More Related Content
What's hot (20)
Similar to poliploidisasi ikan mas.pptx (20)
![Tutor mikrobiologi [compatibility mode]](https://cdn.slidesharecdn.com/ss_thumbnails/tutormikrobiologicompatibilitymode-110512183504-phpapp02-thumbnail.jpg?width=560&fit=bounds)
poliploidisasi ikan mas.pptx
- 1. TENTANG :
- 2. Oleh : Akhmad Taufiq Mukti1, Rustidja2, Sutiman Bambang Sumitro3 dan Mohammad Sasmito Djati3
- 4. Latar Belakang Masalah Metode Cara Kerja Hasil & Pembahasan Kesimpulan & Saran Isi jurnal meliputi
- 5. 1. PENDAHULUAN Perlunya memperhatikan efisiensi dan produktivitas usaha serta kualitas ikan dalam pengelolaan budidaya ikan, khususnya ikan mas yang harus diimbangi dengan upaya perbaikan dan peningkatan kualitas induk maupun benih ikan mas. Di sinyalir, telah terjadi penurunan kualitas induk maupun benih ikan mas yang dipelihara oleh petani ikan. Beberapa usaha maupun penelitian telah dilakukan dalam upaya peningkatan produktivitas (produksi) dan perbaikan serta peningkatan kualitas genetik ikan mas seperti program seleksi, manipulasi jenis kelamin melalui perlakuan hormonal maupun manipulasi kromosom. Latar Belakang Masalah
- 6. 2. METODE DAN CARA KERJA Metode yang dipergunakan dalam penelitian ini adalah metode eksperimen dengan Rancangan Acak Lengkap (RAL). Kemudian, sebagai perlakuan adalah kejutan suhu panas 40属C selama 1,5 menit yang diperlakukan pada telur terfertilisasi dan dibagi menjadi 3 kelompok perlakuan, yaitu : a. Kelompok ikan normal diploid (2 N), tanpa perlakuan kejutan suhu panas. b. Kelompok ikan triploid (3 N), kejutan suhu panas pada telur 3 menit setelah fertilisasi. c. Kelompok ikan tetraploid (4 N), kejutan suhu panas pada telur 29 menit setelah fertilisasi.Masing-masing perlakuan dilakukan ulangan 10 kali.
- 8. 1. Pemijahan dan stripping induk ikan mas memasangkan induk ikan mas jantan dan betina di dalam kolam pemijahan ikan dengan perbandingan jantan dan betina adalah 3:1 Kemudian, ikan mas akan melakukan perkawinan secara alami. Setelah nampak tanda-tanda ikan mulai memijah, induk betina dan jantan ikan mas ditangkap dan dilakukan pengurutan (stripping) untuk mendapatkan telur dan sperma ikan mas Telur-telur yang diperoleh ditampung dalam petridish dan sperma ditampung dalam tabung reaksi yang berisi larutan NaCl Fisiologis dengan pengenceran 10 kali dan disimpan sementara dalam refrigerator suhu 4属C.
- 9. 2. Perlakuan Poliploidisasi Mengambil telur ikan mas dalam petridish hasil stripping dengan menggunakan spatula dan diletakkan dalam petridish bersih dan kering. Kemudian, teteskan larutan sperma pada telur sebanyak 2-3 tetes dan dilakukan pengadukan (dicampur) secara perlahan mempergunakan bulu ayam. Campuran larutan sperma dan telur ditambahkan air bersih sebanyak 3-4 tetes, dan diaduk perlahan dengan mempergunakan bulu ayam. Setelah satu menit, telur yang telah terfertilisasi dibagi menjadi 3 kelompok perlakuan dan disebar pada masing-masing saringan yang telah ditempatkan dalam wadah berisi larutan urea dan garam 3:4 untuk 1 liter air.
- 10. 2.Lanjutan dari Perlakuan Poliploidisasi selanjutnya, telur-telur kontrol tanpa perlakuan kejutan suhu (diploid) langsung dimasukkan ke bak penetasan (inkubasi) telur. Telur-telur terfertilisasi dalam kelompok triploidisasi, 3 menit setelah fertilisasi dilakukan perlakuan kejutan suhu panas 40属C selama 1,5 menit. Kemudian dimasukkan dalam bak inkubasi. Telur - telur terfertilisasi dalam kelompok tetraploidisasi, 29 menit setelah fertilisasi dilakukan perlakuan kejutan suhu panas 40属C selama 1,5 menit dan kemudian dimasukkan bak penetasan (inkubasi) telur.
