Laporan praktikum fitokimia identifikasi senyawa golongan glikosida saponin, triterpenoid, dan steroid (Ekstrak sapindus rarak DC)
Download as DOCX, PDF
1 like10,824 views
menjelaskan dan mengidentifikasi senyawa golongan glikosida saponin, triterpenoid, dan steroid (Ekstrak sapindus rarak DC)
More Related Content
What's hot (20)
Similar to Laporan praktikum fitokimia identifikasi senyawa golongan glikosida saponin, triterpenoid, dan steroid (Ekstrak sapindus rarak DC) (20)
Recently uploaded (20)
Laporan praktikum fitokimia identifikasi senyawa golongan glikosida saponin, triterpenoid, dan steroid (Ekstrak sapindus rarak DC)
- 1. LAPORAN PRAKTIKUM FITOKIMIA TUGAS 2 IDENTIFIKASI SENYAWA GOLONGAN GLIKOSIDA SAPONIN, TRITERPENOID DAN STEROID (Ekstrak Sapindus rarak DC.) DISUSUN OLEH : ANANDA NOVIA RIZKY UJP 201610410311151 KELOMPOK 10 FARMASI D UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH MALANG FAKULTAS ILMU KESEHATAN PROGRAM STUDI FARMASI 2016
- 2. TUGAS 2. IDENTIFIKASI SENYAWA GOLONGAN GLIKOSIDA SAPONIN, TRITERPENOID DAN STEROID (Ekstrak Sapindus rarak DC.). 1) Tujuan Mahasiswa mampu untuk melakukan identifikasi senyawa golongan glikosida saponin, triterpenoid dan steroid dalam tanaman. 2) Tinjauan a) Tanaman KLASIFIKASI TANAMAN Lerak (Sapindus rarak) merupakan jenis tumbuhan yang berasal dari Asia Tenggara yang dapat tumbuh dengan baik pada hampir semua jenis tanah dan keadaan iklim, dari daratan rendah sampai pegunungan dengan ketinggian 450- 1500m dari permukaan laut. Taksonomi tanaman lerak yaitu: Kingdom : Plantae Divisi : Spermatophyta Sub divisi : Angiospermae Kelas : Dicotyledons Sub kelas : Rosidae Bangsa : Sapindales Suku : Sapindaceae Marga : Sapindus Jenis : Sapindus rarak DC. (Afriastini, 1990)
- 3. CIRI MORFOLOGI Bentuk daun lerak bundar telur, perbungaan majemuk, malai, terdapat di ujung batang warna putih kekuningan. Bentuk buah seperti kelereng kalau sudah tua atau masak, warnanya coklat kehitaman, permukaan buah licin atau mengkilat, bijinya bundar berwarna hitam. Daging buah sedikit berlendir dan aromanya wangi (Plantus, 2008). Bakal buah berlekuk tiga dengan satu bakal biji pada setiap ruang. Buah yang dihasilkan bulat mirip bola dengan diameter 2-2,5 cm, berminyak dan sedikit berkerut. Buah lerak yang masih muda berwarna hijau dan buah yang sudah tua berwarna coklat kehitaman. Daging buah pada lerak banyak mengandung air, mempunyai rasa pahit dan beracun. Tiap buah mempunyai satu biji yang berkulit keras berwarna hitam mengkilat dengan diameter kurang lebih 1 cm. Buah lerak terdiri dari 75 persen daging buah dan 25 persen biji, pada bagian daging buah banyak terkandung senyawa saponin yang merupakan racun yang cukup kuat (Heyne, 1987). KANDUNGAN TANAMAN Pengujian secara kualitatif senyawa yang terdapat pada daging buah diantaranya adalah triterpen, alkaloid, steroid, antrakinon, tanin, fenol, flavonoid, dan minyak atsiri (Sunaryadi, 1999). Kulit buah, biji, kulit batang dan daun lerak mengandung saponin dan flavonoid, sedangkan kulit buah juga mengandung alkaloida dan polifenol. Kulit batang dan daun tanaman lerak mengandung tanin. Senyawa aktif yang telah diketahui dari buah lerak adalah senyawasenyawa dari golongan saponin dan sesquiterpen (Wina et al., 2005) Tabel 1. Persentase Senyawa Aktif Pada Lerak NO. Senyawa Aktif Persentase Senyawa 1. Saponin 12% 2. Alkaloid 1%
