenol.C叩c h畛p ch畉t amoni t畉o ph畛c
mu xanh v畛i bromophenol v 動畛c 畛nh l動畛ng b畉ng c叩ch so mu 畛 b動畛c
s坦ng 608nm(x但y d畛ng 動畛ng chu畉n ).Ph動董ng ph叩p Miller-Wildbrett:c畉i ti畉n t畛
ph動董ng ph叩p tr棚n, h畛p ch畉t amoni t畉o ph畛c mu v畛i eosin v so mu 畛
542nm
 Hydroperoxyt
動畛c 叩p d畛ng nhi畛u trong c担ng nghi畛p s畛a.
+ Ph動董ng ph叩p h坦a h畛c: Ph動董ng ph叩p Pien, Desirant v Lafontaine;
Ph動董ng ph叩p Rouquette; Ph動董ng ph叩p Amin v Olson; Ph動董ng ph叩p
Ferrier;Ph動董ng ph叩p Gupta.
+ Ph動董ng ph叩p enzym: C坦 畛 nh畉y cao h董n ph動董ng ph叩p h坦a h畛c
 Hypoclorit v cloramin
+ Ph動董ng ph叩p h畛 tinh b畛t: Hypoclorit ph但n gi畉i iodua t畉o iod c坦 mu
xanh v畛i h畛 tinh b畛t
+ Ph動董ng ph叩p hu畛nh quang: tr畛n 3ml m畉u v畛i h畛n h畛p H2SO4 (3+1)
ch畛a 0,025% clorua thi畉c,gi畛 畛 nhi畛t 畛 0-5 0C.Ly t但m 3 ph炭t t畛c 畛 2500
v嘆ng/ph炭t.Thu k畉t t畛a soi 畛n ngo畉i t畛(365nm), n畉u th畉y mu l畛c nh畉t th狸 m畉u
c坦 hypoclorit ho畉c cloramin.
2. Th畛c hnh:
2.1 Nguy棚n t畉c:
Lm 畛ng nh畉t h坦a s畉n ph畉m, sau 坦 pha lo達ng v axit h坦a ph畉n m畉u th畛,
chi畉t axit benzoic b畉ng dietyl ete, sau 坦 chi畉t l畉i axit ny b畉ng ki畛m v tinh
ch畉 b畉ng c叩ch oxy h坦a kalidicromat 達 動畛c axit h坦a . X叩c 畛nh b畉ng c叩ch o
quang ph畛 c畛a axit benzoic tinh khi畉t 動畛c h嘆a tan trong dietylete.
2.2 H坦a ch畉t:
T畉t c畉 c叩c thu畛c th畛 ph畉i thu畛c lo畉i tinh khi畉t ph但n t鱈ch .Ph畉i s畛 d畛ng n動畛c
c畉t ho畉c n動畛c tinh khi畉t t動董ng 動董ng
Axit tactaric tinh th畛 NaOH 1N ; Axit sufuric(2+1) Kali dicromat 33-34ml dietyl
ete m畛i 動畛c c畉t Axit benzoic, dung d畛ch chu畉n 0,1g/l trong dietyl ete
2.3 D畛ng c畛 v thi畉t b畛:
 B狸nh 畛nh m畛c 50ml
 Phi畛u chi畉t 500ml
 Pipe 20ml
 M叩y lm 畛ng ch畉t
 C但n ph但n t鱈ch
 B畉p c叩ch th畛y
 B狸nh c畉u 200ml c坦 n炭t gi, 動畛c lm b畉ng th畛y tinh
 M叩y 担 quang ph畛 x叩c 畛nh trong ph畉m vi tia c畛c t鱈m.
3.4 C叩ch ti畉n hnh:
C叩c s畉n ph畉m l畛ng( d畛ch qu畉, c叩c s畉n ph畉m c坦 th畛t qu畉,xiro)v c叩c s畉n ph畉m
畉c(m畛t cam,m畛t nhuy畛n) : Lm 畛ng nh畉t m畉u th鱈 nghi畛m sau khi tr畛n
S畉n ph畉m r畉n(rau, qu畉) : C畉t m畉u th鱈 nghi畛m ra thnh nhi畛u mi畉ng nh畛, b畛
h畉t, khoang l叩 no達n n畉u c畉n v nghi畛n tr畛n 畛ng nh畉t m畛t c叩ch c畉n th畉n
kho畉ng 40g m畉u.畛 s畉n ph畉m 担ng l畉nh tan gi叩 trong m畛t b鱈nh k鱈n v cho
d畛ch tan ch畉y vo s畉n ph畉m tr動畛c khi nghi畛n tr畛n m畉u.
3.4.1 Chu畉n b畛 m畉u th畛
C叩c s畉n ph畉m l畛ng:D湛ng pipet l畉y 20ml m畉u th畛, kh担ng c坦 c叩c ch畉t 畛 d畉ng
huy畛n ph湛, pha lo達ng v畛i kho畉ng 50ml n動畛c v chuy畛n vo m畛t phi畛u chi畉t
dung t鱈ch 500ml(phi畛u chi畉t A)
C叩c s畉n ph畉m l畛ng ch畛a th畛t qu畉 : L畉y 20ml m畉u th畛 cho vo c畛i v nghi畛n v畛i
200ml n動畛c. L畛c ch畉t l畛ng sau khi g畉n. Lm 2 l畉n li棚n ti畉p, cho b達 vo 200ml
n動畛c r畛i g畉n, l畛c l畉y ch畉t l畛ng.Thu ton b畛 d畛ch l畛c tr畛c ti畉p vo phi畛u chi畉t
dung t鱈ch 500ml( phi畛u chi畉t A)
C叩c s畉n ph畉m r畉n ho畉c 畉c : C但n kho畉ng 10g m畉u th畛 ch鱈nh x叩c 畉n 0,01g,
v d湛ng 30  40ml n動畛c, chuy畛n m畉u vo b狸nh c畉u 250ml. Th棚m kho畉ng 50ml
natrihydrocacbonat.L畉c, r畛i 畉t l棚n n畛i c叩ch th畛y, i畛u ch畛nh nhi畛t 畛 70 
80 0C v 畛 trong 5  30 ph炭t.L畛c ph畉n ch畛a trong b狸nh c畉u v tr叩ng 2 l畉n
b畉ng n動畛c, m畛i l畉n d湛ng 15-20ml.Thu ton b畛 d畛ch l畛c vo phi畛u chi畉t dung
t鱈ch 500ml(phi畛u chi畉t A).畛 cho ngu畛i
3.4.2 Ph畉n m畉u th畛
3.4.3 Chi畉t axit benzoic
Cho 1 g axit tartaric vo phi畛u chi畉t(A) ch畛a ph畉n m畉u th畛 達 動畛c pha lo達ng,
th棚m 60ml dietyl ete v l畉c k挑. 畛 cho t叩ch l畛p, r畛i h畛ng l畛p ete vo phi畛u chi畉t
th畛 hai dung t鱈ch 500ml(phi畛u chi畉t B).Sau 坦 r畛a ph畉n d畛ch trong phi畛u chi畉t
th畛 nh畉t (A) b畉ng 60ml dietyl ete.畛 t叩ch l畛p, r畛i h畛ng ete vo phi畛u chi畉t (B)
c坦 ch畛a l畛p ete thu 動畛c l畉n th畛 nh畉t.Ti畉p t畛c t動董ng t畛 l畉n chi畉t th畛 ba b畉ng
30ml dietyl ete v d畛n l畛p ete thu 動畛c vo c湛ng hai l畉n 畉u trong phi畛u chi畉t
(B).Chi畉t axit benzoic t畛 dung d畛ch ete b畉ng c叩ch th棚m ti畉p 10ml v ti畉p 5ml
dung d畛ch natrihydroxit, v sau 坦 2 l畉n,m畛i l畉n 10ml n動畛c. Sau m畛i l畉n cho
th棚m l畉c, r畛i 畛 cho t叩ch l畛p v h畛ng l畉y ph畉n dung d畛ch.H畛ng d畛ch vo m畛t
挑a.畉t 挑a l棚n n畛i c叩ch th畛y,i畛u ch畛nh nhi畛t 畛 70-80oC, v 畛 坦 cho 畉n khi
th畛 t鱈ch dung d畛ch ki畛m gi畉m kho畉ng m畛t n畛a,l畉y ph畉n dietyl ete 達 h嘆a tan
c嘆n s坦t l畉i.