- 11. 3. Penetasan dan pemeliharaan larva Letakkan telur-telur terfertilisasi dalam saringan yang telah diperlakukan triploidisasi dan tetraploidisasi serta kontrol dalam bak penetasan yang telah diberikan methylen blue dengan suhu air diatur 28属C. 賊 8-10 jam setelah fertilisasi, dilakukan penghitungan telur terfertilisasi dan tidak terfertilisasi. Kemudian hitung laju penetasan dan larva cacat ( secara morfologis ) pada saat telur telur menetas, 2-3 hari setelah fertilisasi. Setelah seminggu lamanya, larva ikan dipindahkan ke dalam akuarium dan diberikan pakan alami Artemia sp., cacing Tubifex sp dan pakan pellet.
- 12. 4. Analisis Ploididsasi Larva ikan mas dipelihara 賊 1 bulan dan dihitung kelangsungan hidupnya. yang meliputi kecepatan dan laju pertumbuhannya yang dihitung melalui pengukuran panjang tubuh dan berat tubuh masing-masing perlakuan yang dilakukan tiap 10 hari sekali. Penghitungan dilakukan melalui jumlah nukleolus ikan mas hasil perlakuan poliploidisasi yang mempergunakan pewarnaan perak nitrat. Jaringan yang dipergunakan adalah jaringan insang, sirip pectoral dan sirip ekor ikan mas hasil perlakuan poliploidisasi.
- 13. Lanjutan Analisis Ploididsasi 1. Sebagian jaringan diambil dan dikeringkan di atas tissu. Kemudian dimasukkan dalam petridish berisi larutan hipotonik (KCl 0,075 M) dingin selama 90-100 menit. 2. Selanjutnya rendam dalam larutan fiksatif segar dan dingin selama 60 menit. Tiap 30 menit sekali larutan fiksatif diganti dengan yang baru (segar). 3. Letakkan jaringan pada gelas obyek cekung dan tambahkan larutan asam asetat 50 % serta dicacah sampai terbentuk suspensi sel. Kemudian teteskan suspensi sel ini dengan mempergunakan mikropippet ke atas gelas obyek yang telah direndam dalam alkohol 70 % dingin selama minimal 2 jam dan dipanaskan pada suhu 45-50属C.
- 14. Lanjutan Analisis Ploididsasi 4. Pewarnaan preparat nukleolus dilakukan dengan pembercakan perak nitrat di atas preparat sel, yaitu 2 tetes larutan A (10 gram AgNO3 + 20 ml aquadest) dan 1 tetes larutan B (2 gram gelatin + 50 ml aquadest hangat + 50 ml gliserin). Kemudian dicampur dan disebarkan secara merata di atas preparat mempergunakan tusuk gigi. 5. Masukkan preparat ke dalam box staining yang suhunya diatur 45-50属C dan dibiarkan selama 20-30 menit atau sampai warna berubah kuning kecoklatan. 6. Ambil preparat kemudian bilas dengan air bersih serta dikeringanginkan beberapa menit. 7. Amati jumlah nukleolus preparat di bawah mikroskop cahaya, dengan pembesaran 25 x sampai 100 x.
- 15. 5. Pengamatan perkembangan gonad Pengamatan perkembangan gonad ikan mas perlakuan poliploidisasi dilakukan dengan cara melakukan pembedahan bagian tubuh ikan mas yang telah berumur lebih kurang 4 bulan. Kemudian, dilakukan pengamatan gonad ikan secara visual (morfologi) dan difoto.
- 16. 6. Parameter uji dan analisis data Parameter uji adalah laju penetasan (HR), kelangsungan hidup (SR), kecepatan pertumbuhan relatif (h) dari pengukuran panjang tubuh ikan mas, laju pertumbuhan spesifik (SGR) dari pengukuran berat tubuh ikan mas, perkembangan gonad dan analisis ploidisasi dengan menghitung jumlah nukleolus (induksi ploidi).Analisis statistik mempergunakan analisis keragaman dengan uji F (ANOVA) dan uji Beda Nyata Terkecil untuk mengetahui perlakuan terbaik. Ket: a : jumlah telur menetas normal (larva normal) b : jumlah telur menetas cacat (larva cacat) c : jumlah telur tidak menetas
- 17. Parameter uji dan analisis data
- 18. 3. HASIL DAN PEMBAHASAN 1. HASIL Tabel 1. Data rerata hasil pengamatan ikan mas (Cyprinus carpio L.) diploid, triploid dan tetraploid.