- 4. 3. Steroid 0,036% 4. Triterpene 0,029% Sumber : Nevi Yanti, 2009 1. Saponin Saponin adalah glikosida triterpena dan sterol dan telah terdeteksi dalam lebih dari 90 suku tumbuhan. Saponin merupakan senyawa aktif permukaan dan bersifat seperti sabun serta dapat dideteksi berdasarkan kemampuannya membentuk busa dan menghemolisis sel darah. Pencarian saponin dalam tumbuhan telah dirangsang oleh kebutuhan akan sumber sapogenin yang mudah diperoleh dan dapat diubah di laboratorium menjadi sterol hewan yang berkhasiat penting. Pola glikosida saponin kadang-kadang rumit, banyak saponin yang mempunyai satuan gula sampai lima dan komponen yang umum ialah asam glukoronat (Harborne, 1987) Spesies tanaman Sapindus seperti Sapindus saponaria, S. rarak, S. emarginatus, S. drummonii dan S. delavay pada umumnya mempunyai kandungan saponin yang tinggi. Salah satu jenis Sapindus yang mempunyai kandungan saponin tinggi dan dapat dimanfaatkan sebagai imbuhan pakan pada ruminansia adalah S. rarak (lerak). Buah dalam bentuk hasil ekstraksi dengan metanol telah dilaporkan mengandung saponin dengan kadar tinggi daripada buahnya yang tanpa diekstrak (Thalib, 2004). Sifat yang khas dari saponin antara lain berasa pahit, berbusa dalam air, mempunyai sifat detergen yang baik, beracun bagi binatang berdarah dingin, mempunyai aktivitas hemolisis (merusak sel darah merah), tidak beracun bagi binatang berdarah panas, mempunyai sifat anti eksudatif dan mempunyai sifat anti inflamatori. Berdasarkan sifat-sifat tersebut, senyawa saponin mempunyai kegunaan yang sangat luas, antara lain sebagai detergen, pembentuk busa pada alat pemadam kebakaran, pembentuk busa pada industri sampo dan digunakan dalam industri farmasi serta dalam bidang fotografi. Beberapa saponin bekerja sebagai
- 5. antimikroba, saponin tertentu menjadi penting karena dapat diperoleh dari beberapa tumbuhan yang digunakan sebagai bahan baku untuk sintesis hormone steroid yang digunakan dalam bidang kesehatan (Robinson, 1995). KLASIFIKASI SENYAWA SAPONIN Secara umum saponin merupakan bentuk glikosida yang memiliki aglikon berupa steroid dan triterpen. Triterpen merupakan jenis senyawa bahan alam yangmemiliki 6 monoterpen atau memiliki jumlah atom karbon sebanyak 30.Dari aglikonnya saponin dapat bagi menjadi dua yaitu saponin dengan steroid dansaponin dengan triterpen. 1. Saponin Steroid Tersusun atas inti steroid (C27) dengan molekul karbohidrat.Steroidsaponin dihidrolisis menghasilkan satu aglikon yang dikenal sebagaisapogenin.Tipe saponin ini memiliki efek antijamur. Pada binatang menunjukan penghambatan aktifitas otot polos. Saponin steroid diekskresikan set elah koagulasi dengan asam glukotonida dan digunakan sebagai bahan baku pada proses biosintetis obat kortikosteroid. Saponin jenis ini memiliki aglikon berupa steroid yang diperoleh dari metabolism sekunder tumbuhan. Jembatan ini juga sering disebut dengan glikosida jantung, hal ini dikarenakan memiliki efek kuat terhadap jantung (Anonim, 2009).
