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洪昆瑨

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乙玄 黃
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Generation Pre-stained Molecular Weight Marker 長榮大學生物科技系 實習單位：國立成功大學醫學院生物化學暨分子生物學研究所 指導老師：鄭宏祺 老師 實習學生：洪昆瑨 Abstract 思考是否有什麼方法 Lab 可以自己製造。經過文獻的搜尋之後我們找到了一篇就是製造pre-stained 的相關文獻，於是我們可以遵循相似步驟來試試看。在實際應用中 至少需要loading多少protein才可看得清楚，而將各個marker混在一起後在gel中是否很正常的分開。就是染劑的這些官能基會與蛋白質的氨基接合上，而在SDS- PAGE產生出用肉眼可以看見的band。我們在『Generation of multicolored, pre-stained molecular weight markers for gel electrophoresis』這篇文獻中找到了一些方法， 我們將遵循這篇文獻的實驗方法去進行嘗試，但是會依據我們得到的結果去進行修改與嘗試。Paper裡面提到有對溫度、pH值、染劑含量、時間等因素進行實驗以及 討論，我們也將著手從這些因素中尋找適合我們Lab製造protein Marker的製造的最佳條件。因為普遍Marker的顏色是藍色，所以一開始我原本也是要挑選藍色的染 劑來進行測試，但是我看了paper之後發覺其實紅色也是非常明顯而且搶眼，似乎非常容易辨別，因此我挑選了紅色來進行測試，溫度部分參考了paper中的60℃還有 染劑部分則是與蛋白質呈現1：1的比例，至於pH值則從8.0~8.5開始著手，蛋白質則是選擇Lab裡存量比較多的BSA來進行測試。LEVAFIX BRILLIANT RED E-BA GRAN在與BSA進行反應的時候溫度約80℃會與60℃的Bane有所差別存在。進行pre-stained過後的protein在要進行loading之前最好不要再進行95℃的加熱，不然效果 會減弱許多。LEVAFIX BRILLIANT RED E-BA GRAN相較於其他顏色還說比較穩定（例如：LEVAFIX BLUE CAGRAN、Levafix Navy CA Gran…）所以之後的 pre-stained將考慮用LEVAFIX BRILLIANT RED E-BA GRAN來進行。 protocol Result LEVAFIX BRILLIANT RED E-BA GRAN染色測試： 藥品配置： 1. LEVAFIX BRILLIANT RED E-BA GRAN配置： 藥品名稱 體積（mg/ml） LEVAFIX BRILLIANT RED E- 6 mg BA GRAN 10% SDS 50 ml Figure 2 SDS-PAGE A).99 ml的1X+ Sample Buffer + 1 ml的10%BSA。B).99 ml的1X+ 2. 10%BSA稀釋配置： Sample Buffer + 1 ml的Marker BSA。C).99 ml的1X+ Sample Buffer + 1 ml的Marker BSA（不 進行95℃煮沸），X=沒東西 藥品名稱 體積（mg/ml） 10% BSA 5 mg 0.1M Na2Co3（pH：8.35） 250 ml 3. 將1、2的Solution加在一起，要Mix均勻，後面稱為Marker BSA。 4. 封一層PALAFILM，夾個防爆夾。60℃加熱大約30min – 1hr。 5. 拿起來，加入Ethanolamine（乙醇胺）1 ml再加熱10min，進行 blocking。 Figure 3 SDS-PAGE by Coomassie blue Land 1). Solution A(99 ml的1X+ Sample Buffer + 1 ml的10%BSA) 2 mg Land 2). Solution B(99 ml的1X+ Sample Buffer + 1 ml的Marker BSA) 2 mg Figure 1 step1~step5的圖示表示 6. On ice，再將6X+ Sample Buffer稀釋成1X+ Sample Buffer。 7. 將要loading的Sample稀釋100X。 8. 分成3管1.5ml tube，各加入99 ml的1X+ Sample Buffer。 A. 99 ml的1X+ Sample Buffer + 1 ml的10%BSA B. 99 ml的1X+ Sample Buffer + 1 ml的Marker BSA。 C. 99 ml的1X+ Sample Buffer + 1 ml的Marker BSA（不進 行95℃煮沸） 9. 將A、B拿去95℃加熱10min，之後開始load Sample。 Conclusion 下表格是SDS-PAGE示意圖，A、B、C為Step8中的溶液代號。 ? LEVAFIX BRILLIANT RED E-BA GRAN在與BSA進行反應的時 候溫度約80℃會與60℃的Bane有所差別存在。 ? 進行pre-stained過後的protein在要進行loading之前最好不要再進 行95℃的加熱，不然效果會減弱許多。 ? LEVAFIX BRILLIANT RED E-BA GRAN相較於其他顏色還說比 較穩定（例如：LEVAFIX BLUE CAGRAN、Levafix Navy CA Gran…）所以之後的pre-stained將考慮用LEVAFIX BRILLIANT RED E-BA GRAN來進行。 誌 謝 很謝謝這兩個月來鄭老師對我不厭其煩的敦敦教誨，謝謝這lab的所有學長姐很有耐心的教我們怎麼進行實驗、怎麼避免錯誤，其是宥全學長冒著我可能 把她Data弄錯的風險還讓我跟在他旁邊學習、幫忙，真的很謝謝這2個月來老師以及學長姐對我的照顧。讓我不僅僅學到科學真正的涵義，也讓我學習到怎麼 看待科學這塊領域。

