黄姿瑜
- 1. 利用免疫萤光法来看顿笔4础抗体在剔除颁顿26老鼠上 的結合情形 長榮大學生物科技學系 100學年度專題實習 實習單位:國立成功大學醫學院生物化學兼分子生物學研究所 指導老師:鄭宏祺老師 報告者：黄姿瑜 Abstract 癌症轉移是使癌症病患致死的主要原因，若能有效抑制轉移發生將可延長癌症病患生命。實驗室過去利用大白鼠乳癌 model發現，在懸浮狀態下大白鼠乳腺癌細胞MTF7會藉由其表面組裝之纖連蛋白基質(Fibronectin matrix；FN matrix) 與肺臟內皮細胞表面之第四型雙胜肽水解酶(Dipeptidyl peptidase IV；DPP IV)結合，促使乳癌轉移至肺臟，如左圖所 示。 兩分子的結合是造成肺臟之臟器特異性轉移主因之ㄧ，因此若可以藉由阻斷FN與DPP IV的結合是一種抑制癌症轉移的對 策，實驗室已經發現6A3可與DPP IV結合，使tumor cell-poly FN無法認到DPP IV，但是由於6A3只能和Rat DPPIV結合， 人或mouse的序列則不能，所以進而在小鼠身上找到可與DPP IV片段結合，我們稱之為DP4A，如右圖所示。 Introduction 經由學長姐的文獻，實驗室想深入的研究DPP IV的重要性，故將mice的CD26 knockout，並進行一連串相關的實驗，其中 一項實驗是利用Immunofluorescence test DP4A antibody in knockout mice.接著實驗室開始配種、check mice基因型， 另一方面，利用rbt產生DP4A antibody並且Purified antibody。 Method 1) PCR check the DPPⅣ Genomic DNA of CD26 knockout mice. 2) Purify DPPⅣA antibody and Westen blot analysis check. 3) Immunofluorescence test DP4A antibody in knockout mice. Results 圖一、PCR check the DPPⅣ Genomic DNA of CD26 圖二、利用Westen blot analysis check Purified knockout mice. DPPⅣ antibody. 第一、二條lane是第九隻老鼠的sample，分別是DPPⅣ當 第一、三、五、七、九條lane為marker，用來判斷 primer和Neo當primer的sample，依此類推。 MBP protein的相對位置；第二、四、六、八、十條 第九、十條lane為DPPⅣ positive control與DPPⅣ lane為MBP protein，分別用來test不同的一抗，為 nagative control；第十一、十二條lane為Neo gene rbt serum 1：50000、α DPPⅣB未過 1：50000、 positive control與Neo gene nagative control。 α DPPⅣB② 1：5000、α DPPⅣB③ 1：5000、α 最後的lane為Marker，大小為100bp。 DPPⅣ④ 1：5000。 Discussion 由圖一.可以得知，第九隻為CD26 +/- ，第十隻則為CD26 +/+，第十一、十二隻為knockout mice。 由圖二.可以得知Purified的乾淨程度為：α DPPⅣ④ >α DPPⅣB③ >α DPPⅣB② >α DPPⅣB未過。 由於Immunofluorescence test DP4A antibody in knockout mice 的DATA為學姐的，所以沒有放結果圖。由學姐DATA的 結果是有染到，但是在knockout mice體內的CD26已經被knockout，故在正常行況下是不應該染到，推測在knockout mice體內可能有類似DPPⅣ的結構存在！ 誌謝 感謝成功大學醫學院生物化學兼分子生物學研究所鄭宏祺老師讓我有這個實習的機會；感謝張明敏學姐、陳馨怡學姐和 郭子瑋學長用心的教導；感謝實驗室其他成員，鄭錦雲學姐、鄭昭旻學長、林宥全學長、楊依珊學姐、黃馨慧學姐、李 明澤學長、楊承翰學長、林宗成學長其他實習生們的陪伴與幫助；感謝我的父母一路支持我、鼓勵我、安慰我；還有感 謝宋瑩珠老師、黃惠蘭老師及許鴻猷老師擔任我們這兩個月暑期專題實習的老師。