- 6. 2. Saponin Triterpene Triterpen yang memiliki atom C sebanyak 30.Saponin jenis ini bersifatasam.Tersusun atas inti triterpenoid dengan molekul karbohidrat.Dihidrolisismenghasilkan suatu aglikon yang disebut sapogenin ini merupakan suatu senyawayang mudah dikristalkan lewat asetilasi sehingga dapat dimurnikan. Tipe saponinini adalah turunan -amyrine (Amirt Pal,2002). MANFAAT SAPONIN Sejumlah penelitian telah menunjukkan bahwa saponin dan tanaman yang banyak mengandung saponin memiliki efek toksik pada protozoa dengan cara membentuk sebuah kompleks ireversibel dengan steroid dalam dinding sel protozoa (Wang et al., 1998; Francis et al., 2002). Kompleks yang terbentuk tersebut akan mengakibatkan rusaknya membran sel protozoa (Hostettmann & Marston, 1995). Penurunan populasi protozoa dalam rumen ini kemungkinan memiliki beberapa efek positif seperti peningkatan efisiensi metabolisme nitrogen, pengurangan emisi gas metana, pergeseran dalam populasi bakteri dan
- 7. jamur dalam rumenserta potensi peningkatan aliran protein bakteri menuju saluran pencernaan yang lebih rendah (Wallace et al., 1994) IDENTIFIKASI SAPONIN 1. Uji Buih Saponin merupakan senyawa aktif permukaan dan bersifat seperti sabun sehingga keberadan saponin sangat mudah ditandai dengan pembentukan larutan koloidal dengan air yang apabila dikocok menimbulkan buih yang stabil (Gunawan dan Mulyadi, 2004). 2. Uji Liebermann-Burchard Senyawa saponin dapat diidentifikasi dari warna yang dihasilkannya dengan pereaksi Liebermann-Burchard. Warna biru-hijau menunjukkan saponin steroida, dan warna merah, merah muda, atau ungu menunjukkan saponin triterpenoida (Farnsworth, 1996) 3. Uji Salkowski Uji salkowski digunakan untuk mengidentifikasi adanya steroid tak jenuh pada ekstrak, uji ini dilakukan dengan penambahan asam sulfat pekat dan jika terdapat gugus steroid tak jenuh pada larutan akan terbentuk cincin berwarna merah terang yang lama kelamaan akan berwarna merah ungu (Farnsworth, 1996). 4. Kromatografi Lapis Tipis (KLT) Kromatografi lapis tipis ialah metode pemisahan fisikokimia. Lapisan pemisah terdiri atas bahan berbutir-butir (fase diam), ditempatkan pada penyangga berupa plat gelas, logam atau lapisan yang cocok. Campuran yang akan dipisah berupa larutan yang ditotolkan baik berupa bercak ataupun pita, setelah plat atau lapisan dimasukkan ke dalam bejana tertutup rapat yang berisi larutan pengembang yang cocok (fase gerak), pemisahan terjadi selama perambatan kapiler (pengembangan), selanjutnya senyawa yang tidak berwarna harus ditampakkan (Stahl, 1985).