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洪昆瑨

  • 1. Generation Pre-stained Molecular Weight Marker 長榮大學生物科技系 實習單位：國立成功大學醫學院生物化學暨分子生物學研究所 指導老師：鄭宏祺 老師 實習學生：洪昆瑨 Abstract 思考是否有什麼方法 Lab 可以自己製造。經過文獻的搜尋之後我們找到了一篇就是製造pre-stained 的相關文獻，於是我們可以遵循相似步驟來試試看。在實際應用中 至少需要loading多少protein才可看得清楚，而將各個marker混在一起後在gel中是否很正常的分開。就是染劑的這些官能基會與蛋白質的氨基接合上，而在SDS- PAGE產生出用肉眼可以看見的band。我們在『Generation of multicolored, pre-stained molecular weight markers for gel electrophoresis』這篇文獻中找到了一些方法， 我們將遵循這篇文獻的實驗方法去進行嘗試，但是會依據我們得到的結果去進行修改與嘗試。Paper裡面提到有對溫度、pH值、染劑含量、時間等因素進行實驗以及 討論，我們也將著手從這些因素中尋找適合我們Lab製造protein Marker的製造的最佳條件。因為普遍Marker的顏色是藍色，所以一開始我原本也是要挑選藍色的染 劑來進行測試，但是我看了paper之後發覺其實紅色也是非常明顯而且搶眼，似乎非常容易辨別，因此我挑選了紅色來進行測試，溫度部分參考了paper中的60℃還有 染劑部分則是與蛋白質呈現1：1的比例，至於pH值則從8.0~8.5開始著手，蛋白質則是選擇Lab裡存量比較多的BSA來進行測試。LEVAFIX BRILLIANT RED E-BA GRAN在與BSA進行反應的時候溫度約80℃會與60℃的Bane有所差別存在。進行pre-stained過後的protein在要進行loading之前最好不要再進行95℃的加熱，不然效果 會減弱許多。LEVAFIX BRILLIANT RED E-BA GRAN相較於其他顏色還說比較穩定（例如：LEVAFIX BLUE CAGRAN、Levafix Navy CA Gran…）所以之後的 pre-stained將考慮用LEVAFIX BRILLIANT RED E-BA GRAN來進行。 protocol Result LEVAFIX BRILLIANT RED E-BA GRAN染色測試： 藥品配置： 1. LEVAFIX BRILLIANT RED E-BA GRAN配置： 藥品名稱 體積（mg/ml） LEVAFIX BRILLIANT RED E- 6 mg BA GRAN 10% SDS 50 ml Figure 2 SDS-PAGE A).99 ml的1X+ Sample Buffer + 1 ml的10%BSA。B).99 ml的1X+ 2. 10%BSA稀釋配置： Sample Buffer + 1 ml的Marker BSA。C).99 ml的1X+ Sample Buffer + 1 ml的Marker BSA（不 進行95℃煮沸），X=沒東西 藥品名稱 體積（mg/ml） 10% BSA 5 mg 0.1M Na2Co3（pH：8.35） 250 ml 3. 將1、2的Solution加在一起，要Mix均勻，後面稱為Marker BSA。 4. 封一層PALAFILM，夾個防爆夾。60℃加熱大約30min – 1hr。 5. 拿起來，加入Ethanolamine（乙醇胺）1 ml再加熱10min，進行 blocking。 Figure 3 SDS-PAGE by Coomassie blue Land 1). Solution A(99 ml的1X+ Sample Buffer + 1 ml的10%BSA) 2 mg Land 2). Solution B(99 ml的1X+ Sample Buffer + 1 ml的Marker BSA) 2 mg Figure 1 step1~step5的圖示表示 6. On ice，再將6X+ Sample Buffer稀釋成1X+ Sample Buffer。 7. 將要loading的Sample稀釋100X。 8. 分成3管1.5ml tube，各加入99 ml的1X+ Sample Buffer。 A. 99 ml的1X+ Sample Buffer + 1 ml的10%BSA B. 99 ml的1X+ Sample Buffer + 1 ml的Marker BSA。 C. 99 ml的1X+ Sample Buffer + 1 ml的Marker BSA（不進 行95℃煮沸） 9. 將A、B拿去95℃加熱10min，之後開始load Sample。 Conclusion 下表格是SDS-PAGE示意圖，A、B、C為Step8中的溶液代號。 ? LEVAFIX BRILLIANT RED E-BA GRAN在與BSA進行反應的時 候溫度約80℃會與60℃的Bane有所差別存在。 ? 進行pre-stained過後的protein在要進行loading之前最好不要再進 行95℃的加熱，不然效果會減弱許多。 ? LEVAFIX BRILLIANT RED E-BA GRAN相較於其他顏色還說比 較穩定（例如：LEVAFIX BLUE CAGRAN、Levafix Navy CA Gran…）所以之後的pre-stained將考慮用LEVAFIX BRILLIANT RED E-BA GRAN來進行。 誌 謝 很謝謝這兩個月來鄭老師對我不厭其煩的敦敦教誨，謝謝這lab的所有學長姐很有耐心的教我們怎麼進行實驗、怎麼避免錯誤，其是宥全學長冒著我可能 把她Data弄錯的風險還讓我跟在他旁邊學習、幫忙，真的很謝謝這2個月來老師以及學長姐對我的照顧。讓我不僅僅學到科學真正的涵義，也讓我學習到怎麼 看待科學這塊領域。