3.4.4 Tinh ch畉 axit benzoic
Sau khi 畛 ngu畛i,r坦t d畛ch 畛 挑a vo m畛t b狸nh c畉u dung t鱈ch 250ml c坦 ch畛a h畛n
h畛p 20ml dung d畛ch axit sunfuricv 20ml dung d畛ch kali dicromat.畉y n畉p b狸nh
c畉u,l畉c v 畛 坦 鱈t nh畉t 1 gi畛
3.4.5 Chi畉t axit benzoic tinh khi畉t
Chi畉t axit benzoic b畉ng c叩ch x畛 l鱈 dung d畛ch tr棚n (3.4)hai l畉n v畛i 20-25ml dietyl
ete, thu l畉y dung d畛ch ete.R畛a dung d畛ch ete 2 l畉n b畉ng m畛t vi mililit n動畛c.
Sau khi g畉n r畉t c畉n th畉n, l畛c qua gi畉y l畛c kh担 v thu d畛ch l畛c vo b狸nh 畛nh
m畛c dung t鱈ch 50ml.Sau 坦 r畛a gi畉y l畛c b畉ng m畛t vi mililit dietyl ete, th棚m 畛
dung m担i r畛a ny vo d畛ch l畛c 畛 pha lo達ng t畛i v畉ch.
3.4.6 X叩c 畛nh
D湛ng m叩y o quang ph畛, o 畛 h畉p th畛 c畛a dung d畛ch ete (3.5) li棚n quan 畉n
畛 h畉p th畛 c畛a dietyl ete tinh khi畉t 畛 b動畛c s坦ng 267,5nm 畉n 272nm v
276,5nm. 畛 h畉p th畛 do axit benzoic 動畛c t鱈nh b畉ng c担ng th畛c chung o s畛
ch棚nh l畛ch xu畉t hi畛n 畛 b動畛c s坦ng 272nm
1 3
2
2
A A
A
+

Trong 坦 : A1: 畛 h畉p th畛 畛 267,5nm
A2: 畛 h畉p th畛 畛 272 nm
A3:畛 h畉p th畛 畛 276,5nm
3.4.7 S畛 l畉n x叩c 畛nh
Ti畉n hnh hai l畉n x叩c 畛nh tr棚n c湛ng m畛t m畉u th畛
3.4.8 D畛ng 動畛ng chu畉n
L畉y m畛t lo畉t 6 b狸nh 畛nh m畛c dung t鱈ch 50ml, l畉n l動畛t cho vo t畛ng b狸nh 5-7,
5-10, 5-15-20ml dung d畛ch chu畉n axit benzoic. Pha lo達ng t畛i v畉ch b畉ng dietyl
ete.C叩c dung d畛ch thu 動畛c ch畛a tu畉n t畛10-15-20-25-30-40mg axit
benzoic/lit.Ti畉n hnh o s畛 ch棚nh l棚ch 畛 h畉p th畛 c畛a c叩c dung d畛ch ny theo
tr狸nh t畛 動畛c m担 t畉 畛 3.6.V畉 動畛ng cong bi畛u th畛 c叩c l畉n o s畛 ch棚nh l畛ch li棚n
quan 畉n s畛 miligam axit benzoic/lit n棚u tr棚n
3.5 X畛 l鱈 k畉t qu畉
2 2
50
2,5
20
m m =
Trong 坦: m2 l l動畛ng axit benzoic 畛c tr棚n 畛 th畛 chu畉n t鱈nh b畉ng miligam
 Ph畉n m畉u th畛 動畛c l畉y b畉ng c叩ch d湛ng pipet
Hm l動畛ng axit benzoic s畉n ph畉m t鱈nh b畉ng miligam/lit theo c担ng th畛c:
 Ph畉n m畉u th畛 動畛c l畉y b畉ng c叩ch c但n
Hm l動畛ng axit benzoic t鱈nh b畉ng miligam tr棚n kilogam s畉n ph畉m theo c担ng
th畛c:
2
1
50
m
m

Trong 坦: m1- kh畛i l動畛ng c畛a ph畉n m畉u th畛 (g)
m2- kh畛i l動董ng axit benzoic 畛c tr棚n 畛 th畛 chu畉n(mg)
IV : 畛C T畛 VI N畉M
4.1 C叩c ph動董ng ph叩p ph但n t鱈ch:
4.1.1 ph但n t鱈ch aflatoxin
 Ph動董ng ph叩p nhanh s畛 d畛ng c畛t nh畛i 叩p d畛ng cho s畉n ph畉m rau qu畉
 Ph動董ng ph叩p s畉c k鱈 b畉n m畛ng
 Ph動董ng ph叩p HPLC
4.1.2 Ph但n t鱈ch epoxy-tricotexen:
 K畛 thu畉t ROMER, BOLING v Mc DONALD
 Ph但n t鱈ch deoxynivalenol (DON)
4.1.3 Ph但n t鱈ch zearalenon:
 Ph動董ng ph叩p RIA
 Ph動董ng ph叩p ELISA
 S畉c k箪 叩i l畛c mi畛n nhi畛m
4.3 Th畛c hnh
X叩c 畛nh hm l動畛ng aflatoxin
4..3.1 Nguy棚n t畉c:
Aflatoxin 動畛c chi畉t t畛 m畉u th畛 b畉ng c叩c h畛 dung m担i h畛u c董 kh叩c nhau.
D畛ch chi畉t 動畛c l畛c, m畛t ph畉n d畛ch l畛c 動畛c lm s畉ch qua c畛t silicagen (florisil,
SPE). Lm bay h董i dung d畛ch r畛a gi畉i v h嘆a tan c畉n v畛i dung m担i pha 畛ng
r畛i b董m vo h畛 th畛ng s畉c k箪 l畛ng hi畛u nng cao (HPLC).
4.3.2 H坦a ch畉t,thu畛c th畛
 T畉t c畉 h坦a ch畉t 畛u ph畉i l lo畉i tinh khi畉t ph但n t鱈ch s畉c k箪 n畉u kh担ng c坦
c叩c ch畛 d畉n ri棚ng no kh叩c.
C叩c chu畉n aflatoxin B1, B2, G1, G2
Metanol, hexan, clorofooc, ete etylic, axetonitric, toluene, natrisunfat khan,
celit 545, kh鱈 N2 tinh khi畉t
4.3.3 D畛ng c畛,thi畉t b畛
- HPLC v畛i 畉u d嘆 UV - C叩c lo畉i pipet
- C但n ph但n t鱈ch 10-4g - Gi畉y l畛c
- M叩y li t但m - Xylanh
-B董m h炭t ch但n kh担ng - B畛 ph畛u h炭t ch但n kh担ng
- C畛t s畉c k箪 th畛y tinh
M叩y khu畉y t畛 M叩y c畉t quay ch但n kh担ng
M叩y nghi畛n
4.4 C叩ch ti畉n hnh:
Chu畉n b畛 m畉u:
C但n 50g m畉u 達 nghi畛n nh畛 cho vo b狸nh n炭t mi 500ml. Cho ti畉p 25ml n動畛c,
25g celite 545, 250ml clorofooc, 畉y n炭t ch畉t. L畉c trong 30 ph炭t b畉ng m叩y l畉c
quay tr嘆n hay m叩y khu畉y t畛, r畛i l畛c qua gi畉y l畛c g畉p c畉nh, b畛 10ml dung d畛ch
l畛c ti畉p theo. N畉u t畛c 畛 d畛ch l畛c xu畛ng ch畉m, chuy畛n sang ph畛u Buchner
ch畛a m畛t l畛p celite 545 dy 5mm tr棚n gi畉y l畛c v d湛ng h炭t ch但n kh担ng.
Lm s畉ch m畉u b畉ng c畛t s畉c k箪:
Chu畉n b畛 c畛t s畉c k箪, cho m畛t 鱈t b担n vo 叩y c畛t s畉c k箪, them 5g natrisunfat
khan. 畛 clorofooc 畉n 2/3 c畛t, sau 坦 cho 10g silicagen l畉ng 畛u, d湛ng 滴a
th畛y tinh khu畉y nh畉 畛 tr叩nh b畛t kh鱈. M畛 kh坦a cho clorofooc ch畉y xu畛ng t畛 t畛.
Khi t畛c 畛 l畉ng c畛a silicagen ch畉m l畉i, r炭t h畉t clorofooc ch畛 畛 l畉i m畛t l畛p 5cm
ph鱈a tr棚n l畛p silicagen. Th棚m t畛 t畛 15g natrisunfat khan, sau 坦 r炭t b畛t
clorofooc 畉n g畉n s叩t l畛p natrisunfat khan tr棚n. Tr畛n 50ml d畛ch l畛c tr棚n v畛i
150ml n-hexan, 畛 c畉n th畉n vo c畛t s畉c k箪 達 chu畉n b畛 nh動 tr棚n, lo畉i b畛 dung
d畛ch ch畉y ra. Cho ti畉p 150ml ete etylic khan, lo畉i b畛 dung d畛ch ch畉y ra, kh担ng
畉 c畛t b畛 kh担, l動u l動畛ng d嘆ng ch畉y: 8-12ml/ph炭t.
