ºÝºÝߣ

ºÝºÝߣShare a Scribd company logo

T?bbi mikrobiyoloji viral hepatitlerde dendritik h¨¹cre bazl? tedaviler

?Download as PPT, PDF?
?
Samuel Orthez
Samuel Orthez

Viral hepatit ile ilgili t?bbi mikrobiyoloji sunumlar?

1 of 42
Download to read offline
Viral Hepatitlerde Dendritik H¨¹cre Bazl? Tedaviler Prof.Dr.Erc¨¹ment Oval? KT?-Ati Teknoloji Proje sorumlusu
G¨¹n¨¹m¨¹zde viral ve maling hastal?klar?n tedavisinde ?ok ?nemli geli?meler olmas?na ra?men, Mevcut tedavilerin yeterli oldu?unu s?ylemek m¨¹mk¨¹n de?ildir
Bu durumda farkl? tedavi se?eneklerine gereksinim vard?r Bu se?eneklerden biri imm¨¹noterapi uygulamalar?d?r.
Kullan?lan imm¨¹noterapi rejimlerinden biride DENDR?T?K H?CRE bazl? uygulamalard?r.
? Dentritik h¨¹creler profesyonel antijen sunan h¨¹crelerdir(ASH). ? ASH i?inde kendisine en yak?n rakibinden 100 kat daha g¨¹?l¨¹ bir ?ekildeT lenfositleri uyarabilmektedirler .
DH¡¯nin ?yk¨¹s¨¹ ? 19. y¨¹zy?lada Paul Langerhans LH¡¯ni tan?mlad? ? 1973¡¯de Stainman bu h¨¹creler i?in DH tan?m?n? kulland? ? 1990¡¯l? y?llarda DH k?k h¨¹creden ve monositlerden ¨¹retilmeye ba?land? ? 2000 y?l?dan sonra ilk klinik ?al??malar ba?lad?
DH¡¯nin kayna?? ? DH¡¯ler heterojen bir grup h¨¹cre olup kemik ili?inden De?i?ik b¨¹y¨¹me fakt?rlerinin(flt3-l, GM-CSF vb) varl???nda olu?urlar. ? Periferik kanda ise DH¡¯ler HLA-DR pozitif olup CD11c ve CD123 varl???na g?re iki ayr? gruba ayr?l?rlar ¨C Myeloit DH : CD 11c pozitif CD123 negatif (DC1) ¨C Plazmasitoit DH:CD11c negatif CD123 pozitif(DC2). Yung JW. ASH Education program book. San Francisco, California December 1-5. p:361-366: 2000 Osada T et al. Rev. Immunol. 25:377-413:2006
Morfolojik Karakterleri ? ?simlerinin tan?mlad??? gibi t¨¹y¨¹ms¨¹ ??k?nt?lar? olan , oval ?ekirdekli iyi geli?mi? ER¡¯ye sahip h¨¹crelerdir. ? Plazmastoit tipi ise plazma h¨¹cresine benzer
Fonksiyonel Karakterleri ? 3 farkl? fonksiyonel karaktere sahiptirler: ¨C T h¨¹cre uyar?m? ¨C ?mm¨¹n tolerans?n ind¨¹klenmesi ¨C B h¨¹cre fonksiyonlar?n?n d¨¹zenlenmesi
Dendritik H¨¹cre Bazl? tedaviler ? Bir ?ok olguda imm¨¹n sistem t¨¹m?r¨¹/viral y¨¹k¨¹ eradike edemez. Buda t¨¹m?r¨¹n yay?lmas? ile sonu?lan?r. ?¨¹nk¨¹:
T¨¹m?r ?mm¨¹n Kontrolden saklanmaktad?r. A-T¨¹m?r¨¹n gizlenmesi 1- Costimulatuar molek¨¹l ekspresyonunu azalt?rlar 2- MHC I ve II eksp. azalt?r. 3- Target antijen genlerini bask?larlar B-?mm¨¹n supresyon ind¨¹ksiyonu 1- IL-10 sekresyonunu art?r?rlar Th3tip yan?t(Treg) 2- TGF beta sekresyonunu art?r?rlar 3- Solub?l ihibit?rleri art?r?rlar)(iNOS,ARG-1). 4- Fas-L salg?s?n? art?r?rlar. 5- H?zl? proliferasyonla tolerans? ind¨¹klerler
Viral y¨¹k¨¹n eradike edilememe nedenleri ? Yetersiz imm¨¹n yan?t(?zellikle akut faz?n semptomatik ge?ti?i hastalarda viral y¨¹k daha y¨¹ksek olmaktad?r) (Thimme et al., 2001) ? T lenfosit epitoplar?nda mutasyonlar (Erickson et al., 2001; Weiner et al., 1995); ? Viral proteinlerle imm¨¹n yan?t?n bask?lanmas? (Gale et al., 1997; Keskinen et al., 2002;Kittlesen et al., 2000). ? APC, H¨¹cresel yan?t?n bozuk olmas? (Cooper et al., 1999; Thimme et al., 2002);
? DH ise klas I ,II ve costim¨¹latuar molek¨¹ller y¨¹ksek oranda ta??r. ? Ve istenirse Th1 ve/veya Th2 yan?t? ind¨¹kleyebilir
DH¡¯lerin elde edilmesi ? ?retim ? ?zolasyon
?retim ? CD 34 k?k h¨¹crelerden DH ?retimi: ¨C Flt3L, IL-3 and IL-6, ile 14 g¨¹nl¨¹k bir ink¨¹basyon sonras? IL-4 and GM-CSF 3 g¨¹nl¨¹k yeni besleme s¨¹reci ? Monositlerden DH ¨¹retimi: ¨C En pop¨¹ler olan bu metot da h¨¹creler IL-4, GM-CSF ile 7 g¨¹n ink¨¹be edilirler. ? Neoplastik H¨¹crelerden DH ¨¹retimi: ¨C Neoplastic DH¡¯ler ALL,AML,KML h¨¹crelerinden GM-CSF, IL-4, TNF-¦Á ve CD 40L varl???nda ¨¹retilebilmektedir. Osada T, et al.Inter Rev Immunol 2006;25:377¨C413) Curti A, et al.J Immunol.2001;166:848¨C854. Oval? E,et al.Haematologica.2000; 85:464¨C469
DH ?zolasyonu ? Periferik kanda 3 x 106 to 17 x106/litre ? Lokoferezis ile 1 x106 to 10 x106 toplanabilir ? Ancak yeterli olmad???ndan G-CSF,GM- CSF,progenipoetin bu ama?la kullan?labilir Osada T, et al.Inter Rev Immunol 2006;25:377¨C413) Pullarkat V, et al.Clin Cancer Res.2003; 9:1301¨C1312 Lonial S, et al.Biol Blood Marrow Transplant 2004; 10:848¨C857
K¨¹lt¨¹r ?zellikleri ? Ba?lang??ta fetal calf serum (FCS) kullan?lm?? ya?anan sorunlar nedeniyle otolog seruma(OS) d?n¨¹lm¨¹?t¨¹r. ¨C Ancak hasta serumlar?n?n IL-10, TGF-¦Â gibi solub?l inhibit?rleri bar?nd?rmalar? olas?d?r ? Bu nedenle serum free media kullan?m? ?nerilmektedir. Osada T, et al.Inter Rev Immunol 2006;25:377¨C413)
