2. FIZIOLOGIJA KRVNIH 貼ILA
Dobro razumijevanje fiziologije vaskularnog sustava nu転no je za
razumijevanje tijeka pokusa
Mehanizmi vazodilatacije i vazokonstrikcije
3. Unutarstanina signalizacija
V r s t e r e c e p t o r a:
1. R e c e p t o r o v i s n i i o n s k i k a n a l i (ionotropni receptori)
2. R e c e p t o r i s p r e g n u t i s G -p r o t e i n o m (metabotropni
receptori)
3. K i n a z n i r e c e p t o r i
4. N u k l e a r n i r e c e p t o r i
4. R R E R
G G
Stanini
odgovor Stanini odgovor
Stanini
odgovor
Stanini
odgovor
Hiperpolarizacija ili
depolarizacija
Promjena
podra転lji-
vosti
Drugi glasnici
Otpu邸tanje
Ca2+
Fosforilacija
proteina drugo
Fosforilacija
proteina
Transkripcija gena
Sinteza proteina
R
Transkripcija
gena
Sinteza proteina
1. Receptor-ovisni
ionski kanali
2. Receptori spregnuti sa
G-proteinima
(metabotropni receptori)
3. Kinazni
receptori
4. Nuklearni
receptor
Vremenska skala:
Milisekunde
Primjer:
Nikotinski
receptor za Ach
Vremenska skala:
Sati
Primjer:
Citokinski
receptor
Vremenska skala:
Sati
Primjer:
Estrogenski
receptori
Vremenska skala:
sekunde
Primjer:
Muskarinski receptor za Ach
6. Unutarstanina signalizacija
Receptori spregnuti sa G proteinom
Meta
1
Meta
2 留 硫粒
GDP
Meta
1
Meta
2 留 硫粒
GDP
GTP
Meta
1
Meta
2 留 硫粒
GTP
Meta
1
Meta
2 留 硫粒
GDP
+
P
Receptor zauzet
Meta aktiviranaGTP hidroliziran
1.
4. 3.
2.
GDP
25. PRIPREMA ZA POKUS
Pokretanje sustava (temp . 37 C, doprema O2 itd.)
Kalibracija sustava
Priprema Krebs Henseleitove otopine
Razrijaivanje lijekova
26. 4-vero kanalni sustav kupki za izolirane organe
sadr転i:
etverokanalni standardni sustav kupki za izolirane organe (tkivne prstenove i trakice) sa svom
prikljunom opremom (cijevi, kablovi itd.)
etverokanalni pojaiva mjerene sile
Izometrini pretvara sile
Softwer za prikupljanje i obradu podataka
Sustav za primanje i prijenos siganala sa sustava kupki za izolirane organe na raunalo (etverokanalni s
moguno邸u pro邸irivanja na osamkanalni sustav)
Sustav za grijanje i cirkulaciju vode sa spremnikom od 20 l i moguno邸u prilagodbe temperature u
rasponu od 20 50 尊C te s precizno邸u od 賊0,1 尊C
31. PRIPREMA LIJEKOVA ZA POKUS
Lijekovi se pripremaju kao 20 mM (iznimno 3M i 2mM)
uvaju se 2 do 3 mjeseca na -20 C
KCl
32. Lijek/aktivna tvar Mr (g/L)
Priprema
20 mM
otopine
Koncentra-cija u
bazenu
Potrebno dodatno razrjeenje
20 mM otopine
Vol. koji se dodaje
u bazeni (亮L)
KCl 74,56
Priprema se 3M
11,3g/50mL
60 mM Ne 400
Noradrenalin 205,0 41mg/10mL 10-4 M
Zamorac: 100 x (10-6)
takor: 1000x (10-7)
100
Acetilkolin 181,7 36,4mg/10mL 10-4 M
Zamorac: 10 x (10-5)
takor: 100x (10-6)
100
L-NAME 268,0 53,6mg/10mL 3x10-4 M Ne 300
Indometacin 358,0 71,6mg/10mL 10-4 M 10x (10-5 M) 100
Klotrimazol 344,8 69mg/10mL 10-4 M 10x (10-5 M) 100
Verapamil
491,0
amp: 5mg/2mL
Priprema se 2 mM
4 mL iz amp. + 6 mL H2O
20 亮M Ne 200
* Otapalo za Indometasin je 96% etanol ili DMSO/ ponekad i dr. Ovisno o proizvoau
37. STANDARDNI PROTOKOL
1. Stabilizacija krvne 転ile
2. Inicijalni prekontrakcijski test
3. Test intaktnosti endotela
4. Ispitivanje vazoaktivne tveri
38. 1. Stabilizacija krvne 転ile (60 min)
Krvna 転ila se prenapregne za 20 mN
U vi邸e navrata napetosti krvne 転ile se ispravlja
na 20 mN (ili 0 mN ako sustav bazino pode邸en
na 20 mN)
Tijekom tog perioda bazenii se ispiru 3-4puta
(cca. svakih 15 min)
40. 3. Testiranje intaktnosti endotela
100亮L 1000x razr. 20 mM
NORADRENALINA
(10-7M)
100亮L 100x razr. 20 mM
ACETILKOLINA
(10-6M)
Ispiranje4 min 1 min
1 min
Ispiranje
Ispiranje
4 min
41. 4. Testiranje vazoaktivne tvari
100亮L 1000x razr. 20 mM
NORADRENALINA
(10-7M)
VAZODILATATOR
u razliitim dozama
4 min
47. Skupina GUK (mmol/l) Te転ina (g) Sustav na kojem se radilo Opaske Oznake prstenova
A - Kontrola Citrat (okot
10.08.2009., TH: 09.09.2009, m 90. g)
A1a 9,7 310 I. Aorta bila skvrena i kontrahirana A1a 1-4
A1b 9,7 320 II. A1b 1-4
A1c 9,7 305 I. Aorta bila skvrena i kontrahirana A1c 1-4
A2a 11,3 310 I. A2a 1-4
A2b 10 290 II.
Problemi tijekom pokusa - 転ila bila du転e na suhom jer
sust. nije bio spreman
A2b 1-4
A2c Falilo trakica 300 II. A2c 1-4
B - Kontrola netretirana (okot
12.08.2009.)
B1a 9,3 360 I. B1a 1-4
B1b 8,6 320 II. B1b 1-4
B1c 10,9 305 I. B1c 1-4
B2a 9,5 350 I.
Serum odmrzavan zajedno s A2a, A2b i B2b - da
Danijeli ostavim 0,5 ml za Oksi.kapac.
B2a 1-4
B2b 10,7 285 II. Serum mogue razrijeen kod odmrzavanja B2b 1-4
B2c 10,3 280 I. B2c 1-4
C - Dijabetiari + HBTh (okot
25.07.2009., TH: 09.09.2009, m 90. g)
C1a > 33 250 I. C1a 1-4
C1b > 33 285 II. C1b 1-4
C1c 8 290 II. C1c 1-4
C2a > 33 225 I. C2a 1-4
C2b > 33 250 II. C2b 1-4
C2c > 33 225 II. C2c 1-4
D - Dijabetiari netretirani (okot
01.08.2009., TH: 09.09.2009, m 90. g)
D1a > 33 250 I. D1a 1-4
D1b 7,8 320 II. D1b 1-4
D1c > 33 210 II. D1c 1-4
D2a > 33 200 I. D2a 1-4
D2b > 33 170 II. D2b 1-4
D2c 10,2 300 I. Kod odvajanja serum bijel + bijeli ugru邸ak D2c 1-4
Nisu razvili dijabetes