R畛a gi畉i aflatoxin b畉ng 150ml h畛n h畛p methanol-clorofooc. L畉y ton b畛 d畛ch
ch畉y ra, l動u l動畛ng d嘆ng ch畉y nh動 tr棚n. Lm bay h董i dung d畛ch r畛a b畉ng m叩y
c畉t quay ch但n kh担ng cho 畉n khi ch畛 c嘆n kho畉ng 2-3ml 畛 nhi畛t 畛 th畉p h董n
500C, t畛t nh畉t d動畛i lu畛ng kh鱈 N2 nh畉. H嘆a tan c畉n b畉ng 1ml dung m担i pha
畛ng v b董m vo HPLC.
4.5 X畛 l箪 k畉t qu畉:
So s叩nh th畛i gian l動u c畛a m畛i 畛nh so v畛i 畛nh ch畉t chu畉n 畛 畛nh t鱈nh
So s叩nh chi畛u cao (h) ho畉c di畛n t鱈ch c畛a m畛i pic (Si) v畛i pic ch畉t chu畉n t動董ng
畛ng (Sm) 畛 t鱈nh 畛nh l動畛ng.
Hm l動畛ng aflatoxin t畛ng lo畉i trong m畉u (mg/kg) 動畛c t鱈nh theo c担ng th畛c:
. .
.
i i
i
m
S C V
X
S m
=
Trong 坦:
Si : di畛n t鱈ch pic t動董ng 畛ng m畉u ch畉t i
Sm : di畛n t鱈ch pic t動董ng 畛ng c畛a m畉u chu畉n c坦 ch畉t i
Ci : n畛ng 畛 ch畉t i c坦 trong m畉u chu畉n, mg/ml
V : th畛 t鱈ch d畛ch m畉u cu畛i c湛ng, ml
m : kh畛i l動畛ng m畉u ph但n t鱈ch

More Related Content

Phan tich du luong thuoc bao ve thuc vat

  • 1. TR働畛NG 畉I H畛C NNG LM HU畉 KHOA C KH - CNG NGH畛 鏈 BI TI畛U LU畉N PHN TCH D働 L働畛NG THU畛C B畉O V畛 TH畛C V畉T. CH畉T KHNG SINH. CH畉T DI畛T KHU畉N. 畛C T畛 VI N畉M.
  • 2. I: PHN TCH D働 L働畛NG THU畛C B畉O V畛 TH畛C V畉T a. Ph動董ng ph叩p h坦a sinh Ph動董ng ph叩p Enzym: Nguy棚n t畉c: ng動畛i ta 達 x但y d畛ng c叩c ph動董ng ph叩p x叩c 畛nh d動 l動畛ng thu畛c BVTV trong th畛c ph畉m v畛i 畛 nh畉y t畛 袖 g ng. ph動董ng ph叩p d畛a tr棚n c董 ch畉 畛c ch畉 畉c hi畛u gi畛a nh坦m l但n h畛u c董 ho畉c carbomat v畛i ChE. X叩c 畛nh s畛 gi畉m ho畉t 畛 c畛a ChE (% 畛c ch畉) khi c坦 m畉t c畛a ch畉t 畛c t畛 坦 c坦 th畛 t鱈nh 動畛c hm l動畛ng ch畉t 畛c c坦 trong m畉u. Cholinesteraza ( ChE ) l enzym th畛y ph但n c叩c Esteaxyl c畛a cholin, n坦 坦ng vai tr嘆 quan tr畛ng trong ho畉t 畛ng th担ng tin gi畛a c叩c t畉 bo trong c董 th畛 s畛ng, 畉c bi畛t l c叩c t畉 bo c畛a h畛 th畉n kinh. ChE b畛 k狸m h達m b畛i c叩c nh坦m thu畛c l但n h畛u c董 v carbamat. Ph動董ng ph叩p GT-test Kit: Nguy棚n t畉c : d畛a vo 畉c t鱈nh 畛c ch畉 axetylcholinestearaza c畛a c叩c lo畉i thu畛c tr畛 s但u nh坦m phospho h畛u c董 v carbomat. ph畉n Axetylcholinnesteraza t畛 do (kh担ng b畛 畛c ch畉) s畉 th畛y ph但n Axetylcholin t畉o acid Axetic v cholin. d畛a vo ph畉n 畛ng t畉o mu gi畛a Axetylcholin c嘆n th畛a v畛i thu畛c th畛 GT ta x叩c 畛nh l動畛ng thu畛c BVTV trong rau qu畉. 1. C叩c ph動董ng ph叩p ti畉n hnh
  • 3. b. Ph動董ng ph叩p sinh h畛c 但y l c叩c ph動董ng ph叩p 動畛c s畛 d畛ng 畛 ki畛m tra 畛c t畛 v c担n tr湛ng. Trong ph畉n l畛n c叩c tr動畛ng h畛p ch炭ng 動畛c coi nh動 c叩c ph辿p th畛 畛nh t鱈nh. C叩c ph動董ng ph叩p ny d動畛c s畛 d畛ng kh叩 ph畛 bi畉n c. Ph動董ng ph叩p h坦a l箪 - Ph動董ng ph叩p c畛c ph畛: 但y l ph動董ng ph叩p c坦 畛 nh畉y cao - Ph動董ng ph叩p quang ph畛: Th動畛ng 動畛c s畛 d畛ng 畛 nghi棚n c畛u v 畛nh l動畛ng c叩c ch畉t BVTV -Ph動董ng ph叩p so mu: c董 s畛 c畛a ph動董ng ph叩p d畛a vo ph畉n 畛ng t畉o ph畛c mu 畉c tr動ng cho c叩c ch畉t BVTV. - Ph動董ng ph叩p s畉c k箪: C叩c ph動董ng ph叩p hay d湛ng: s畉c k箪 gi畉y, s畉c k箪 b畉n m畛ng, s畉c k箪 kh鱈 (GC), s畉c k箪 l畛ng hi畛u nng cao (HPLC). 畛ng d畛ng: 但y l ph動董ng ph叩p 畛nh l動畛ng m畛i, n坦 動畛c 畛ng d畛ng cho nhi畛u lo畉i h坦a ch畉t BVTV kh叩c nhau. trong s畛 坦 動畛c d湛ng ph畛 bi畉n h董n c畉 l GC
  • 4. 2. Th畛c hnh x叩c 畛nh hm l動畛ng h坦a ch畉t BVTV thu畛c nh坦m l但n h畛u c董 2.1 Nguy棚n t畉c: Khi 動畛c t叩ch chi畉t, h坦a ch畉t b畉o v畛 th畛c v畉t photpho-nit董 h畛u c董 動畛c x叩c 畛nh b畉ng s畉c k箪 kh鱈 (GC) tr畛c ti畉p v畛i detector FPD. 2.2 H坦a ch畉t: Axeton, diclomtan,ete petrol tinh khi畉t ph但n t鱈ch Natri sunfat khan tinh khi畉t Ch畉t chu畉n cho nh坦m ch畉t BVTV nh坦m photpho h畛u c董. 2.3 D畛ng c畛 v h坦a ch畉t: c但n ph但n t鱈ch d=10-4g m叩y nghi畛n m畉u; c但n k畛 thu畉t d=10-2g m叩y c担 quay ch但n kh担ng; h畛 th畛ng s畉c k箪 kh鱈 (GC) v畛i detector FPD; ph畛u chi畉t.
  • 5. 2.4 C叩ch ti畉n hnh X但y d畛ng 動畛ng chu畉n Dung d畛ch chu畉n g畛c 100 ppm. C但n 0,01g ch畉t chu畉n cho vo b狸nh 畛nh m畉t 100ml, th棚m n-hexan 畉n v畉ch m畛c. Dung d畛ch chu畉n lm vi畛c H炭t 0,5; 1,0; 2,0ml chu畉n g畛c 畛 tr棚n cho vo b狸nh d畛nh m畛c 10ml v pha lo達ng t畛i v畉ch b畉ng n-hexan 動畛c c叩c n畛ng 畛 chu畉n t動董ng 畛ng l 5;10 v 20ppm. B董m vo m叩y, theo h動畛ng d畉n c畛a ph畉n m畛m 畛 l畉p 動畛ng chu畉n v x叩c 畛nh th畛i gian l動u, di畛n t鱈ch pic. Ti畉n hnh chi畉t m畉u m畉u 動畛c th叩i nh畛 v tr畛n i畛u c畉n th畉n. c畉n x叩c 畛nh 100g m畉u cho vo b狸nh n坦n 250ml, th棚m 200ml aceton nghi畛n 畛ng nh畉t trong 1 ph炭t. l畛c qua thi畉t b畛 l畛c ch但n kh担ng, thu d畛ch chi畉t trong b狸nh h炭t 500ml. Cho 800ml d畛ch l畛c m畉u vo ph畛u chi畉t 1lit, th棚m 100ml ete petrol v 100ml diclometan,l畉c m畉nh trong 1 ph炭t. L畛p h畛u c董 b棚n trong c畛a ph畛u chi畉t ban 畉u 棚 lam kh担 b畉ng c叩ch cho ch畉y qua ph畛u l畛c 動畛ng k鱈nh 10cm c坦 ch畛a natri sunfat khan b棚n tr棚n gi畉y l畛c, thu d畛ch l畛c vo b狸nh c担 quay.