Y¨¹klemede Kullan?lan Antijenler ? Tan?mlanm?? antijenler:Peptitler, proteinler, cDNA, ? Tan?mlanmam?? antijenler : Tumor h¨¹creleri, tumor lysates, heat-shock proteins, tumor / DC fusions and mRNAs, ?naktive Vir¨¹sler. ? Yard?mc? epitoplar:Keyhold limpet haemocyanin (KLH), tuberculosis purified protein derivate (PPD), Pan-HLA-DR binding protein (PADRE) Osada T, et al.Inter Rev Immunol 2006;25:377¨C413) Schnurr M, et al.Cancer Res 2001; 61:6445¨C6450 Wierecky J, Cancer Res 2006; 66:5910¨C5918. Ovali E, et al.J Exp Clin Cancer Res 2007; 26:209¨C214
DH Maturasyonu ? A??lar i?in mutlaka mat¨¹r DH ler kullan?lmal?d?r. ? TNF¦Á, IL1¦Â, IL-6 ve PGE2 standart maturasyon reagentlar?d?r. Ama??? ? Hepatocyte growth factor (HGF)Hem CD34 pozitif h¨¹crelerden hemde monositlerden olu?an DH lerin maturasyonunda katk?da bulunabilmektedir. Schuler-Thurner B, et al. J Exp Med 2002;195:1279¨C1288 Ovali E,et al.Haematologica.2000; 85:464¨C469 McIlroy D, Gregoire M: Cancer Immunol Immunother 2003; 52:583¨C591 Sonmez M, et al.Saudi Med J 2007; 28:688¨C695 Ovali E, et al.J Exp Clin Cancer Res 2007; 26:209¨C214
??lem - Kemik ili?i nakli - Kan, K?, GKK hemopoietik k?k h¨¹cre - H¨¹cre tedavileri i?in h¨¹crelere yap?lacak her t¨¹rl¨¹ i?lem: Kan bankac?l???, T¨¹p bebek uygulamalar?, ?mmunoterapi uygulamalar? Di?er h¨¹cre tedavi ¨¹r¨¹nleri - Gen tedavi ¨¹r¨¹nleri Aseptik teknikler yeterli GMP cGMP Otoriteler ?ok ?ok Asgari ?art Asgari ?art
Purity(as measured by flow cytometry) : >50 %HLA DR , CD86, CD 11c/CD 123 positive Viability: >% 70 by trypan blue exclusion or Propidium iodide stain Sterilty: Bacteria, fungus, mycoplasma negative Pyrogenitiy: Endotoxin negative by LAL Differentiation/Maturation(optional): Linage negative and CD80, CD83 positive (as measured by flow cytometry). Potency testings( To be developed and defined by product manufacturer): High level of target protein expression (Threshold is yet to be determined) CD45 positivity * Mixed lymphocyte reaction Costim assay . Stability assay To be defined by product manufacturer. Functional assays (Late phase clinical development) Delayed type hypersensitivity reaction(DTH) ELISPOT Tetramer staining by flow cytometry Release Tests of DCs based vaccine products (Hinz T,et al. J Immunother 2006;29:472¨C476,Brent M.Annual Somatic Cell Therapy Symposium, 9/25-27/2006. Osada T, et al.Inter Rev Immunol 2006;25:377¨C413)
DH Bazl? A?? Uygulamas? ? Optimal doz ve uygulama s?kl??? : ¨C Bilinmemektedir. ? ?nerilen ilk dozlar?n 15 g¨¹nde bir olmas?d?r ? En az 5 milyon h¨¹cre ?nerilmekte olup ilk veriler 20 Milyon h¨¹crenin optimal olaca??n? i?aret etmektedir ¨C Uzam?? uygulamalar?n etkinli?i art?raca?? g?sterilmi?tir ? Uygulama ?ekli ¨C SC,?D,?N uygulamalar: T h¨¹cre uyar?m? i?in ¨C ?V uygulamalar ise B h¨¹creleri uyarmak i?in tercih edilmektedir Ovali E, et al.J Exp Clin Cancer Res 2007; 26:209¨C214 Osada T, et al.Inter Rev Immunol 2006;25:377¨C413
Yap?lan Ara?t?rmalar ? Bug¨¹n de?i?ik t¨¹rdeki kanser a??lar?n?n tamamlanm?? 7 adet Faz III ?al??mas? vard?r ? Ancak DH a??lar? ile ilgili 100den fazla faz I/II bir adette Faz III ?al??ma mevcuttur. Hepsinin ortak sonucu: ¨C Kanser a??lar? emniyetli bir uygulamad?r. D¨¹nya literat¨¹r¨¹nde bir ?al??mada Grade III toksite rapor edilmi? di?er t¨¹m ?al??malarda sadece Grade I toksite rapor edilmektedir ¨C Objektif klinik cevap oranlar? %2.6-%32 aras?nda rapor edilmektedir. Freda K. Stevenson Curr Opin Oncol 17:573¡ª577.2005
Faz III ?al??malar Doehn Ch, Richter A, Lehmacher W, Jocham D. Adjuvant autologous tumour cell-lysate vaccine versus no adjuvant treatment in patients with M0 renal cell carcinoma after radical nephrectomy: 3-year interim analysis of a German multicentre phase-III trial. Folia Biol (Praha). 2003;49(2):69-73. Schadendorf D, Ugurel S, Schuler-Thurner B, Nestle FO, DC study group of the DeCOG. Dacarbazine (DTIC) versus vaccination with autologous peptide-pulsed dendritic cells (DC) in first-line treatment of patients with metastatic melanoma: a randomized phase III trial of the DC study group of the DeCOG.Ann Oncol. 2006 Apr;17(4):563-70. Epub 2006 Jan 17. Hanna MG Jr, Hoover HC Jr, Vermorken JB, Harris JE, Pinedo et al, Adjuvant active specific immunotherapy of stage II and stage III colon cancer with an autologous tumor cell vaccine: first randomized phase III trials show promise. Vaccine. 2001 Mar 21;19(17- 19):2576-82. Jocham D, Richter A, Hoffmann L, Iwig K, Fahlenkamp D, et al. Adjuvant autologous renal tumour cell vaccine and risk of tumour progression in patients with renal-cell carcinoma after radical nephrectomy:Phase III, Randomised controlled trial.Lancet. 2004;363(9409):594-9.
