Laporan praktikum fitokimia identifikasi senyawa golongan alkaloida (ekstrak Piper nigrum)
Download as DOCX, PDF
2 likes11,877 views
Laporan praktikum ini mendeskripsikan identifikasi senyawa golongan alkaloida dalam ekstrak piper nigrum L. dengan melakukan ekstraksi, pemisahan menggunakan kromatografi lapis tipis, dan reaksi identifikasi. Metode ini digunakan untuk mengidentifikasi senyawa alkaloida seperti piperine.
More Related Content
What's hot (20)
Similar to Laporan praktikum fitokimia identifikasi senyawa golongan alkaloida (ekstrak Piper nigrum) (20)
Recently uploaded (20)
Laporan praktikum fitokimia identifikasi senyawa golongan alkaloida (ekstrak Piper nigrum)
- 1. LAPORAN PRAKTIKUM FITOKIMIA IDENTIFIKASI SENYAWA GOLONGAN ALKALOIDA (Ekstrak Piper nigrum L.) Nama : Ananda Novia Rizky Utami JP Nim : 201610410311151 Kelas : Farmasi D Kelompok : 10 UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH MALANG FAKULTAS ILMU KESEHATAN PROGRAM STUDI FARMASI 2016
- 2. 1 TUGAS 1. IDENTIFIKASI SENYAWA GOLONGAN ALKALOIDA (EKSTRAK PIPER NIGRUM L.) 1) Judul Identifikasi Senyawa Golongan Alkaloida (Ekstrak Piper Nigrum L.) 2) Tujuan Mahasiswa mampu untuk melakukan identifikasi senyawa golongan alkaloida dalam tanaman 3) Tinjauan a) Tanaman KLASIFIKASI TANAMAN Kingdom : Plantae Divisio : Spermatophyta Sub division : Angiospermae Kelas : Monocotyledoneae Sub Kelas : Monochlamidae (Apetalae) Ordo : Piperales Famili : Piperaceae Genus : Piper Spesies : Piper nigrum L. Sumber: (Tjitrosoepomo, 2004)
- 3. 2 CIRI MORFOLOGI Ciri-ciri morfologi tanaman lada hitam antara lain merupakan tanaman semak belukar, herba, berbatang kecil menjalar dan bunganya majemuk berbentuk bulir dan menggantung. Tanaman ini mempunyai karakter kimia mengandung asam amida atau disebut juga piperine yang pada umumnya dimiliki oleh beberapa spesies dalam famili Piperaceae, dan mengandung minyak atsiri (Heinrich, 2003). KANDUNGAN Menurut Williamson (2002), kandungan kimia lada hitam terdiri dari: a. Minyak atsiri (Essential oil) Lada hitam kering mengandung 1,2 2,6% minyak atsiri yang terdiri dari sabinine (15-25%), caryophyllene, 留-pinene, 硫-pinene, 硫-ocimene,隆-guaiene, farnesol, 隆-cadinol, guaiacol, 1-phellandrene, 1,8 cineole, pcymene, carvone, citronellol, 留-thujene, 留-terpinene, bisabolene, dllimonene, dihydrocarveol, camphene dan piperonal. b. Alkoloids dan amides Amides merupakan senyawa yang memberikan aroma tajam terdiri dari piperine, piperylin, piperolein A dan B, cumaperine, piperanine, piperamides, pipericide, guineensine dan sarmentine. Alkoloids terdiri dari chavicine, piperidine dan piperretine, methyl caffeic acid, piperidide dan 硫-methyl pyrroline. c. Amino acids Lada hitam kering kaya akan kandungan 硫-alanine, arginine, serine, threonine, histidine, lysine, cystine, asparagines dan glutamic acid. d. Vitamin dan mineral Lada hitam kering mempunyai kandungan ascorbic acid, carotenes, thiamine, riboflavin, nicotinic acid, potassium, sodium, calsium, phosporus, magnesium, besi, tembaga dan seng.