  • 6. R畛a l畛p natri sunfat b畉ng 50ml diclometan. C担 畉c v bay h董i ch畉m b畉ng m叩y c担 quay ch但n kh担ng 畛 450C. Khi c担 畉c c嘆n kho畉ng 2ml, th棚m 10ml axeton v l畉i c担 畉n c嘆n kho畉ng 2ml. L畉p l畉i vi畛c c担 畉c 2 l畉n v畛i 10ml axeton. Kh担ng c担 kh担 畛 tr叩nh ph但n h畛y m畉u. Ph但n t鱈ch h畛n h畛p m畉u photpho h畛u c董 v natri h畛u c董 H嘆a tan c畉n d畛ch kh担 畉n 10ml b畉ng axeton B董m 1 袖l dung d畛ch ny vo m叩y s畉c k箪 kh鱈, s畛 d畛ng detector FPD v畛i c叩c i畛u ki畛n sau: c畛t SPB- 5 (30m x 0,25mm x 0,25袖m ). Nhi畛t 畛 c畛t: 500C (1 ph炭t), tng 200C/ph炭t -1200C, tng 500C/ngy-2500C. ch畉 畛 b董m: kh担ng chia d嘆ng, t畛c 畛 1ml/ph炭t. 叩p su畉t khi mang 100kpa.
  • 7. Xi : Hm l動畛ng h坦a ch畉t BVTV i c坦 trong 1kg m畉u (mg/kg) Si: di畛n t鱈ch pic t動董ng 畛ng m畉u ch畉t i m : kh畛i l動畛ng m畉u ph但n t鱈ch V : th畛 t鱈ch d畛ch m畉u cu畛i c湛ng, ml Sm : di畛n t鱈ch pic t動董ng 畛ng c畛a m畉u chu畉n c坦 ch畉t i m: kh畛i l動畛ng m畉u l畉y ph但n t鱈ch, g 2.5 x畛 l箪 k畉t qu畉 So s叩nh th畛i gian l動u c畛a m畛i 畛nh so v畛i ch畉t chu畉n 畛 畛nh t鱈nh So s叩nh di畛n t鱈ch ho畉c chi畛u cao c畛a m畛i pic v畛i pic chu畉n 畛 畛nh l動畛ng Hm l動畛ng c畛a t畛ng lo畉i h坦a ch畉t BVTV 動畛c t鱈nh theo c担ng th畛c: Xi = . . . i i m C V S m S
  • 8. II: PHN TCH D働 L働畛NG CH畉T KHNG SINH 1. C叩c ph動董ng ph叩p ti畉n hnh 1.1. Ph動董ng ph叩p vi sinh C叩c ph動董ng ph叩ptrong m担i tr動畛ng l畛ng M畉u sau khi thanh tr湛ng s畉 動畛c c畉y c叩c ch畛ng vi khu畉n nahyj v畛i ch畉t kh叩ng sinh nh動 (Bacillus, Streptococus). Sau th畛i gian nu担i c畉y n畉u nh動 c坦 t畉o ra axit lactic th狸 坦 la b畉ng ch畛ng cho vi畛c kh担ng c坦 m畉t ch畉t kh叩ng sinh ho畉c c坦 畛 m畛t gi畛i h畉n nh畉t 畛nh. Vi畛c x叩c 畛nh c坦 th畛 ti畉n hnh b畉ng c叩ch o PH ho畉c 担ng t畛 s畛a. S畛 tng t畉 bo vi khu畉n c坦 th畛 動畛c x叩c 畛nh b畉ng o 畛 畛c. C叩c ph動董ng ph叩p trong m担i tr動畛ng th畉ch C叩c ch畉t kh叩ng sinh khi ti畉p x炭c v畛i m担i tr動畛ng th畉ch s畉 lan t畛a trong 坦. S畛 lan l畛a tu但n theo hm logarit c畛a n畛ng 畛 kh叩ng sinh. S畛 ph叩t tri畛n c畛a vi sinh v畉t trong m担i tr動畛ng th畉ch sau th畛i gian nu担i c畉y cho ph辿p s畛 c坦 m畉t c畛a ch畉t kh叩ng sinh.
  • 9. 1.2 Ph動董ng ph叩p i畛n di M畉u 動畛c 動a vo c叩c l畛 畛c tr棚n m畉t th畉ch. Sau khi ti畉n hnh i畛n di tr棚n t畉m th畉ch c叩c ch畉t kh叩ng sinh s畉 動畛c ph但n t叩ch v nh畛 坦 畛nh t鱈nh 動畛c, ngoi ra lo畉i tr畛 動畛c 畉nh h動畛ng c畛a c叩c ch畉t kh叩c. T畉m th畉ch th畛 2 動畛c c畉y m畛t hay nhi畛u ch畛ng vi sinh v畉t kh叩c nhau t湛y t畛ng lo畉i kh叩ng sinh. Sau khi nu担i c畉y ti畉n hnh o 動畛ng k鱈nh kh叩ng khu畉n t畛 坦 c坦 th畛 畛nh l動畛ng 動畛c lo畉i kh叩ng sinh c坦 trong m畉u. Ph動董ng ph叩p ny c坦 c叩c 動u i畛m: lo畉i tr畛 動畛c 畉nh h動畛ng c畛a c叩c ch畉t kh叩c; X叩c 畛nh 動畛c c叩c lo畉i ch畉t kh叩ng sinh; 畛nh l動畛ng kh叩ng sinh. 1.3 Ph動董ng ph叩p h坦a l箪 Ph動董ng ph叩p ph坦ng x畉 - enzym: D畛a tr棚n ph畉n 畛ng sinh h坦a gi畛a ch畉t kh叩ng sinh v m畛t cofacter c坦 g畉n 畛ng v畛 C14. Qu叩 tr狸nh 畛nh l動畛ng 動畛c ti畉n hnh 10-15 ph炭t, gi畛i h畉n ph叩t hi畛n 畉t 0,05UI/ml 畛i v畛i penicilin Ph動董ng ph叩p ph坦ng x畉-mi畛n nhi畛m Ph動董ng ph叩p ph坦ng x畉 - mi畛n nhi畛m: C董 s畛 ph動董ng ph叩p d畛a tr棚n o s畛 thay 畛i ho畉t 畛 c畛a m畛t enzym d動畛i 畉nh h動畛ng c畛a m畛t kh叩ng th畛 th鱈ch h畛p. Ph動董ng ph叩p ny c坦 thu畉n l畛 l kh担ng ph畉i s畛 d畛ng ch畉t 畛ng v畛 ph坦ng x畉 v c坦 畛 nh畉y g畉n v畛i c叩c ph動董ng ph叩p hi畛n hnh.
  • 10. Ph動董ng ph叩p hu畛nh quang: Ph動董ng ph叩p d畛a tr棚n vi畛c g畉n ch畉t ph叩t quang l棚n ph但n t畛 ch畉t kh叩ng sinh v ti畉n hnh o b畛i m叩y hu畛nh quang d湛ng 叩nh s叩ng ph但n c畛c ho畉c kh担ng ph但n c畛c. ph動董ng ph叩p ny d湛ng x叩c 畛nh tetracylin, sau khi un n坦ng tr担ng m担i tr動畛ng trung t鱈nh ho畉c ki畛m t畉o thnh ph畛c ch畉t ph叩t quang. Gi畛i han ph叩t hi畛n c畛a ph動董ng ph叩p 2g/g. Ph動董ng ph叩p quang sinh h畛c : ATP t畉o ra b畛i vi khu畉n 動畛c chuy畛n thnh ADP Luciferza, k竪m theo 坦 l qu叩 tr狸nh ph叩t quang v 動畛c o b畉ng tr畉c quang k畉. Ph動董ng ph叩p quang ph畛: D湛ng thi畉t b畛 quang ph畛 UV-Vis v RI cho ph辿p x叩c 畛nh v 畛nh l動畛ng penicilin, steptomycin, tetracylin Ph動董ng ph叩p s畉c k鱈: S畉c k鱈 l畛p m畛ng: d湛ng x叩c 畛nh d動 l動畛ng kh叩ng sinh trong s畛a. 畛nh l動畛ng c坦 th畛 d湛ng ph動董ng ph叩p hu畛nh quang. Gi畛i h畉n ph叩t hi畛n c畛a ph動董ng ph叩p: tetracylin 0,025 g/ml; Choloramphenicol 1g/ml; neomycin 15 g/ml; treptomycin 0,5 g/ml.S畉c k鱈 kh鱈: 叩p d畛ng trong s畛a. Gi畛i h畉n ph叩t hi畛n: Tetracylin 0,5 10 g/ml; Choloramphenicol 0,01 g/ml; penicilin 0,005UI/ml. S畉c k鱈 l畛ng hi畛u n但ng cao (HPLC) 但y l ph動董ng ph叩p hi畛n nay 動畛c d湛ng r畉t ph畛 bi畉n 畛 畛nh t鱈nh v 畛nh l動畛ng ch畉t kh叩ng sinh.