? [No authors listed] Phase III randomized study of autologous lymphoma-derived idiotype specific vaccination plus GM-CSF in patients with follicular lymphoma in first complete remission.Clin Adv Hematol Oncol. 2003 Jan;1(1):67. ? O'Brien ME, Anderson H, Kaukel E, O'Byrne K, Pawlicki M, Von Pawel J, Reck M; SR-ON-12 Study Group. SRL172 (killed Mycobacterium vaccae) in addition to standard chemotherapy improves quality of life without affecting survival, in patients with advanced non-small-cell lung cancer: phase III results. Ann Oncol. 2004 Jun;15(6):906-14. ? Wallack MK, Sivanandham M, Ditaranto K, Shaw P, Balch CM, Urist MM, Bland KI, Murray D, Robinson WA, Flaherty L, Richards JM, Rosen L, Bartolucci AA. Increased survival of patients treated with a vaccinia melanoma oncolysate vaccine: second interim analysis of data from a phase III, multi-institutional trial. Ann Surg. 1997 Aug;226(2):198-206.
T?bbi mikrobiyoloji viral hepatitlerde dendritik h¨¹cre bazl? tedaviler
T?bbi mikrobiyoloji viral hepatitlerde dendritik h¨¹cre bazl? tedaviler
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 0 50 100 150 200 250 300 350 400 Time(day) CEA 0 200 400 600 800 1000 1200 0 50 100 150 200 250 300 350 400 Time(day) c a lc it o n in Vaccine protocol Vaccine protocol
T?bbi mikrobiyoloji viral hepatitlerde dendritik h¨¹cre bazl? tedaviler
Enfeksiyon - DH tedavisi ?
DH¡¯lerin mikroorganizmalara kar?? konak savunmas?n? g¨¹?lendirme veya kronik tabiatl? (HIV, HBV, HCV, papilloma, CMV gibi) mevcut bir enfeksiyonun tedavisinde kullan?labilir mi?
?lk DH a??s? ?rne?i: spiroketlere kar?? uygulanm??; B. burgdorferi y¨¹klenmi? DH¡¯ler farelerde spesifik koruyucu ba????k yan?t olu?turmu?tur (Mbow et al. 1997) LCMV peptid-y¨¹kl¨¹ DH¡¯ler Farelerde; ?ok k?sa bir s¨¹rede (2 g¨¹n) g¨¹?l¨¹ ve uzun (>60 g¨¹n) s¨¹reli bir antiviral yan?t olu?turmu?tur (Ludewig ve ark. (1998) influenza (Lopez et al. 2000) ve HSV-2 proteinleri ile y¨¹klenmi? DH a??lar?n?n (Schon et al. 2001) spesifik T h¨¹cre ve koruyucu yan?t olu?turduklar? g?sterilmi?tir.
Andriew JM ve ark. Nat Med 2003; ? SIV y¨¹kl¨¹ DH ile a??lanan 10 maymundan 7¡¯sinde Plazma viral y¨¹k 1000 kat azalm??. ? Etkinlik 1 seneden uzun s¨¹rm¨¹?.
Andriev JM ve ark-Nature. 2004 ? 18 ART tedavisi almayan hastaya HIV-1 y¨¹kl¨¹ DH a??s? uygulam?? 1 y?l sonra 8¡¯inde viral y¨¹k¨¹n %90¡¯n?n alt?na inmi? oldu?u 4¡¯de ise 1000 kopya/100mikrolitre oldu?u saptanm?? -180 0 90 180 360 -180 0 90 180 360
kronik HIV enfeksiyonunda DH a??s? insanlarda; emniyetli bulunmu?, ?o?u hastada g¨¹?l¨¹ bir T h¨¹cre yan?t? ve viral y¨¹kte d¨¹?¨¹? sa?lam??t?r (Lu et al. 2004). ?ki farkl? grup taraf?ndan; biri HIVgag peptidleri ile di?erinde I?? virus y¨¹klenerek haz?rlanm?? DH¡¯ler, HAART tedavisi alt?ndaki hastalara uygulanm??; a??lar?n?n iyi tolere edildi?i belirtilmi?tir (Garcia et al. 2005;Ide et al. 2006). HIVgag peptid y¨¹kl¨¹ DH a??s?, HAART kullan?lan hastalarda viral reboundu bask?lamada yetersiz kalsa da spesifik yan?t olu?turdu?u, I?? virus/DH ?al??mas?nda ise spesifik h¨¹cresel yan?t?n zay?f ve ge?ici oldu?u bildirilmi?tir. HIV-1gag, env ve pol peptid y¨¹kl¨¹ DH a??s? HIV-1+ hastalarda; iyi tolere edildi?i ve ayr?ca k?sa s¨¹rede HIV spesifik IFNg+ lenfosit yan?t? olu?turmu?tur (Connoly et al. 2007)
HCV enfeksiyonunda, HCV proteinleri ile y¨¹klenmi? DH a??lar kullanarak HCV spesifik h¨¹cresel yan?t olu?turulabilece?i ileri s¨¹r¨¹lmektedir ?rne?in; rHCV core protein ve peptidleri ile y¨¹klenmi? DH¡¯lerle g¨¹?l¨¹ bir humoral ve h¨¹cresel yan?t elde edilmi? (Encke et al. 2005) bir di?er ?al??mada, HCV NS3 protein geni ta??yan adenovirus ile transfekte DH¡¯lerin farkl? fare t¨¹rlerinde CD4 Th1 ve CD8 T h¨¹cre yan?t? olu?turuldu?u g?sterilmi?tir (Zabelata et al.2007).