- 4. 3 KHASIAT DAN MANFAAT Berkhasiat mengobati batu ginjal, disentri, kolera, kaki bengkak, nyeri haid, rematik(nyeri otot), selesma dan sakit kepala. b) Alkaloida TINJAUAN ALKALOIDA Senyawa kimia terutama senyawa organik hasil metabolisme dapat dibagi dua yaitu yang pertama senyawa hasil metabolisme primer, contohnya karbohidrat, protein, lemak, asam nukleat, dan enzim. Senyawa kedua adalah senyawa hasil metabolisme sekunder, contohnya terpenoid, steroid, alkaloid dan flavonoid. Alkaloid adalah suatu golongan senyawa organik yang terbanyak ditemukan di alam. Hampir seluruh alkaloid berasal dari tumbuh-tumbuhan dan tersebar luas dalam berbagai jenis tumbuhan tingkat tinggi. Sebagian besar alkaloid terdapat pada tumbuhan dikotil sedangkan untuk tumbuhan monokotil dan pteridofita mengandung alkaloid dengan kadar yang sedikit. Selanjutnya dalam Meyers Conversation Lexicons tahun 1896 dinyatakan bahwa alkaloid terjadi secara karakteristik di dalam tumbuh-tumbuhan, dan sering dibedakan berdasarkan kereaktifan fisiologi yang khas. Senyawa ini terdiri atas karbon, hidrogen, dan nitrogen, sebagian besar diantaranya mengandung oksigen. Sesuai dengan namanya yang mirip denganalkali (bersifat basa) dikarenakan adanya sepasang elektron bebas yang dimiliki oleh nitrogen sehingga dapat mendonorkan sepasang elektronnya. Kesulitan mendefinisikan alkaloid sudah berjalan bertahun-tahun. Definisi tunggal untuk alkaloid belum juga ditentukan. Trier menyatakan bahwa sebagai hasil kemajuan ilmu pengetahuan, istilah yang beragam senyawa alkaloid akhirnya harus ditinggalkan (Hesse, 1981). PENGGOLONGAN ALKALOIDA Alkaloid dapat digolongkan sebagai berikut : 1. Alkaloid sejati (True Alkaloid) Alkaloid sejati adalah senyawa yang mengandung nitrogen pada struktur heterosiklik, struktur kompleks, distribusi terbatas yang menurut beberapa ahli
- 5. 4 hanya ada pada tumbuhan. Alkaloid sejati ditemukan dalam bentuk garamnya dan dibentuk dari asam amino sebagai bahan dasar biosintesis. 2. Pseudoalkaloid Pseudoalkaloid memiliki sifat seperti alkaloid sejati tetapi tidak diturunkan dari asam amino. Contoh: isoprenoid, terpenoid (coniin), dan alkaloid steroidal (paravallarine). 3. Protoalkaloid Protoalkaloid adalah senyawa amin sederhana dengan nitrogen tidak berada pada cincin heterosiklik. Contoh: mescaline, betanin, dan serotonin (Swastini, Dewa Ayu.2007). MANFAAT ALKALOIDA BAGI TUMBUHAN Beberapa pendapat mengenai kemungkinan perannya dalam tumbuhan sebagai berikut (Padmawinata,1995): 1. Alkaloid berfungsi sebagai hasil buangan nitrogen seperti urea dan asam urat dalam hewan (salah satu pendapat yang dikemukan pertama kali, sekarang tidak dianut lagi). 2. Beberapa alkaloid mungkin bertindak sebagai tandon penyimpanan nitrogen meskipun banyak alkaloid ditimbun dan tidak mengalami metabolisme lebih lanjut meskipun sangat kekurangan nitrogen. 3. Pada beberapa kasus, alkaloid dapat melindungi tumbuhan dari serangan parasit atau pemangsa tumbuhan. Meskipun dalam beberapa peristiwa bukti yang mendukung fungsi ini tidak dikemukakan, mungkin merupakan konsep yang direka-reka dan bersifat manusia sentris. 4. Alkaloid dapat berlaku sebagai pengatur tumbuh, karena dari segi struktur, beberapa alkaloid menyerupai pengatur tumbuh. Beberapa alkaloid merangasang perkecambahan yang lainnya menghambat. 5. Semula disarankan oleh Liebig bahwa alkaloid, karena sebagian besar bersifat basa, dapat mengganti basa mineral dalam mempertahankan kesetimbangan ion dalam tumbuhan. Sejalan dengan saran ini, pengamatan menunjukkan bahwa