  • 11. 2. Th畛c hnh: ph但n t鱈ch d動 l動畛ng kh叩ng sinh trong streptomycin 2.1 Nguy棚n t畉c: Thu畛 ph但n streptomycin b畉ng ki畛m cho maltol l Methyl-3- hydroxy- 7pyron. S畛 t畉o thnh maltol x畉y ra hon ton 畛nh l動畛ng cho ph辿p x叩c 畛nh 動畛c streptomycin Maltol sinh ra 動畛c t叩ch kh畛i h畛n h畛p th畛y ph但n b畉ng c叩ch d湛ng clorofooc 畛 chi畉t kh畛i dung d畛ch m畉u trong m担i tr動畛ng axit, sau 坦 gi畉i chi畉t maltol b畉ng dung d畛ch ki畛m trong n動畛c. Cho maltol t叩c d畛ng v畛i ph竪n s畉t (III) amonium, dung d畛ch 2% s畉 sinh ra ph畛c mu 畛 t鱈a 畉c tr動ng v o m畉t 畛 quang c畛a ph畛c mu ny 畛 s坦ng 525 nm 畛 x叩c 畛nh streptomycin. N畛ng 畛 c畛a streptomycin 動畛c x叩c 畛nh theo ph動董ng ph叩p 動畛ng chu畉n L畉y m畉u: - N棚n l畉y m畉u 畛 d畉ng c嘆n nguy棚n bao g坦i - N畉u ph畉i l畉y m畉u m畛t ph畉n: D畛ng c畛 ch畛a m畉u ph畉i s畉ch, kh担, kh担ng c坦 l畛 r嘆, mi畛ng r畛ng c坦 n畉p 畉y, v担 tr湛ng, c坦 k鱈ch th動畛c ph湛 h畛p v畛i m畉u c畉n l畉y. T畛t nh畉t l d畛ng c畛 ch畛a m畉u b畉ng nh畛a hay kim lo畉i, h畉n ch畉 s畛 d畛ng d畛ng c畛 b畉ng th畛y tinh. D湛ng c叩c d畛ng c畛 v担 tr湛ng 畛 l畉y m畉u vo d畛ng c畛 ch畛a, kh担ng d湛ng tay ti畉p x炭c v畛i m畉u. S畉n ph畉m kh担, c坦 th畛 d湛ng h畛p kim lo畉i hay bao PE c坦 th畛 b畛t k鱈n 動畛c. L畉y 鱈t nh畉t 100g cho m畛i m畉u, kh担ng 動畛c l畉y m畉u 畉y b狸nh ch畛a 畛i v畛i m畉u l畛ng ph畉i ph畉i ki畛m so叩t nhi畛t 畛 t畉i th畛i i畛m l畉y m畉u.
  • 12. 2.2 D畛ng c畛 v thi畉t b畛: M叩y ly t但m Pipet c叩c lo畉iM叩y ly t但m Pipet c叩c lo畉iM叩y ly t但m
  • 13. M叩y xay sinh t畛 B狸nh 畛nh m畛c
  • 14. M叩y tr畉c quang UV-VIS Ph畛u chi畉tM叩y tr畉c quang UV-VIS Ph畛u chi畉tM叩y tr畉c quang UV-VIS
  • 15. 2.3 H坦a ch畉t: D湛ng ho叩 ch畉t c坦 畛 tinh khi畉t ph但n t鱈ch - Axit clohydric, dung d畛ch 1M - Natrihydroxyt, dung d畛ch 1N - Thu畛c th畛: ph竪n s畉t (III) amonium, dung d畛ch 2% trong axit sunfuric 1N - Clorofooc - Dung d畛ch g畛c ti棚u chu畉n streptomycin sunphat n畛ng 畛 1mg/ml - N動畛c c畉t 2 l畉n 2.4 C叩ch ti畉n hnh: Chu畉n b畛 m畉u ph但n t鱈ch M畉u th畛t c畉n ph但n t鱈ch 動畛c th叩i nh畛, nghi畛n m畛n, tr畛n 畛u v c但n 1 l動畛ng a = 20g cho vo m叩y xay sinh t畛. Th棚m 10 ml n動畛c c畉t vo v cho m叩y ch畉y trong 5 ph炭t. Cho 5 ml axit clohydric 1 M vo v 畛nh m畛c 畉n 50 ml b畉ng n動畛c c畉t. un trong b畉p c叩ch thu畛 s担i trong 10 ph炭t. 畛 ngu畛i, ly t但m l畉ng c畉n, l畉y dung d畛ch n動畛c trong cho vo ph畛u chi畉t, th棚m 10 ml clorofooc, l畉c trong 10 ph炭t sau 坦 畛 y棚n trong 15 ph炭t cho ph但n l畛p hon ton trong ph畛u chi畉t r畛i t叩ch l畉y t動畛ng h畛u c董 vo ph畛u chi畉t kh叩c, th棚m 2 ml natrihydroxyt 1N v 4 ml thu畛c th畛 ph竪n s畉t (III) amonium 2% trong axit v n動畛c c畉t 畉n 20 ml. L畉c m畉nh trong 30 ph炭t, sau 坦 畛 y棚n trong 20 ph炭t r畛i t叩ch l畉y ph畉n dung d畛ch n動畛c. Dung d畛ch ny d湛ng 畛 o m畉t 畛 quang, x叩c 畛nh streptomycin 畛 b動畛c s坦ng 525 nm.
  • 16. Pha d達y chu畉n: D湛ng dung d畛ch g畛c ti棚u chu畉n c畛a streptomycin sunphat n畛ng 畛 1mg/ml, t鱈nh to叩n l動畛ng ph湛 h畛p 畛 pha d達y dung d畛ch chu畉n c坦 n畛ng 畛 0,1- 0,5 - 1,0 - 1,5 - 2,0 - 2,5 亮g/ml trong c叩c b狸nh 畛nh m畛c c坦 th畛 t鱈ch 20 ml sau 坦 thu畛 ph但n b畉ng ki畛m, un c叩ch thu畛 cho s担i 10 ph炭t, 畛 ngu畛i r畛i cho 2 ml dung d畛ch thu畛c th畛 ph竪n s畉t (III) amonium 2%, 畛nh m畛c b畉ng n動畛c c畉t 畉n 20 ml r畛i 畛 sau 20 ph炭t m畛i ti畉n hnh o . Ti畉n hnh th畛: + 畉t s坦ng o v b畉t m叩y ch畉y cho 畛n 畛nh (5 ph炭t); + o m畉t 畛 quang c畛a m畉u chu畉n v m畉u ph但n t鱈ch 畛 b動畛c s坦ng 525 nm b畉ng Cuv辿t c坦 chi畛u dy 2 cm. D湛ng m畉u tr畉ng 畛 k棚nh so s叩nh lm m畉u so s叩nh v o m畛i m畉u 3 l畉n; + L畉p 畛 th畛 動畛ng chu畉n theo h畛 to畉 畛 D-C. Trong 坦 D l m畉t 畛 quang c畛a dung d畛ch m畉u chu畉n c坦 n畛ng 畛 C t動董ng 畛ng ; + X叩c 畛nh n畛ng 畛 Cx c畛a ch畉t ph但n t鱈ch theo 動畛ng chu畉n 達 d畛ng 動畛c. M畉u tr畉ng: M畉u tr畉ng ph畉i 動畛c chu畉n b畛 c湛ng m畛t i畛u ki畛n nh動 m畉u ph但n t鱈ch nh動ng thay m畉u ph但n t鱈ch tr棚n b畉ng n動畛c c畉t sao cho c坦 c湛ng th畛 t鱈ch
  • 17. 2.5 X畛 l箪 k畉t qu畉: Hm l動畛ng c畛a streptomycin trong m畉u ph但n t鱈ch 動畛c t鱈nh theo c担ng th畛c sau: Co= (Cx.V) / a T鱈nh b畉ng g/g Trong 坦: - a l l動畛ng m畉u c但n (畛 但y a = 20 g) - V l th畛 t鱈ch pha m畉u (V = 20 ml) - Cx l n畛ng 畛 streptomycin x叩c 畛nh 動畛c theo 動畛ng chu畉n
  • 18. III : CH畉T DI畛T KHU畉N 1. C叩c ph動董ng ph叩p ph但n t鱈ch: a. Ph動董ng ph叩p bi畉n 畛i s畛 chuy畛n h坦a c畛a n畉m men Ph動董ng ph叩p th動畛ng d湛ng l test qu叩 tr狸nh l棚n men.Th畛c ph畉m 動畛c 動a i l棚n men c坦 b畛 sung m畛t l動畛ng chu畉n n畉m men saccharomyces cerevisiae r畉t ho畉t 畛ng. Sau khi nu担i c畉y ki畛m tra th畛 t鱈ch kh鱈 CO2 t畉o thnh cho ph辿p k畉t lu畉n c坦 hay kh担ng c坦 m畉t ch畉t di畛t khu畉n. 2.1. Ph動董ng ph叩p vi sinh: b. Ph動董ng ph叩p ph叩t tri畛n trong m担i tr動畛ng th畉ch C董 s畛 c畛a ph動董ng ph叩p l cho m畉u vo trong m担i tr動畛ng th畉ch. N畉u m畉u c坦 ch畉t di畛t khu畉n s畉 ngn c畉n s畛 ph叩t tri畛n c畛a vi sinh v畉t tr棚n b畛 m畉t th畉ch. 動畛c so s叩nh v畛i m畉u ki畛m ch畛ng ti畉n hnh trong c湛ng i畛u ki畛n. ph動董ng ph叩p hay d湛ng: ph動董ng ph叩p Drieux v Thierry 叩p d畛ng cho t畉t c畉 c叩c s畉n ph畉m ngo畉i tr畛 b董. Ph動董ng ph叩p Mossel v Eijgelaar 叩p d畛ng cho ph但n t鱈ch b董.