Kronik HBV enfeksiyonunda, HBsAg-y¨¹kl¨¹ DH a??s?n?n sa?l?kl? g?n¨¹ll¨¹lerde g¨¹venli oldu?u, baz? deneklerde anti-HBs + olu?turdu?u (Akbar 2004). Kronik HBV hastalar?nda HBsAg-y¨¹kl¨¹ DH a??s?n?n; HBV replikasyonunu bask?lad???, serum viral y¨¹k¨¹ azaltd???, HBe-Ag¡¯nin kayboldu?u ve anti-HBe geli?ti?i (Chen et al. 2005). Kronik HBV¡¯de yetersiz DH aktivitesinin, HBcAg ve HBsAg-DH a??s? ile yeniden kazand?r?labilece?i; T lenfosit proliferasyon ve antijen spesifik IFNg ¨¹retiminin art?r?labildi?i bildirilmi?tir (Duan et al. 2006). HBV-HCC hasta DH¡¯leri HBcAg ve HBsAg ile y¨¹klendiklerine g¨¹?l¨¹ bir CD40, 80 ve 86 sentezi sa?lad?klar?, T h¨¹cre proliferasyon ve IFNg sal?n???n? g¨¹?l¨¹ bir ?ekilde uyard?klar?; DH a??s?n?n HBV HCC hastalar? i?in yeni bir tedavi y?ntemi olabilece?i bildirilmektedir (Shi et al. 2006).
Akbar ve ark. Journal of Hepatology 2007 ? HB a??s?na cevaps?z 6 hastada HBsAg ve HBcAg y¨¹kl¨¹ DH a??lamas? ile 28 g¨¹n sonra g¨¹?l¨¹ serokonverisyon elde edilmi?
DH a?? y?nteminin C.trachomatis M. tuberculosis parazit ve mantar enfeksiyon modellerinde ba?ar?l? bir ?ekilde uyguland??? bildirilmektedir.
Sonu? DH a?? y?nteminin daha ?ok kanser alan?nda potansiyeli ara?t?r?lmakta, y¨¹zlerce ?al??ma y¨¹r¨¹t¨¹lmektedir. Di?er taraftan, DH¡¯lerin enfeksiyon hastal?klar?ndaki rol¨¹n¨¹n daha da iyi anla??lmas?na paralel olarak, deneysel/klinik ?artlarda Ag-y¨¹kl¨¹ DH a??lar?n?n ?zellikle kronik viral enfeksiyonlar i?in de h?zla de?erlendirildi?ini g?rmekteyiz. 100 hastal?k AT2 ile inaktive HIV-1 y¨¹kl¨¹ DH a??lamas? ile ilgili faz III ?al??ma 2007 sonunda ba?lam??t?r.
Kanserde tart???lan DH a?? y?ntemi sorunlar?n?n enfeksiyon hastal?klar? i?in de ge?erli oldu?u d¨¹?¨¹n¨¹lmektedir. en uygun DH kayna??n?n se?imi, en uygun antijenlerin belirlenmesi ve uygun ?ekilde DH¡¯lere y¨¹klemesi, antijen y¨¹kl¨¹ DH¡¯lerin en uygun ?ekilde, hangi say?da ve hangi yoldan enjekte edilmesi gibi temel konular?n kapsaml? bir ?ekilde ?al???lmas?na ihtiya? vard?r. deneysel ?al??malarda sorun te?kil etmemekle beraber, klinik uygulamalar i?in DH¡¯lerin yasal mevzuat gere?i GMP ?artlar?nda haz?rlanm?? olmalar? gere?i de unutulmamal?d?r.
A s?n?f temiz hava G 2. Hava Kilit koridor 1. Hava Kilit koridor A A A A A B D D D C C C B s?n?f temiz hava C s?n?f temiz hava D s?n?f temiz hava Ziyaret?i koridoru A s?n?f temiz hava G 2. Hava Kilit koridor 1. Hava Kilit koridor A A A A A B D D D C C C B s?n?f temiz hava C s?n?f temiz hava D s?n?f temiz hava Ziyaret?i koridoru

More Related Content

T?bbi mikrobiyoloji viral hepatitlerde dendritik h¨¹cre bazl? tedaviler

  • 1. Viral Hepatitlerde Dendritik H¨¹cre Bazl? Tedaviler Prof.Dr.Erc¨¹ment Oval? KT?-Ati Teknoloji Proje sorumlusu
  • 2. G¨¹n¨¹m¨¹zde viral ve maling hastal?klar?n tedavisinde ?ok ?nemli geli?meler olmas?na ra?men, Mevcut tedavilerin yeterli oldu?unu s?ylemek m¨¹mk¨¹n de?ildir
  • 3. Bu durumda farkl? tedavi se?eneklerine gereksinim vard?r Bu se?eneklerden biri imm¨¹noterapi uygulamalar?d?r.