- 6. 5 pemberian nikotina ke biakan akar tembakau meningkatkan pengambilan nitrat. Alkaloid dapat pula berfungsi dengan cara pertukaran dengan kation tanah. PEMURNIAN ALKALOIDA Metode pemurnian dan karakterisasi alkaloid umumnya mengandalkan sifat kimia alkaloid yang paling penting yaitu kebasaanya, dan pendekatan khusus harus dikembangkan untuk beberapa alkaloid misalnya rutaekarpina, kolkisina, risinina yang bersifat basa. Alkaloid biasanya diperoleh dengan cara mengekstraksi bahan tumbuhan memakai asam yang melarutkan alkaloid sebagai garam, atau bahan tumbuhan dapat dibasakan dengan natrium karbonat dan sebagainya lalu basa bebas diekstraksi dengan pelarut organik seperti kloroform, eter, dan sebagainya. Beberapa alkaloid jadian/sintesis dapat terbentuk jika kita menggunakan pelarut reaktif. Untuk alkaloid yang dapat menguap seperti nikotina dapat dimurnikan dengan cara penyulingan uap dari larutan yang dibasakan. Larutan dalam air yang bersifat asam dan mengandung alkaloid dapat dibasakan kemudian alkaloid di ekstraksi dengan pelarut organic sehingga senyawa netral dan asam yang mudah larut dalam air tertinggal dalam air (Padmawinata, 1995). Garam alkaloid berbeda sifatnya dengan alkaloid bebas. Alkaloid bebas biasanya tidak larut dalam air (beberapa dari golongan pseudo dan protoalkaloid larut), tetapi mudah larut dalam pelarut organik agak polar (seperti benzena, eter, kloroform). Dalam bentuk garamnya, alkaloid mudah larut dalam pelarut organik polar (Cordell, 1981). IDENTIFIKASI SENYAWA ALKALOIDA 1. Reaksi Pengendapan Reaksi Dragendorf Pereaksi dragendorf mengandung bismuth nitrat dan merkuri klorida dalam nitrit berair. Ketika suatu alkaloid ditambahkan peraksi dragendorf maka akan menghasilkan endapan jingga. Reaksi Meyer
- 7. 6 Pereaksi meyer mengandung kalium iodida dan merkuri klorida. Ketika sample ditambah perekasi meyer maka akan timbul endapan kuning atau larutan kuning bening lalu ditambahkan alkohol endapannya larut. Tidak semua alkaloid menendap dengan reaksi mayer. Pengendapan yang terjadi akibat reaksi mayer bergantung pada rumus bangun alkaloidanya. Reaksi Bauchardat Pereaksi bauchardat mengandung kalium iodide dan iooda. Sampel ditambah pereaksi bauchardat menghasilkan endapan coklat merah lalu ditambah alkohol endapannya larut. 2. Reaksi Warna Reaksi dengan asam kuat Asam kuat seperti H2SO4 pekat dan HNO3 pekat menghasilkan warna kuning atau merah Reaksi Marquis Pereaksi marquis mengandung formaldehid (1 bagian) dan H2SO4 pekat (9 bagian). Sampel ditambah pereaksi marquis akan menghasilkan warna jingga. Reaksi warna AZO Sampel ditambahkan diazo A (4 bagian) dan diazo B (1 bagian), ditambah NaOH, dipanaskan lalu ditambah amyl alcohol menghasilkan warna merah. (Harborne,1987) c) Pemisahan Kromatografi Lapis Tipis (KLT) Kromatografi lapis tipis ialah metode pemisahan fisikokimia. Lapisan pemisah terdiri atas bahan berbutir-butir (fase diam), ditempatkan pada penyangga berupa plat gelas, logam atau lapisan yang cocok. Campuran yang akan dipisah berupa larutan yang ditotolkan baik berupa bercak ataupun pita, setelah plat atau lapisan dimasukkan ke dalam bejana tertutup rapat yang berisi larutan pengembang yang cocok (fase gerak), pemisahan terjadi selama perambatan kapiler (pengembangan), selanjutnya senyawa yang tidak berwarna harus ditampakkan (Stahl, 1985).