  • 19. 2.2 Ph動董ng ph叩p h坦a l箪: Acid sorbic v sorbat C叩c ph動董ng ph叩p hay d湛ng: ph動董ng ph叩p so mu, ph動董ng ph叩p quang ph畛 h畉p th畛 t畛 ngo畉i, ph動董ng ph叩p s畉c k鱈 kh鱈 (GC), ph動董ng ph叩p s畉c k鱈 l畛ng hi畛u nng cao (HPLC) Acid Benzoic d畉n xu畉t D畉n xu畉t c畛a benzoic c坦 nhi畛u lo畉i: axit orthoclorobenzoic, paraclorobenzoic, salicylic, parahydroxybenzoic v c叩c ester metyl, propyl, butyl c畛a axit parahydroxybenzoic.Ph動董ng ph叩p th動畛ng d湛ng : s畉c k鱈 gi畉y, s畉c k鱈 b畉n m畛ng, ph動董ng ph叩p HPLC Anhydric sunfur董 v sunfit Anhydric sunfur董 動畛c 動a vo th畛c ph畉m l畛ng d動畛i d畉ng kh鱈 sunfur董, n坦 s畉 k畉t h畛p v畛i 動畛ng, etanol v c叩c ch畉t mu. N坦 th動畛ng t畛n t畉i m畛t ph畉n d動畛i d畉ng SO2 t畛 do c坦 m湛i 畉c tr動ng v c坦 t鱈nh di畛t khu畉n. Sau khi 畛t n坦ng m畉u v b畛 sung n動畛c, axit photphoric, c坦 th畛 x叩c 畛nh anhydric sunfur董 theo 2 c叩ch: + Nh畉n bi畉t m湛i + Con 動畛ng h坦a h畛c: d湛ng bng gi畉y amidon c坦 t畉m kali, khi c坦 m畉t SO2 , bng gi畉y s畉 hi畛n mu xanh. C坦 nhi畛u ph動董ng ph叩p k畛 thu畉t d湛ng 畛nh l動畛ng
  • 20. Biphenyl v orthophenyl-phenol C叩c h畛p ch畉t ny 動畛c s畛 d畛ng trong x畛 l箪 b畛 m畉t cam qu箪t Ch炭ng 動畛c x叩c 畛nh theo ph動董ng ph叩p Gunther,Blinn va Barkley: Nghi畛n qu畉, x畛 l箪 b畉ng h董i n動畛c thu ph畉n ch動ng b畉ng xyclohexan. Orthophenyl-phenol 動畛c chi畉t b畉ng dung d畛ch x炭t lo達ng, biphenyl v畉n c嘆n trong xyclohexan. Ti畉n hnh so mu 畛 248nm D畉n xu畉t halogen c畛a axit axetic C担ng th畛c chung CH2XCOOH.Trong 坦 axit monobromaxetic 動畛c d湛ng nhi畛u h董n c畉. C坦 nhi畛u ph動董ng ph叩p 動畛c d湛ng:Ph動董ng ph叩p Florentin- Munch,Cristol-Benezech,Jaulnes,Vivario. Axit boric C坦 nhi畛u ph動董ng ph叩p x叩c 畛nh axit boric trong th畛c ph畉m, ta c坦 th畛 k畛 t畛i 2 ph動董ng ph叩p ch鱈nh:Ph動董ng ph叩p chu畉n 畛,Ph動董ng ph叩p so mu Fomrmaldehyt v d畉n xu畉t Diemair v Postel 動a ra ph動董ng ph叩p ki畛m h坦a formol b畉ng ph畉n 畛ng v畛i axit cromotropic v畛i s畛 c坦 m畉t c畛a H2SO4.N畉u c坦 formol s畉 xu畉t hi畛n mu t鱈m.Censi v Cremonini 動a ra ph動董ng ph叩p 畛nh l動畛ng formol b畉ng c叩ch d湛ng 2,4-dinitrophenylhydrazin.
  • 21. Axit formic Ph動董ng ph叩p Lecoq:Chi畉t b畉ng ete petrol, sau 坦 ph畉n chi畉t ete 動畛c ki畛m h坦a b畉ng dung d畛ch x炭t 0,1N.T叩ch pha n動畛c v ti畉n hnh axit h坦a b畉ng H2SO4 1N, sau 坦 ch動ng c畉t 畉n khi ch畛 c嘆n kho畉ng vi ml d畛ch chi畉t.Gia nhi畛t ph畉n n動畛c ch動ng 15 ph炭t b畉ng un c叩ch th畛y, b畛 sung vi h畉t tinh th畛 HgCl2.N畉u c坦 m畉t axit formic, se t畉o k畉t t畛a tr畉ng.Gi畛i h畉n ki畛m tra c畛a ph動董ng ph叩p hm l動畛ng axit 300mg/l . H畛p ch畉t flo Ph動董ng ph叩p Truhaut: sau khi tro h坦a, chuy畛n ton b畛 flo thnh axit hydroflosilic b畉ng c叩ch cho t叩c d畛ng v畛i H2SO4 v畛i s畛 c坦 m畉t c畛a silic.Ch動ng c畉t cu畛n h董i n動畛c, thu axit flohydric (do th畛y ph但n axit hydroflosilic). Chu畉n 畛 flo b畉ng un d畛ch thori nitrat v畛i ch畛 th畛 natri alizarin-sulfonat ho畉c parasulfophenyl-azo-dihydroxynaphtalen-disulfonic(SPADN3). H畛p ch畉t amonium Ph動董ng ph叩p Diemair-Postel: chi畉t amoni b畉ng h畛n h畛p n動畛c-axeton,ti畉p theo b畉ng dicloetan , thu b畉ng bromophenol.C叩c h畛p ch畉t amoni t畉o ph畛c mu xanh v畛i bromophenol v 動畛c 畛nh l動畛ng b畉ng c叩ch so mu 畛 b動畛c s坦ng 608nm(x但y d畛ng 動畛ng chu畉n ).Ph動董ng ph叩p Miller-Wildbrett:c畉i ti畉n t畛 ph動董ng ph叩p tr棚n, h畛p ch畉t amoni t畉o ph畛c mu v畛i eosin v so mu 畛 542nm
  • 22. Hydroperoxyt 動畛c 叩p d畛ng nhi畛u trong c担ng nghi畛p s畛a. + Ph動董ng ph叩p h坦a h畛c: Ph動董ng ph叩p Pien, Desirant v Lafontaine; Ph動董ng ph叩p Rouquette; Ph動董ng ph叩p Amin v Olson; Ph動董ng ph叩p Ferrier;Ph動董ng ph叩p Gupta. + Ph動董ng ph叩p enzym: C坦 畛 nh畉y cao h董n ph動董ng ph叩p h坦a h畛c Hypoclorit v cloramin + Ph動董ng ph叩p h畛 tinh b畛t: Hypoclorit ph但n gi畉i iodua t畉o iod c坦 mu xanh v畛i h畛 tinh b畛t + Ph動董ng ph叩p hu畛nh quang: tr畛n 3ml m畉u v畛i h畛n h畛p H2SO4 (3+1) ch畛a 0,025% clorua thi畉c,gi畛 畛 nhi畛t 畛 0-5 0C.Ly t但m 3 ph炭t t畛c 畛 2500 v嘆ng/ph炭t.Thu k畉t t畛a soi 畛n ngo畉i t畛(365nm), n畉u th畉y mu l畛c nh畉t th狸 m畉u c坦 hypoclorit ho畉c cloramin.