  • 4. Kullan?lan imm¨¹noterapi rejimlerinden biride DENDR?T?K H?CRE bazl? uygulamalard?r.
  • 5. ? Dentritik h¨¹creler profesyonel antijen sunan h¨¹crelerdir(ASH). ? ASH i?inde kendisine en yak?n rakibinden 100 kat daha g¨¹?l¨¹ bir ?ekildeT lenfositleri uyarabilmektedirler .
  • 6. DH¡¯nin ?yk¨¹s¨¹ ? 19. y¨¹zy?lada Paul Langerhans LH¡¯ni tan?mlad? ? 1973¡¯de Stainman bu h¨¹creler i?in DH tan?m?n? kulland? ? 1990¡¯l? y?llarda DH k?k h¨¹creden ve monositlerden ¨¹retilmeye ba?land? ? 2000 y?l?dan sonra ilk klinik ?al??malar ba?lad?
  • 7. DH¡¯nin kayna?? ? DH¡¯ler heterojen bir grup h¨¹cre olup kemik ili?inden De?i?ik b¨¹y¨¹me fakt?rlerinin(flt3-l, GM-CSF vb) varl???nda olu?urlar. ? Periferik kanda ise DH¡¯ler HLA-DR pozitif olup CD11c ve CD123 varl???na g?re iki ayr? gruba ayr?l?rlar ¨C Myeloit DH : CD 11c pozitif CD123 negatif (DC1) ¨C Plazmasitoit DH:CD11c negatif CD123 pozitif(DC2). Yung JW. ASH Education program book. San Francisco, California December 1-5. p:361-366: 2000 Osada T et al. Rev. Immunol. 25:377-413:2006
  • 8. Morfolojik Karakterleri ? ?simlerinin tan?mlad??? gibi t¨¹y¨¹ms¨¹ ??k?nt?lar? olan , oval ?ekirdekli iyi geli?mi? ER¡¯ye sahip h¨¹crelerdir. ? Plazmastoit tipi ise plazma h¨¹cresine benzer
  • 9. Fonksiyonel Karakterleri ? 3 farkl? fonksiyonel karaktere sahiptirler: ¨C T h¨¹cre uyar?m? ¨C ?mm¨¹n tolerans?n ind¨¹klenmesi ¨C B h¨¹cre fonksiyonlar?n?n d¨¹zenlenmesi
  • 10. Dendritik H¨¹cre Bazl? tedaviler ? Bir ?ok olguda imm¨¹n sistem t¨¹m?r¨¹/viral y¨¹k¨¹ eradike edemez. Buda t¨¹m?r¨¹n yay?lmas? ile sonu?lan?r. ?¨¹nk¨¹:
  • 11. T¨¹m?r ?mm¨¹n Kontrolden saklanmaktad?r. A-T¨¹m?r¨¹n gizlenmesi 1- Costimulatuar molek¨¹l ekspresyonunu azalt?rlar 2- MHC I ve II eksp. azalt?r. 3- Target antijen genlerini bask?larlar B-?mm¨¹n supresyon ind¨¹ksiyonu 1- IL-10 sekresyonunu art?r?rlar Th3tip yan?t(Treg) 2- TGF beta sekresyonunu art?r?rlar 3- Solub?l ihibit?rleri art?r?rlar)(iNOS,ARG-1). 4- Fas-L salg?s?n? art?r?rlar. 5- H?zl? proliferasyonla tolerans? ind¨¹klerler
  • 12. Viral y¨¹k¨¹n eradike edilememe nedenleri ? Yetersiz imm¨¹n yan?t(?zellikle akut faz?n semptomatik ge?ti?i hastalarda viral y¨¹k daha y¨¹ksek olmaktad?r) (Thimme et al., 2001) ? T lenfosit epitoplar?nda mutasyonlar (Erickson et al., 2001; Weiner et al., 1995); ? Viral proteinlerle imm¨¹n yan?t?n bask?lanmas? (Gale et al., 1997; Keskinen et al., 2002;Kittlesen et al., 2000). ? APC, H¨¹cresel yan?t?n bozuk olmas? (Cooper et al., 1999; Thimme et al., 2002);
  • 13. ? DH ise klas I ,II ve costim¨¹latuar molek¨¹ller y¨¹ksek oranda ta??r. ? Ve istenirse Th1 ve/veya Th2 yan?t? ind¨¹kleyebilir
  • 14. DH¡¯lerin elde edilmesi ? ?retim ? ?zolasyon
  • 15. ?retim ? CD 34 k?k h¨¹crelerden DH ?retimi: ¨C Flt3L, IL-3 and IL-6, ile 14 g¨¹nl¨¹k bir ink¨¹basyon sonras? IL-4 and GM-CSF 3 g¨¹nl¨¹k yeni besleme s¨¹reci ? Monositlerden DH ¨¹retimi: ¨C En pop¨¹ler olan bu metot da h¨¹creler IL-4, GM-CSF ile 7 g¨¹n ink¨¹be edilirler. ? Neoplastik H¨¹crelerden DH ¨¹retimi: ¨C Neoplastic DH¡¯ler ALL,AML,KML h¨¹crelerinden GM-CSF, IL-4, TNF-¦Á ve CD 40L varl???nda ¨¹retilebilmektedir. Osada T, et al.Inter Rev Immunol 2006;25:377¨C413) Curti A, et al.J Immunol.2001;166:848¨C854. Oval? E,et al.Haematologica.2000; 85:464¨C469
  • 16. DH ?zolasyonu ? Periferik kanda 3 x 106 to 17 x106/litre ? Lokoferezis ile 1 x106 to 10 x106 toplanabilir ? Ancak yeterli olmad???ndan G-CSF,GM- CSF,progenipoetin bu ama?la kullan?labilir Osada T, et al.Inter Rev Immunol 2006;25:377¨C413) Pullarkat V, et al.Clin Cancer Res.2003; 9:1301¨C1312 Lonial S, et al.Biol Blood Marrow Transplant 2004; 10:848¨C857
  • 17. K¨¹lt¨¹r ?zellikleri ? Ba?lang??ta fetal calf serum (FCS) kullan?lm?? ya?anan sorunlar nedeniyle otolog seruma(OS) d?n¨¹lm¨¹?t¨¹r. ¨C Ancak hasta serumlar?n?n IL-10, TGF-¦Â gibi solub?l inhibit?rleri bar?nd?rmalar? olas?d?r ? Bu nedenle serum free media kullan?m? ?nerilmektedir. Osada T, et al.Inter Rev Immunol 2006;25:377¨C413)
  • 18. Y¨¹klemede Kullan?lan Antijenler ? Tan?mlanm?? antijenler:Peptitler, proteinler, cDNA, ? Tan?mlanmam?? antijenler : Tumor h¨¹creleri, tumor lysates, heat-shock proteins, tumor / DC fusions and mRNAs, ?naktive Vir¨¹sler. ? Yard?mc? epitoplar:Keyhold limpet haemocyanin (KLH), tuberculosis purified protein derivate (PPD), Pan-HLA-DR binding protein (PADRE) Osada T, et al.Inter Rev Immunol 2006;25:377¨C413) Schnurr M, et al.Cancer Res 2001; 61:6445¨C6450 Wierecky J, Cancer Res 2006; 66:5910¨C5918. Ovali E, et al.J Exp Clin Cancer Res 2007; 26:209¨C214