- 8. 7 Pendeteksian bercak hasil pemisahan dapat dilakukan dengan beberapa cara. Untuk senyawa tak berwarna cara yang paling sederhana adalah dilakukan pengamatan dengan sinar ultraviolet. Beberapa senyawa organik bersinar atau berfluorosensi jika disinari dengan sinar ultraviolet gelombang pendek (254 nm) atau gelombang panjang (366 nm), jika dengan cara itu senyawa tidak dapat dideteksi maka harus dicoba disemprot dengan pereaksi yang membuat bercak tersebut tampak yaitu pertama tanpa pemanasan, kemudian bila perlu dengan pemanasan (Gritter, et al., 1991; Stahl, 1985) FASA DIAM Kromatografi lapis tipis, fase diam berupa lapisan tipis yang terdiri atasahan padat yang dilapiskan pada permukaan penyangga datar yang biasanya terbuat dari kaca, dapat pula terbuat dari plat polimer atau logam. Lapisan melekat pada permukaan dengan bantuan bahan pengikat, biasanya kalsium sulfat atau amilum. Penjerap yang umum dipakai untuk kromatografi lapis tipis adalah silica gel, alumina, kieselgur dan selulosa (Gritter, et al., 1991). Dua sifat yang penting dari fase diam adalah ukuran partikel dan homogenitasnya, karena adesi terhadap penyokong sangat tergantung pada kedua sifat tersebut. Ukuran partikel yang biasa digunakan adalah 1-25 mikron. Partikel yang butirannya sangat kasar tidak akan memberikan hasil yang memuaskan dan salah satu cara untuk memperbaiki hasil pemisahan adalah dengan menggunakan fase diam yang butirannya lebih halus. Butiran yang halus memberikan aliran pelarut yang lebih lambat dan resolusi yang lebih baik (Sastrohamidjojo, 1985). FASA GERAK Fase gerak ialah medium angkut yang terdiri atas satu atau beberapa pelarut, jika diperlukan sistem pelarut multi komponen, harus berupa suatu campuran sesederhana mungkin yang terdiri atas maksimum tiga komponen (Stahl, 1985). Pemisahan senyawa organik selalu menggunakan pelarut campur. Tujuan menggunakan pelarut campur adalah untuk memperoleh pemisahan senyawa yang
- 9. 8 baik. Kombinasi pelarut adalah berdasarkan atas polaritas masing-masing pelarut, sehingga dengan demikian akan diperoleh sistem pengembang yang cocok. Pelarut pengembang yang digunakan dalam kromatografi lapis tipis antara lain: n-heksan, karbontetraklorida, benzen, kloroform, eter, etilasetat, piridian, aseton, etanol, metanol dan air (Gritter, et al., 1991). HARGA Rf Mengidentifikasi noda-noda dalam kromatografi lapis tipis sangat lazim menggunakan harga Rf (Retordation Factor) yang didefinisikan sebagai: = 署 ＄≒ ＄ jarak yang ditempuh pelarut (eluen) Harga Rf beragam mulai dari 0 sampai 1. Faktor-faktor yang mempengaruhi harga Rf (Sastrohamidjojo, 1985): a. Struktur kimia dari senyawa yang sedang dipisahkan b. Sifat penjerap c. Tebal dan kerataan dari lapisan penjerap d. Pelarut dan derajat kemurniannya e. Derajat kejenuhan uap pengembang dalam bejana f. Teknik percobaan g. Jumlah cuplikan yang digunakan h. Suhu i. Kesetimbangan. POLARITAS Polaritas sering diartikan sebagai adanya pemisahan kutub bermuatan positif dan negatif dari suatu molekul sebagai akibat terbentuknya konfigurasi tertentu dari atom-atom penyusunnya. Dengan demikian, molekul tersebut dapat tertarik oleh molekul yang lain yang juga mempunyai polaritas yang kurang lebih sama. Besarnya polaritas dari suatu pelarut proporsional dengan besarnya konstanta dielektriknya (Adnan 1997). Menurut Stahl (1985), konstanta dielektrik (竜)