  • 23. 2. Th畛c hnh: 2.1 Nguy棚n t畉c: Lm 畛ng nh畉t h坦a s畉n ph畉m, sau 坦 pha lo達ng v axit h坦a ph畉n m畉u th畛, chi畉t axit benzoic b畉ng dietyl ete, sau 坦 chi畉t l畉i axit ny b畉ng ki畛m v tinh ch畉 b畉ng c叩ch oxy h坦a kalidicromat 達 動畛c axit h坦a . X叩c 畛nh b畉ng c叩ch o quang ph畛 c畛a axit benzoic tinh khi畉t 動畛c h嘆a tan trong dietylete. 2.2 H坦a ch畉t: T畉t c畉 c叩c thu畛c th畛 ph畉i thu畛c lo畉i tinh khi畉t ph但n t鱈ch .Ph畉i s畛 d畛ng n動畛c c畉t ho畉c n動畛c tinh khi畉t t動董ng 動董ng Axit tactaric tinh th畛 NaOH 1N ; Axit sufuric(2+1) Kali dicromat 33-34ml dietyl ete m畛i 動畛c c畉t Axit benzoic, dung d畛ch chu畉n 0,1g/l trong dietyl ete 2.3 D畛ng c畛 v thi畉t b畛: B狸nh 畛nh m畛c 50ml Phi畛u chi畉t 500ml Pipe 20ml M叩y lm 畛ng ch畉t C但n ph但n t鱈ch B畉p c叩ch th畛y B狸nh c畉u 200ml c坦 n炭t gi, 動畛c lm b畉ng th畛y tinh M叩y 担 quang ph畛 x叩c 畛nh trong ph畉m vi tia c畛c t鱈m.
  • 24. 3.4 C叩ch ti畉n hnh: C叩c s畉n ph畉m l畛ng( d畛ch qu畉, c叩c s畉n ph畉m c坦 th畛t qu畉,xiro)v c叩c s畉n ph畉m 畉c(m畛t cam,m畛t nhuy畛n) : Lm 畛ng nh畉t m畉u th鱈 nghi畛m sau khi tr畛n S畉n ph畉m r畉n(rau, qu畉) : C畉t m畉u th鱈 nghi畛m ra thnh nhi畛u mi畉ng nh畛, b畛 h畉t, khoang l叩 no達n n畉u c畉n v nghi畛n tr畛n 畛ng nh畉t m畛t c叩ch c畉n th畉n kho畉ng 40g m畉u.畛 s畉n ph畉m 担ng l畉nh tan gi叩 trong m畛t b鱈nh k鱈n v cho d畛ch tan ch畉y vo s畉n ph畉m tr動畛c khi nghi畛n tr畛n m畉u. 3.4.1 Chu畉n b畛 m畉u th畛 C叩c s畉n ph畉m l畛ng:D湛ng pipet l畉y 20ml m畉u th畛, kh担ng c坦 c叩c ch畉t 畛 d畉ng huy畛n ph湛, pha lo達ng v畛i kho畉ng 50ml n動畛c v chuy畛n vo m畛t phi畛u chi畉t dung t鱈ch 500ml(phi畛u chi畉t A) C叩c s畉n ph畉m l畛ng ch畛a th畛t qu畉 : L畉y 20ml m畉u th畛 cho vo c畛i v nghi畛n v畛i 200ml n動畛c. L畛c ch畉t l畛ng sau khi g畉n. Lm 2 l畉n li棚n ti畉p, cho b達 vo 200ml n動畛c r畛i g畉n, l畛c l畉y ch畉t l畛ng.Thu ton b畛 d畛ch l畛c tr畛c ti畉p vo phi畛u chi畉t dung t鱈ch 500ml( phi畛u chi畉t A) C叩c s畉n ph畉m r畉n ho畉c 畉c : C但n kho畉ng 10g m畉u th畛 ch鱈nh x叩c 畉n 0,01g, v d湛ng 30 40ml n動畛c, chuy畛n m畉u vo b狸nh c畉u 250ml. Th棚m kho畉ng 50ml natrihydrocacbonat.L畉c, r畛i 畉t l棚n n畛i c叩ch th畛y, i畛u ch畛nh nhi畛t 畛 70 80 0C v 畛 trong 5 30 ph炭t.L畛c ph畉n ch畛a trong b狸nh c畉u v tr叩ng 2 l畉n b畉ng n動畛c, m畛i l畉n d湛ng 15-20ml.Thu ton b畛 d畛ch l畛c vo phi畛u chi畉t dung t鱈ch 500ml(phi畛u chi畉t A).畛 cho ngu畛i 3.4.2 Ph畉n m畉u th畛
  • 25. 3.4.3 Chi畉t axit benzoic Cho 1 g axit tartaric vo phi畛u chi畉t(A) ch畛a ph畉n m畉u th畛 達 動畛c pha lo達ng, th棚m 60ml dietyl ete v l畉c k挑. 畛 cho t叩ch l畛p, r畛i h畛ng l畛p ete vo phi畛u chi畉t th畛 hai dung t鱈ch 500ml(phi畛u chi畉t B).Sau 坦 r畛a ph畉n d畛ch trong phi畛u chi畉t th畛 nh畉t (A) b畉ng 60ml dietyl ete.畛 t叩ch l畛p, r畛i h畛ng ete vo phi畛u chi畉t (B) c坦 ch畛a l畛p ete thu 動畛c l畉n th畛 nh畉t.Ti畉p t畛c t動董ng t畛 l畉n chi畉t th畛 ba b畉ng 30ml dietyl ete v d畛n l畛p ete thu 動畛c vo c湛ng hai l畉n 畉u trong phi畛u chi畉t (B).Chi畉t axit benzoic t畛 dung d畛ch ete b畉ng c叩ch th棚m ti畉p 10ml v ti畉p 5ml dung d畛ch natrihydroxit, v sau 坦 2 l畉n,m畛i l畉n 10ml n動畛c. Sau m畛i l畉n cho th棚m l畉c, r畛i 畛 cho t叩ch l畛p v h畛ng l畉y ph畉n dung d畛ch.H畛ng d畛ch vo m畛t 挑a.畉t 挑a l棚n n畛i c叩ch th畛y,i畛u ch畛nh nhi畛t 畛 70-80oC, v 畛 坦 cho 畉n khi th畛 t鱈ch dung d畛ch ki畛m gi畉m kho畉ng m畛t n畛a,l畉y ph畉n dietyl ete 達 h嘆a tan c嘆n s坦t l畉i. 3.4.4 Tinh ch畉 axit benzoic Sau khi 畛 ngu畛i,r坦t d畛ch 畛 挑a vo m畛t b狸nh c畉u dung t鱈ch 250ml c坦 ch畛a h畛n h畛p 20ml dung d畛ch axit sunfuricv 20ml dung d畛ch kali dicromat.畉y n畉p b狸nh c畉u,l畉c v 畛 坦 鱈t nh畉t 1 gi畛
  • 26. 3.4.5 Chi畉t axit benzoic tinh khi畉t Chi畉t axit benzoic b畉ng c叩ch x畛 l鱈 dung d畛ch tr棚n (3.4)hai l畉n v畛i 20-25ml dietyl ete, thu l畉y dung d畛ch ete.R畛a dung d畛ch ete 2 l畉n b畉ng m畛t vi mililit n動畛c. Sau khi g畉n r畉t c畉n th畉n, l畛c qua gi畉y l畛c kh担 v thu d畛ch l畛c vo b狸nh 畛nh m畛c dung t鱈ch 50ml.Sau 坦 r畛a gi畉y l畛c b畉ng m畛t vi mililit dietyl ete, th棚m 畛 dung m担i r畛a ny vo d畛ch l畛c 畛 pha lo達ng t畛i v畉ch. 3.4.6 X叩c 畛nh D湛ng m叩y o quang ph畛, o 畛 h畉p th畛 c畛a dung d畛ch ete (3.5) li棚n quan 畉n 畛 h畉p th畛 c畛a dietyl ete tinh khi畉t 畛 b動畛c s坦ng 267,5nm 畉n 272nm v 276,5nm. 畛 h畉p th畛 do axit benzoic 動畛c t鱈nh b畉ng c担ng th畛c chung o s畛 ch棚nh l畛ch xu畉t hi畛n 畛 b動畛c s坦ng 272nm 1 3 2 2 A A A + Trong 坦 : A1: 畛 h畉p th畛 畛 267,5nm A2: 畛 h畉p th畛 畛 272 nm A3:畛 h畉p th畛 畛 276,5nm