  • 19. DH Maturasyonu ? A??lar i?in mutlaka mat¨¹r DH ler kullan?lmal?d?r. ? TNF¦Á, IL1¦Â, IL-6 ve PGE2 standart maturasyon reagentlar?d?r. Ama??? ? Hepatocyte growth factor (HGF)Hem CD34 pozitif h¨¹crelerden hemde monositlerden olu?an DH lerin maturasyonunda katk?da bulunabilmektedir. Schuler-Thurner B, et al. J Exp Med 2002;195:1279¨C1288 Ovali E,et al.Haematologica.2000; 85:464¨C469 McIlroy D, Gregoire M: Cancer Immunol Immunother 2003; 52:583¨C591 Sonmez M, et al.Saudi Med J 2007; 28:688¨C695 Ovali E, et al.J Exp Clin Cancer Res 2007; 26:209¨C214
  • 20. ??lem - Kemik ili?i nakli - Kan, K?, GKK hemopoietik k?k h¨¹cre - H¨¹cre tedavileri i?in h¨¹crelere yap?lacak her t¨¹rl¨¹ i?lem: Kan bankac?l???, T¨¹p bebek uygulamalar?, ?mmunoterapi uygulamalar? Di?er h¨¹cre tedavi ¨¹r¨¹nleri - Gen tedavi ¨¹r¨¹nleri Aseptik teknikler yeterli GMP cGMP Otoriteler ?ok ?ok Asgari ?art Asgari ?art
  • 21. Purity(as measured by flow cytometry) : >50 %HLA DR , CD86, CD 11c/CD 123 positive Viability: >% 70 by trypan blue exclusion or Propidium iodide stain Sterilty: Bacteria, fungus, mycoplasma negative Pyrogenitiy: Endotoxin negative by LAL Differentiation/Maturation(optional): Linage negative and CD80, CD83 positive (as measured by flow cytometry). Potency testings( To be developed and defined by product manufacturer): High level of target protein expression (Threshold is yet to be determined) CD45 positivity * Mixed lymphocyte reaction Costim assay . Stability assay To be defined by product manufacturer. Functional assays (Late phase clinical development) Delayed type hypersensitivity reaction(DTH) ELISPOT Tetramer staining by flow cytometry Release Tests of DCs based vaccine products (Hinz T,et al. J Immunother 2006;29:472¨C476,Brent M.Annual Somatic Cell Therapy Symposium, 9/25-27/2006. Osada T, et al.Inter Rev Immunol 2006;25:377¨C413)
  • 22. DH Bazl? A?? Uygulamas? ? Optimal doz ve uygulama s?kl??? : ¨C Bilinmemektedir. ? ?nerilen ilk dozlar?n 15 g¨¹nde bir olmas?d?r ? En az 5 milyon h¨¹cre ?nerilmekte olup ilk veriler 20 Milyon h¨¹crenin optimal olaca??n? i?aret etmektedir ¨C Uzam?? uygulamalar?n etkinli?i art?raca?? g?sterilmi?tir ? Uygulama ?ekli ¨C SC,?D,?N uygulamalar: T h¨¹cre uyar?m? i?in ¨C ?V uygulamalar ise B h¨¹creleri uyarmak i?in tercih edilmektedir Ovali E, et al.J Exp Clin Cancer Res 2007; 26:209¨C214 Osada T, et al.Inter Rev Immunol 2006;25:377¨C413
  • 23. Yap?lan Ara?t?rmalar ? Bug¨¹n de?i?ik t¨¹rdeki kanser a??lar?n?n tamamlanm?? 7 adet Faz III ?al??mas? vard?r ? Ancak DH a??lar? ile ilgili 100den fazla faz I/II bir adette Faz III ?al??ma mevcuttur. Hepsinin ortak sonucu: ¨C Kanser a??lar? emniyetli bir uygulamad?r. D¨¹nya literat¨¹r¨¹nde bir ?al??mada Grade III toksite rapor edilmi? di?er t¨¹m ?al??malarda sadece Grade I toksite rapor edilmektedir ¨C Objektif klinik cevap oranlar? %2.6-%32 aras?nda rapor edilmektedir. Freda K. Stevenson Curr Opin Oncol 17:573¡ª577.2005
  • 24. Faz III ?al??malar Doehn Ch, Richter A, Lehmacher W, Jocham D. Adjuvant autologous tumour cell-lysate vaccine versus no adjuvant treatment in patients with M0 renal cell carcinoma after radical nephrectomy: 3-year interim analysis of a German multicentre phase-III trial. Folia Biol (Praha). 2003;49(2):69-73. Schadendorf D, Ugurel S, Schuler-Thurner B, Nestle FO, DC study group of the DeCOG. Dacarbazine (DTIC) versus vaccination with autologous peptide-pulsed dendritic cells (DC) in first-line treatment of patients with metastatic melanoma: a randomized phase III trial of the DC study group of the DeCOG.Ann Oncol. 2006 Apr;17(4):563-70. Epub 2006 Jan 17. Hanna MG Jr, Hoover HC Jr, Vermorken JB, Harris JE, Pinedo et al, Adjuvant active specific immunotherapy of stage II and stage III colon cancer with an autologous tumor cell vaccine: first randomized phase III trials show promise. Vaccine. 2001 Mar 21;19(17- 19):2576-82. Jocham D, Richter A, Hoffmann L, Iwig K, Fahlenkamp D, et al. Adjuvant autologous renal tumour cell vaccine and risk of tumour progression in patients with renal-cell carcinoma after radical nephrectomy:Phase III, Randomised controlled trial.Lancet. 2004;363(9409):594-9.