- 8. Pendeteksian bercak hasil pemisahan dapat dilakukan dengan beberapa cara. Untuk senyawa tak berwarna cara yang paling sederhana adalah dilakukan pengamatan dengan sinar ultraviolet. Beberapa senyawa organik bersinar atau berfluorosensi jika disinari dengan sinar ultraviolet gelombang pendek (254 nm) atau gelombang panjang (366 nm), jika dengan cara itu senyawa tidak dapat dideteksi maka harus dicoba disemprot dengan pereaksi yang membuat bercak tersebut tampak yaitu pertama tanpa pemanasan, kemudian bila perlu dengan pemanasan (Gritter, et al., 1991; Stahl, 1985) FASA DIAM Kromatografi lapis tipis, fase diam berupa lapisan tipis yang terdiri atasahan padat yang dilapiskan pada permukaan penyangga datar yang biasanya terbuat dari kaca, dapat pula terbuat dari plat polimer atau logam. Lapisan melekat pada permukaan dengan bantuan bahan pengikat, biasanya kalsium sulfat atau amilum. Penjerap yang umum dipakai untuk kromatografi lapis tipis adalah silica gel, alumina, kieselgur dan selulosa (Gritter, et al., 1991). Dua sifat yang penting dari fase diam adalah ukuran partikel dan homogenitasnya, karena adesi terhadap penyokong sangat tergantung pada kedua sifat tersebut. Ukuran partikel yang biasa digunakan adalah 1-25 mikron. Partikel yang butirannya sangat kasar tidak akan memberikan hasil yang memuaskan dan salah satu cara untuk memperbaiki hasil pemisahan adalah dengan menggunakan fase diam yang butirannya lebih halus. Butiran yang halus memberikan aliran pelarut yang lebih lambat dan resolusi yang lebih baik (Sastrohamidjojo, 1985). FASA GERAK Fase gerak ialah medium angkut yang terdiri atas satu atau beberapa pelarut, jika diperlukan sistem pelarut multi komponen, harus berupa suatu campuran sesederhana mungkin yang terdiri atas maksimum tiga komponen (Stahl, 1985).
- 9. Pemisahan senyawa organik selalu menggunakan pelarut campur. Tujuan menggunakan pelarut campur adalah untuk memperoleh pemisahan senyawa yang baik. Kombinasi pelarut adalah berdasarkan atas polaritas masing-masing pelarut, sehingga dengan demikian akan diperoleh sistem pengembang yang cocok. Pelarut pengembang yang digunakan dalam kromatografi lapis tipis antara lain: n-heksan, karbontetraklorida, benzen, kloroform, eter, etilasetat, piridian, aseton, etanol, metanol dan air (Gritter, et al., 1991). HARGA Rf Mengidentifikasi noda-noda dalam kromatografi lapis tipis sangat lazim menggunakan harga Rf (Retordation Factor) yang didefinisikan sebagai: = 署 ＄≒ ＄ jarak yang ditempuh pelarut (eluen) Harga Rf beragam mulai dari 0 sampai 1. Faktor-faktor yang mempengaruhi harga Rf (Sastrohamidjojo, 1985): a. Struktur kimia dari senyawa yang sedang dipisahkan b. Sifat penjerap c. Tebal dan kerataan dari lapisan penjerap d. Pelarut dan derajat kemurniannya e. Derajat kejenuhan uap pengembang dalam bejana f. Teknik percobaan g. Jumlah cuplikan yang digunakan h. Suhu i. Kesetimbangan. POLARITAS Polaritas sering diartikan sebagai adanya pemisahan kutub bermuatan positif dan negatif dari suatu molekul sebagai akibat terbentuknya konfigurasi tertentu dari
- 10. atom-atom penyusunnya. Dengan demikian, molekul tersebut dapat tertarik oleh molekul yang lain yang juga mempunyai polaritas yang kurang lebih sama. Besarnya polaritas dari suatu pelarut proporsional dengan besarnya konstanta dielektriknya (Adnan, 1997). Menurut Stahl (1985), konstanta dielektrik (竜) merupakan salah satu ukuran kepolaran pelarut yang mengukur kemampuan pelarut untuk menyaring daya tarik elektrostatik antara isi yang berbeda. Ekstraksi berkesinambungan dilakukan secara berturut-turut dimulai dengan pelarut nonpolar (misalnya n-heksan atau kloroform) dilanjutkan dengan pelarut semipolar (etil asetat atau dietil eter) kemudian dilanjutkan dengan pelarut polar (metanol atau etanol). Pada proses ekstraksi akan diperoleh ekstrak awal (crude extract) yang mengandung berturutturut senyawa nonpolar, semipolar, dan polar (Hostettmann et al. 1995).