- 10. 9 merupakan salah satu ukuran kepolaran pelarut yang mengukur kemampuan pelarut untuk menyaring daya tarik elektrostatik antara isi yang berbeda. Ekstraksi berkesinambungan dilakukan secara berturut-turut dimulai dengan pelarut nonpolar (misalnya n-heksan atau kloroform) dilanjutkan dengan pelarut semipolar (etil asetat atau dietil eter) kemudian dilanjutkan dengan pelarut polar (metanol atau etanol). Pada proses ekstraksi akan diperoleh ekstrak awal (crude extract) yang mengandung berturutturut senyawa nonpolar, semipolar, dan polar (Hostettmann et al. 1997). 4) Prosedur Kerja ALAT DAN BAHAN a. Alat Pipet Tisu dan kain lap Sudip Label Penjepit kayu Aluminium foil Pinset Vial 10ml KLT Plat Kaca b. Bahan Ekstrak Piper nigrum L. Etanol HCl 2N NaCl Pereaksi Mayer Pereaksi Wagner NH4OH CHCl3 Pereaksi Dragendorf Kiesel gel GF 254 PREPARASI SAMPEL a) Bagan Alir Preparasi sampel Ekstrak 0,9 g + etanol ad larut + 5 mL HCL 2N, panaskan 2-3 menit
- 11. 10 Setelah dingin + 0,3 g NaCl, aduk lalu disaring Filtrat + 5mL HCL 2N, bagi menjadi 3 bagian IA, IB dan IC Reaksi Pengendapan Larutan IA + Pereaksi Mayer IB + Pereaksi Wagner IC = Blanko Keruh dan terdapat endapan = (+) alkaloid Kromatografi Lapis Tipis Lar. IC + NH4OH pekat 28% sampai basa + 5mL kloroform dalam tabung reaksi, pisahkan dengan corong pisah Filtrat (fase CHCL3) diuapkan sampai kering Larutkan dalam methanol (1mL), lakukan pemeriksaan KLT Hasil positif ditandakan dengan bercak atau noda warna jingga
- 12. 11 b) Skema Kerja Timbang ekstrak piper nigrum L. 0,9 gram Tambahkan etanol ad larut Ditambahkan 5 ml HCl 2N Dipanaskan diatas penangas air selama 2-3 menit sambil diaduk Setelah dingin ditambahkan 0,3 gram NaCl, diaduk rata kemudian disaring Filtrat ditambah 5 ml HCl 2N Filtar dibagi menjadi tiga bagian disebut sebgai larutan IA, IB, IC IA IB IC
- 13. 12 REAKSI PENGENDAPAN KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS (KLT) Larutan IA + pereaksi Mayer Larutan IB + pereaksi Wagner Larutan IC sebagai blanko Adanya kekeruhan/ endapan menunjukkan adanya alkaloid Larutan IC + NH4OH pekat 28% ad larutan menjadi basa Diekstraksi dengan 5 ml kloroform (dalam tabung reaksi) Filtrat ( fase CHCl3) diuapkan sampai kering Dilarutkan dalam methanol (1 ml) dan siap untuk pemeriksaan KLT Fase diam: Kiesel gel GF 254 Fase gerak: CHCL3-Etil asetat (1:1) Penampak noda: Pereaksi dragendorf Jika timbul warna jingga menunjukkan adanya alkaloid dalam ekstrak
- 14. 13 DAFTAR PUSTAKA Tjitrosoepomo, Gembong.2004. Taksonomi Tumbuhan (Spermatophyta). Gadjah Mada University Press: Yogyakarta Heinrich, M., Barnes, J., Gibbons, S., Wiliamson, E.N. 2003. Fundamentals of Pharmacognosy and Phitotherapy. Churchill Livingstone. USA. Swastini, Dewa Ayu. Dkk. 2007. Buku Ajar Mata Kuliah Farmakognosi. Bukit Jimbaran : Jurusan Farmasi Fakultas MIPA, Universitas Udayana. Gritter, R. J., Bobbit, J.M. dan Schwarting, A.E., 1991, Pengantar Kromatografi, diterjemahkan oleh Kosasih Padmawinata, Edisi II, 107, Penerbit ITB, Bandung. Cordell, A. (1981). Introduction to Alkaloid, A Biogenetic Approach, A Wiley Interscience Publication. New Padmawinata, K. (1995). Kandungan Organik Tumbuhan Tinggi. Bandung: Penerbit ITB (Terjemahan dari Robinson, T. 1991. The organic Constituens of Higher Plant, 6 thedition). York: John Wiley and Sons, Inc. Stahl, E., 1985, Analisis Obat Secara kromatografi dan Mikroskopi, diterjemahkan oleh Kosasih Padmawinata dan Iwang Soediro, 3-17, ITB, Bandung Adnan, M., 1997. Teknik Kromatografi untuk Analisis Bahan Makanan, Edisi Pertama, 9, 14, 15, Penerbit Andi, Yogyakarta. Harborne, J.B. 1987. Metode Fitokimia Penuntun Cara Modern Menganalisis Tumbuhan. Penerbit ITB. Bandung. Williamson, E.M. 2002. Major Herbs of Ayurveda.Churchill Livingstone.United Kingdom Hesse, M. (1981). Alkaloid Chemistry. Toronto: John Wiley and Sons, Inc. Sastrohamidjojo H, 1985, Kromatografi, Edisi I, Cetakan I, Penerbit Liberty, Yogyakarta.