  • 25. ? [No authors listed] Phase III randomized study of autologous lymphoma-derived idiotype specific vaccination plus GM-CSF in patients with follicular lymphoma in first complete remission.Clin Adv Hematol Oncol. 2003 Jan;1(1):67. ? O'Brien ME, Anderson H, Kaukel E, O'Byrne K, Pawlicki M, Von Pawel J, Reck M; SR-ON-12 Study Group. SRL172 (killed Mycobacterium vaccae) in addition to standard chemotherapy improves quality of life without affecting survival, in patients with advanced non-small-cell lung cancer: phase III results. Ann Oncol. 2004 Jun;15(6):906-14. ? Wallack MK, Sivanandham M, Ditaranto K, Shaw P, Balch CM, Urist MM, Bland KI, Murray D, Robinson WA, Flaherty L, Richards JM, Rosen L, Bartolucci AA. Increased survival of patients treated with a vaccinia melanoma oncolysate vaccine: second interim analysis of data from a phase III, multi-institutional trial. Ann Surg. 1997 Aug;226(2):198-206.
  • 28. 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 0 50 100 150 200 250 300 350 400 Time(day) CEA 0 200 400 600 800 1000 1200 0 50 100 150 200 250 300 350 400 Time(day) c a lc it o n in Vaccine protocol Vaccine protocol
  • 30. Enfeksiyon - DH tedavisi ?
  • 31. DH¡¯lerin mikroorganizmalara kar?? konak savunmas?n? g¨¹?lendirme veya kronik tabiatl? (HIV, HBV, HCV, papilloma, CMV gibi) mevcut bir enfeksiyonun tedavisinde kullan?labilir mi?
  • 32. ?lk DH a??s? ?rne?i: spiroketlere kar?? uygulanm??; B. burgdorferi y¨¹klenmi? DH¡¯ler farelerde spesifik koruyucu ba????k yan?t olu?turmu?tur (Mbow et al. 1997) LCMV peptid-y¨¹kl¨¹ DH¡¯ler Farelerde; ?ok k?sa bir s¨¹rede (2 g¨¹n) g¨¹?l¨¹ ve uzun (>60 g¨¹n) s¨¹reli bir antiviral yan?t olu?turmu?tur (Ludewig ve ark. (1998) influenza (Lopez et al. 2000) ve HSV-2 proteinleri ile y¨¹klenmi? DH a??lar?n?n (Schon et al. 2001) spesifik T h¨¹cre ve koruyucu yan?t olu?turduklar? g?sterilmi?tir.
  • 33. Andriew JM ve ark. Nat Med 2003; ? SIV y¨¹kl¨¹ DH ile a??lanan 10 maymundan 7¡¯sinde Plazma viral y¨¹k 1000 kat azalm??. ? Etkinlik 1 seneden uzun s¨¹rm¨¹?.
  • 34. Andriev JM ve ark-Nature. 2004 ? 18 ART tedavisi almayan hastaya HIV-1 y¨¹kl¨¹ DH a??s? uygulam?? 1 y?l sonra 8¡¯inde viral y¨¹k¨¹n %90¡¯n?n alt?na inmi? oldu?u 4¡¯de ise 1000 kopya/100mikrolitre oldu?u saptanm?? -180 0 90 180 360 -180 0 90 180 360
  • 35. kronik HIV enfeksiyonunda DH a??s? insanlarda; emniyetli bulunmu?, ?o?u hastada g¨¹?l¨¹ bir T h¨¹cre yan?t? ve viral y¨¹kte d¨¹?¨¹? sa?lam??t?r (Lu et al. 2004). ?ki farkl? grup taraf?ndan; biri HIVgag peptidleri ile di?erinde I?? virus y¨¹klenerek haz?rlanm?? DH¡¯ler, HAART tedavisi alt?ndaki hastalara uygulanm??; a??lar?n?n iyi tolere edildi?i belirtilmi?tir (Garcia et al. 2005;Ide et al. 2006). HIVgag peptid y¨¹kl¨¹ DH a??s?, HAART kullan?lan hastalarda viral reboundu bask?lamada yetersiz kalsa da spesifik yan?t olu?turdu?u, I?? virus/DH ?al??mas?nda ise spesifik h¨¹cresel yan?t?n zay?f ve ge?ici oldu?u bildirilmi?tir. HIV-1gag, env ve pol peptid y¨¹kl¨¹ DH a??s? HIV-1+ hastalarda; iyi tolere edildi?i ve ayr?ca k?sa s¨¹rede HIV spesifik IFNg+ lenfosit yan?t? olu?turmu?tur (Connoly et al. 2007)
  • 36. HCV enfeksiyonunda, HCV proteinleri ile y¨¹klenmi? DH a??lar kullanarak HCV spesifik h¨¹cresel yan?t olu?turulabilece?i ileri s¨¹r¨¹lmektedir ?rne?in; rHCV core protein ve peptidleri ile y¨¹klenmi? DH¡¯lerle g¨¹?l¨¹ bir humoral ve h¨¹cresel yan?t elde edilmi? (Encke et al. 2005) bir di?er ?al??mada, HCV NS3 protein geni ta??yan adenovirus ile transfekte DH¡¯lerin farkl? fare t¨¹rlerinde CD4 Th1 ve CD8 T h¨¹cre yan?t? olu?turuldu?u g?sterilmi?tir (Zabelata et al.2007).