- 11. 3) Prosedur Kerja ALAT DAN BAHAN a. Alat Pipet Tisu dan kain lap Sudip Label Penjepit kayu Aluminium foil Pinset Vial 10ml KLT Plat Kaca b. Bahan Ekstrak Sapindus rarak DC. Etanol Aquadest Asam asetat anhidrat H2SO4 pekat HCL 2N Ammonia N-Heksana Kiesel gel GF 254 PREPARASI SAMPEL a) Bagan Alir Preparasi sampel Uji Buih Ekstrak 0,2 g masukkan tabung reaksi + 10 mL air suling, kocok kuat 賊30 detik Tes buih postof mengandung saponin bila terjadi buih stabil semalam lebih dari 30 menit dengan tinggi 3cm di atas permukaan cairan
- 12. Reaksi Warna Preparasi sampel: ekstrak 0,5g + etanol 15mL, bagi menjadi 3 bagian masing-masing 5mL, sebagai larutan IIA, IIB, IIC Uji Liebermann-Burchard Uji Salkowski IIA sebagai blanko, IIB + 3gtt asam asetat anhidrat + 5gtt H2SO4 pekat, kocok perlahan, amati perubahan warna IIA sebagai blanko, IIC + 1-2mL asam H2SO4 pekat melalui dinding tabung reaksi Biru-hijau = saponin steroid Merah-ungu = saponin triterpenoid Kuning muda = saponin jenuh Cincin warna merah = steroid tak jenuh
- 13. Kromatografi Lapis Tipis (Sapogenin) Kromatografi Lapis Tipis (Steroid/Triterpene) ekstrak 0,5g + 5mL HCN 2N, didihkan lalu tutup dengan corong berisi kapas basah 賊50 menit untuk menghidrolisis saponin Setelah dingin + amoniak sampai basa, ekstraksi 4-5mL n-heksana sebanyak 2x, uapkan sampai tinggal 0,5mL, totolkan pada plat KLT Cek dengan sinar UV 254nm. Sapogenin ditunjukan dengan warna merah untu untuk anesaldehida asam sulfat Sedikit ekstrak + beberapa tetes etanol, aduk sampai larut Totolkan pada fase diam (Kiesel Gel 254) Adanya terpenoid/steroid ditunjukkan dengan adanya warna merah ungu atau ungu
- 14. b) Skema Kerja Uji Buih Reaksi Warna Timbang ekstrak piper nigrum L. 0,9 gram Masukkan tabung reaksi + aquadest 10mL, kocok kuat 賊30 detik Tes buih postof mengandung saponin bila terjadi buih stabil semalam lebih dari 30 menit dengan tinggi 3cm di atas permukaan cairan ekstrak 0,5g + etanol 15mL bagi menjadi 3 bagian masing- masing 5mL, sebagai larutan IIA, IIB, IIC IIA IIB IIC
- 15. Uji Liebermann-Burchard Uji Salkowski Kromatografi Lapis Tipis (KLT) IIA sebagai blanko, IIB + 3gtt asam asetat anhidrat + 5gtt H2SO4 pekat, kocok perlahan, amati perubahan warna IIA IIB Biru-hijau = saponin steroid Merah-ungu = saponin triterpenoid Kuning muda = saponin jenuh IIA sebagai blanko, IIC + 1-2mL asam H2SO4 pekat melalui dinding tabung reaksi IIA IIB Cincin warna merah = steroid tak jenuh ekstrak 0,5g + 5mL HCN 2N didihkan lalu tutup dengan corong berisi kapas basah 賊50 menit untuk menghidrolisis saponin 1 Setelah dingin + amoniak sampai basa, ekstraksi 4-5mL n- heksana sebanyak 2x
- 16. Kromatografi Lapis Tipis (Steroid/Triterpene) 1 1 didihkan lalu tutup dengan corong berisi kapas basah 賊50 menit untuk menghidrolisis saponin 1 totolkan pada plat KLT 1 Cek dengan sinar UV 254nm. Sapogenin ditunjukan dengan warna merah untu untuk anesaldehida asam sulfat Sedikit ekstrak + beberapa tetes etanol aduk sampai larut Totolkan pada fase diam (Kiesel Gel 254) Adanya terpenoid/steroid ditunjukkan dengan adanya warna merah ungu atau ungu