  • 27. 3.4.7 S畛 l畉n x叩c 畛nh Ti畉n hnh hai l畉n x叩c 畛nh tr棚n c湛ng m畛t m畉u th畛 3.4.8 D畛ng 動畛ng chu畉n L畉y m畛t lo畉t 6 b狸nh 畛nh m畛c dung t鱈ch 50ml, l畉n l動畛t cho vo t畛ng b狸nh 5-7, 5-10, 5-15-20ml dung d畛ch chu畉n axit benzoic. Pha lo達ng t畛i v畉ch b畉ng dietyl ete.C叩c dung d畛ch thu 動畛c ch畛a tu畉n t畛10-15-20-25-30-40mg axit benzoic/lit.Ti畉n hnh o s畛 ch棚nh l棚ch 畛 h畉p th畛 c畛a c叩c dung d畛ch ny theo tr狸nh t畛 動畛c m担 t畉 畛 3.6.V畉 動畛ng cong bi畛u th畛 c叩c l畉n o s畛 ch棚nh l畛ch li棚n quan 畉n s畛 miligam axit benzoic/lit n棚u tr棚n
  • 28. 3.5 X畛 l鱈 k畉t qu畉 2 2 50 2,5 20 m m = Trong 坦: m2 l l動畛ng axit benzoic 畛c tr棚n 畛 th畛 chu畉n t鱈nh b畉ng miligam Ph畉n m畉u th畛 動畛c l畉y b畉ng c叩ch d湛ng pipet Hm l動畛ng axit benzoic s畉n ph畉m t鱈nh b畉ng miligam/lit theo c担ng th畛c: Ph畉n m畉u th畛 動畛c l畉y b畉ng c叩ch c但n Hm l動畛ng axit benzoic t鱈nh b畉ng miligam tr棚n kilogam s畉n ph畉m theo c担ng th畛c: 2 1 50 m m Trong 坦: m1- kh畛i l動畛ng c畛a ph畉n m畉u th畛 (g) m2- kh畛i l動董ng axit benzoic 畛c tr棚n 畛 th畛 chu畉n(mg)
  • 29. IV : 畛C T畛 VI N畉M 4.1 C叩c ph動董ng ph叩p ph但n t鱈ch: 4.1.1 ph但n t鱈ch aflatoxin Ph動董ng ph叩p nhanh s畛 d畛ng c畛t nh畛i 叩p d畛ng cho s畉n ph畉m rau qu畉 Ph動董ng ph叩p s畉c k鱈 b畉n m畛ng Ph動董ng ph叩p HPLC 4.1.2 Ph但n t鱈ch epoxy-tricotexen: K畛 thu畉t ROMER, BOLING v Mc DONALD Ph但n t鱈ch deoxynivalenol (DON) 4.1.3 Ph但n t鱈ch zearalenon: Ph動董ng ph叩p RIA Ph動董ng ph叩p ELISA S畉c k箪 叩i l畛c mi畛n nhi畛m
  • 30. 4.3 Th畛c hnh X叩c 畛nh hm l動畛ng aflatoxin 4..3.1 Nguy棚n t畉c: Aflatoxin 動畛c chi畉t t畛 m畉u th畛 b畉ng c叩c h畛 dung m担i h畛u c董 kh叩c nhau. D畛ch chi畉t 動畛c l畛c, m畛t ph畉n d畛ch l畛c 動畛c lm s畉ch qua c畛t silicagen (florisil, SPE). Lm bay h董i dung d畛ch r畛a gi畉i v h嘆a tan c畉n v畛i dung m担i pha 畛ng r畛i b董m vo h畛 th畛ng s畉c k箪 l畛ng hi畛u nng cao (HPLC). 4.3.2 H坦a ch畉t,thu畛c th畛 T畉t c畉 h坦a ch畉t 畛u ph畉i l lo畉i tinh khi畉t ph但n t鱈ch s畉c k箪 n畉u kh担ng c坦 c叩c ch畛 d畉n ri棚ng no kh叩c. C叩c chu畉n aflatoxin B1, B2, G1, G2 Metanol, hexan, clorofooc, ete etylic, axetonitric, toluene, natrisunfat khan, celit 545, kh鱈 N2 tinh khi畉t 4.3.3 D畛ng c畛,thi畉t b畛 - HPLC v畛i 畉u d嘆 UV - C叩c lo畉i pipet - C但n ph但n t鱈ch 10-4g - Gi畉y l畛c - M叩y li t但m - Xylanh -B董m h炭t ch但n kh担ng - B畛 ph畛u h炭t ch但n kh担ng - C畛t s畉c k箪 th畛y tinh
  • 31. M叩y khu畉y t畛 M叩y c畉t quay ch但n kh担ng M叩y nghi畛n
  • 32. 4.4 C叩ch ti畉n hnh: Chu畉n b畛 m畉u: C但n 50g m畉u 達 nghi畛n nh畛 cho vo b狸nh n炭t mi 500ml. Cho ti畉p 25ml n動畛c, 25g celite 545, 250ml clorofooc, 畉y n炭t ch畉t. L畉c trong 30 ph炭t b畉ng m叩y l畉c quay tr嘆n hay m叩y khu畉y t畛, r畛i l畛c qua gi畉y l畛c g畉p c畉nh, b畛 10ml dung d畛ch l畛c ti畉p theo. N畉u t畛c 畛 d畛ch l畛c xu畛ng ch畉m, chuy畛n sang ph畛u Buchner ch畛a m畛t l畛p celite 545 dy 5mm tr棚n gi畉y l畛c v d湛ng h炭t ch但n kh担ng. Lm s畉ch m畉u b畉ng c畛t s畉c k箪: Chu畉n b畛 c畛t s畉c k箪, cho m畛t 鱈t b担n vo 叩y c畛t s畉c k箪, them 5g natrisunfat khan. 畛 clorofooc 畉n 2/3 c畛t, sau 坦 cho 10g silicagen l畉ng 畛u, d湛ng 滴a th畛y tinh khu畉y nh畉 畛 tr叩nh b畛t kh鱈. M畛 kh坦a cho clorofooc ch畉y xu畛ng t畛 t畛. Khi t畛c 畛 l畉ng c畛a silicagen ch畉m l畉i, r炭t h畉t clorofooc ch畛 畛 l畉i m畛t l畛p 5cm ph鱈a tr棚n l畛p silicagen. Th棚m t畛 t畛 15g natrisunfat khan, sau 坦 r炭t b畛t clorofooc 畉n g畉n s叩t l畛p natrisunfat khan tr棚n. Tr畛n 50ml d畛ch l畛c tr棚n v畛i 150ml n-hexan, 畛 c畉n th畉n vo c畛t s畉c k箪 達 chu畉n b畛 nh動 tr棚n, lo畉i b畛 dung d畛ch ch畉y ra. Cho ti畉p 150ml ete etylic khan, lo畉i b畛 dung d畛ch ch畉y ra, kh担ng 畉 c畛t b畛 kh担, l動u l動畛ng d嘆ng ch畉y: 8-12ml/ph炭t. R畛a gi畉i aflatoxin b畉ng 150ml h畛n h畛p methanol-clorofooc. L畉y ton b畛 d畛ch ch畉y ra, l動u l動畛ng d嘆ng ch畉y nh動 tr棚n. Lm bay h董i dung d畛ch r畛a b畉ng m叩y c畉t quay ch但n kh担ng cho 畉n khi ch畛 c嘆n kho畉ng 2-3ml 畛 nhi畛t 畛 th畉p h董n 500C, t畛t nh畉t d動畛i lu畛ng kh鱈 N2 nh畉. H嘆a tan c畉n b畉ng 1ml dung m担i pha 畛ng v b董m vo HPLC.
  • 33. 4.5 X畛 l箪 k畉t qu畉: So s叩nh th畛i gian l動u c畛a m畛i 畛nh so v畛i 畛nh ch畉t chu畉n 畛 畛nh t鱈nh So s叩nh chi畛u cao (h) ho畉c di畛n t鱈ch c畛a m畛i pic (Si) v畛i pic ch畉t chu畉n t動董ng 畛ng (Sm) 畛 t鱈nh 畛nh l動畛ng. Hm l動畛ng aflatoxin t畛ng lo畉i trong m畉u (mg/kg) 動畛c t鱈nh theo c担ng th畛c: . . . i i i m S C V X S m = Trong 坦: Si : di畛n t鱈ch pic t動董ng 畛ng m畉u ch畉t i Sm : di畛n t鱈ch pic t動董ng 畛ng c畛a m畉u chu畉n c坦 ch畉t i Ci : n畛ng 畛 ch畉t i c坦 trong m畉u chu畉n, mg/ml V : th畛 t鱈ch d畛ch m畉u cu畛i c湛ng, ml m : kh畛i l動畛ng m畉u ph但n t鱈ch