  • 37. Kronik HBV enfeksiyonunda, HBsAg-y¨¹kl¨¹ DH a??s?n?n sa?l?kl? g?n¨¹ll¨¹lerde g¨¹venli oldu?u, baz? deneklerde anti-HBs + olu?turdu?u (Akbar 2004). Kronik HBV hastalar?nda HBsAg-y¨¹kl¨¹ DH a??s?n?n; HBV replikasyonunu bask?lad???, serum viral y¨¹k¨¹ azaltd???, HBe-Ag¡¯nin kayboldu?u ve anti-HBe geli?ti?i (Chen et al. 2005). Kronik HBV¡¯de yetersiz DH aktivitesinin, HBcAg ve HBsAg-DH a??s? ile yeniden kazand?r?labilece?i; T lenfosit proliferasyon ve antijen spesifik IFNg ¨¹retiminin art?r?labildi?i bildirilmi?tir (Duan et al. 2006). HBV-HCC hasta DH¡¯leri HBcAg ve HBsAg ile y¨¹klendiklerine g¨¹?l¨¹ bir CD40, 80 ve 86 sentezi sa?lad?klar?, T h¨¹cre proliferasyon ve IFNg sal?n???n? g¨¹?l¨¹ bir ?ekilde uyard?klar?; DH a??s?n?n HBV HCC hastalar? i?in yeni bir tedavi y?ntemi olabilece?i bildirilmektedir (Shi et al. 2006).
  • 38. Akbar ve ark. Journal of Hepatology 2007 ? HB a??s?na cevaps?z 6 hastada HBsAg ve HBcAg y¨¹kl¨¹ DH a??lamas? ile 28 g¨¹n sonra g¨¹?l¨¹ serokonverisyon elde edilmi?
  • 39. DH a?? y?nteminin C.trachomatis M. tuberculosis parazit ve mantar enfeksiyon modellerinde ba?ar?l? bir ?ekilde uyguland??? bildirilmektedir.
  • 40. Sonu? DH a?? y?nteminin daha ?ok kanser alan?nda potansiyeli ara?t?r?lmakta, y¨¹zlerce ?al??ma y¨¹r¨¹t¨¹lmektedir. Di?er taraftan, DH¡¯lerin enfeksiyon hastal?klar?ndaki rol¨¹n¨¹n daha da iyi anla??lmas?na paralel olarak, deneysel/klinik ?artlarda Ag-y¨¹kl¨¹ DH a??lar?n?n ?zellikle kronik viral enfeksiyonlar i?in de h?zla de?erlendirildi?ini g?rmekteyiz. 100 hastal?k AT2 ile inaktive HIV-1 y¨¹kl¨¹ DH a??lamas? ile ilgili faz III ?al??ma 2007 sonunda ba?lam??t?r.
  • 41. Kanserde tart???lan DH a?? y?ntemi sorunlar?n?n enfeksiyon hastal?klar? i?in de ge?erli oldu?u d¨¹?¨¹n¨¹lmektedir. en uygun DH kayna??n?n se?imi, en uygun antijenlerin belirlenmesi ve uygun ?ekilde DH¡¯lere y¨¹klemesi, antijen y¨¹kl¨¹ DH¡¯lerin en uygun ?ekilde, hangi say?da ve hangi yoldan enjekte edilmesi gibi temel konular?n kapsaml? bir ?ekilde ?al???lmas?na ihtiya? vard?r. deneysel ?al??malarda sorun te?kil etmemekle beraber, klinik uygulamalar i?in DH¡¯lerin yasal mevzuat gere?i GMP ?artlar?nda haz?rlanm?? olmalar? gere?i de unutulmamal?d?r.
  • 42. A s?n?f temiz hava G 2. Hava Kilit koridor 1. Hava Kilit koridor A A A A A B D D D C C C B s?n?f temiz hava C s?n?f temiz hava D s?n?f temiz hava Ziyaret?i koridoru A s?n?f temiz hava G 2. Hava Kilit koridor 1. Hava Kilit koridor A A A A A B D D D C C C B s?n?f temiz hava C s?n?f temiz hava D s?n?f temiz hava Ziyaret?i koridoru

Editor's Notes

  1. So that, ¡­..Because Clinical experience of the immunotherapy has shown that objective respose can be obtained in up 55% of causes
  2. such as fms-like tyrosine kinase-ligand (Flt3L), granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF).
  3. If we use DCs for some immunothrapy applicatioc first step which must be known is obtaing of DCs There ara two ways to obtain DCs
  4. There are three ways to generate DCs Besides, our group demonstrated that Hepatocyte growth factor (HGF) has also additive effects on DC generation from stem cell
  5. DCs from some cancer patients may be decreased in numbers and also functionally defective. However, early clinical studies using blood DCs demonstrated successful antigen specific immune responses
  6. Undefined antigens have some advantages as to being more potent . But these antigen preparations are monitored with difficulty and have more risk to cause autoimmunity These antigens usually are loaded directly and nakedly in culture conditions. While viral vectors, liposomes, electroporation are usually employed to load DNA, RNA into DCs But in vivo studies are not clear
  7. But at this point I have to say This cytokine selection is based on phenotypic maturation concept. Just as, using of PGE2 within the cocktail must be warranted, as PGE2 has been reported to inhibit IL-12 secretion by DCs
  8. * it has been suggested that CD45 expression seemed to be a suitable marker because it apparently segregated with the DC. Furthermore, CD45+ cells were those that took up the antigen, and subsequently presented it to antigen-specific T-cell hybridomas. Besides rapid surrogate testing, the possibilities of using combinations of certain parameters (eg, viability, cell number, and cell surface marker expression) as potency assays have been envisaged.
  9. It is expected that high doses result in a longer progression free period. However, we observed no such amplification of antitumor response in prolonged vaccinations. In our study, all observed clinical responses appeared during the first two months of vaccination protocol