- 17. DAFTAR PUSTAKA Harborne, J.B. 1987. Metode Fitokimia. Bandung: Penerbit ITB. Robinson, T. 1995. Kandungan Kimia Organik Tumbuhan Tingi. Bandung: Penerbit ITB. Sastrohamidjojo H, 1985, Kromatografi, Edisi I, Cetakan I, Penerbit Liberty, Yogyakarta. Afriastini.J.J. 1990. Bertanam Kencur. Wakarta Penebar Swadaya. Jakarta. Plantus, 2008, Tanaman Obat, http://www. Iptek net, diakses tanggal 3 Maret 2019 Amirth,Pal,Singh,2002. A Trestie on Phytochemistry. Emedia Sience Ltd. Wang, Y., T.A. McAllister, C.J. Newbold, L.M. Rode, P.R. Cheeke, & K.J. Cheng. 1998. Effects of Yucca schidigera extract on fermentation and degradation of steroidal saponins in the rumen simulation technique (RUSITEC). Animal Feed Science and Technology. Francis, G., Z. Kerem, H.P.S. Makkar, & K. Becker. 2002. The biological action of saponins in animal systems: A review. Br. J. Nutr Hostettmann, K. & A. Marston. 1995. Saponins. Cambridge: Cambridge University Press. K. Hostettmann, M Hostettman, MD, Marston A, 1995, Cara kromatografi preparative Penggunan pada Isolasi Senyawa Alam, hal 10, ITB, Bandung. Wallace, R.J., L. Arthaud, & C.J. Newbold. 1994. Influence of Yucca shidigera extract on ruminal ammonia concentrations and ruminal microorganisms. Applied Environmental Microbiology. Heyne, K.,1987,Tumbuhan Berguna Indonesia, Volume II, Yayasan Sarana Wana Jaya: Diedarkan oleh Koperasi Karyawan, Badan Litbang Kehutanan, Jakarta. Sunaryadi, 1999, Ekstraksi dan isolasi buah lerak (Sapindus rarak) serta pengujian daya
- 18. defaunasinya, Tesis, Program Pascasarjana Institut Pertanian Bogor, Bogor. Pasaribu T, Wina E, Sumiati, Setiyono A, Astuti DA. 2014. Effect of Sapindus rarak powder as feed additive on performance and lipid profile of broiler chicken infected by Eimeria tenella. JITV 19(4): 263-271. DOI: http://dx.doi.org/10.14334/jitv.v19i4.1099 Nevi Y, Fadhlina I. Efek antibakteri buah lerak terhadap Streptococcus mutans. Maj Kedokteran Gigi (Dent.J). 2009. Thalib, A. 2004. Uji efektivitas saponin buah sapindus rarak sebagai inhibitor metanogenesis secara in vitro. Jurnal ilmu Ternak dan Veteriner. Gunawan, D dan Mulyadi, S. 2004. Ilmu Obat Alam (Farmakognosi) Jilid I. Jakarta. Penebar Swadaya Farnsworth, Norman. R., 1996, Biological and Pytochemical Screening of Plants, Journal Of Pharmaceutical Sciences. Gritter, R.J., Bobbit, J.M., dan Swharting, A.E. 1991. Pengantar Kromatografi. Edisi Kedua. Penerbit ITB. Bandung Stahl, E., 1985, Analisis Obat Secara kromatografi dan Mikroskopi, diterjemahkan oleh Kosasih Padmawinata dan Iwang Soediro, 3-17, ITB, Bandung. Adnan, M., 1997. Teknik Kromatografi untuk Analisis Bahan Makanan, Edisi Pertama, 9, 14, 15, Penerbit Andi, Yogyakarta.