- 19. 3. HASIL DAN PEMBAHASAN 1. Laju penetasan Laju penetasan ikan mas kontrol (diploid) sebesar 25,94 賊 6,76 %, sedangkan triploid dan tetraploid masing-masing sebesar 22,63 賊 8,36 % dan 11,10 賊 8,60 %. Laju penetasan ikan mas diploid berbeda sangat nyata dengan ikan mas triploid maupun tetraploid. Hasil analisis statistik melalui uji Beda Nyata Terkecil menunjukkan bahwa ikan mas diploid memiliki laju penetasan tertinggi dan berbeda sangat nyata (P<0,01) dengan tetraploid, sedangkan laju penetasan ikan mas triploid tidak berbeda nyata dengan diploid (P>0,05), seperti terlihat pada Gambar 1. Tetapi, persentase larva cacat antara diploid dan triploid menunjukkan perbedaan sangat nyata (P<0,01) (lihat Tabel 1).
- 20. Gambar 1. Rerata laju penetasan telur ikan mas (Cyprinus carpio L.) diploid, triploid dan tetraploid. Tabel 1. Data rerata hasil pengamatan ikan mas (Cyprinus carpio L.) diploid, triploid dan tetraploid.
- 21. Kelangsungan hidup ikan mas diploid sebesar 75,52 賊 7,97 %, triploid sebesar 52,64 賊 8,46 % dan tetraploid sebesar 55,04 賊 8,15 %. Hasil analisis statistik uji BNT memperlihatkan, ikan mas diploid memiliki kelangsungan hidup tertinggi dan berbeda sangat nyata (P<0,01) bila dibandingkan dengan triploid dan tetraploid. Kelangsungan hidup ikan mas triploid tidak berbeda nyata (P>0,05) dengan ikan mas tetraploid 2. Kelangsungan Hidup
- 22. Gambar 2. Rerata kelangsungan hidup ikan mas (Cyprinus carpio L.) diploid, triploid dan tetraploid.
- 23. Ikan mas tetraploid memiliki kecepatan pertumbuhan relatif dan laju pertumbuhan spesifik lebih baik (tinggi), masing-masing sebesar 5,38 dan 44,57%, sedangkan ikan mas triploid sebesar 4,42 dan 43,05 % dan diploid sebesar 3,51 dan 39,97 %. Hal ini dapat dilihat pada Gambar 3 dan 5. Hasil analisis statistik menunjukkan bahwa kecepatan pertumbuhan relatif dan laju pertumbuhan spesifik ikan mas tetraploid berbeda sangat nyata (P<0,01) dengan ikan mas diploid maupun triploid. Pada Gambar 4 dan 6 terlihat, kecepatan pertumbuhan relatif dan laju pertumbuhan spesifik harian ikan mas tetraploid juga cenderung lebih tinggi bila dibandingkan dengan ikan mas diploid maupun triploid. 2. Pertumbuhan
- 24. Gambar 3. Kecepatan pertumbuhan relatif ikan mas (Cyprinus carpio L.) diploid, triploid dan tetraploid Gambar 5. Laju pertumbuhan spesifik ikan mas (Cyprinus carpio L.) diploid, triploid dan tetraploid selama 30 dan 110 hari.
- 25. Gambar 4. Kecepatan pertumbuhan relatif ikan mas (Cyprinus carpio L.) diploid, triploid dan tetraploid selama 110 hari. Gambar 6. Laju pertumbuhan spesifik ikan mas (Cyprinus carpio L.) diploid, triploid dan tetraploid selama 110 hari.
- 26. 3. Analisis Ploididsasi Analisis ploidisasi dari perlakuan kontrol (diploid) menghasilkan induksi ploidi dan hasil ploidi masing-masing sebesar 100 % dan 100 %. a. Perlakuan kejutan suhu panas pada telur 3 menit setelah fertilisasi telah menghasilkan induksi triploid sebesar 70 % dengan hasil ploidi sebesar 61,07 %, b. Perlakuan kejutan suhu panas pada telur 29 menit setelah fertilisasi menghasilkan induksi tetraploid sebesar 60 % dengan hasil ploidi sebesar 25,67 %. Hasil analisis ploidisasi mempergunakan metode penghitungan jumlah nukleolus dalam penelitian ini dapat dilihat pada Tabel 2. Level ploidisasi ditentukan berdasarkan jumlah maksimum nukleoli yang ditemukan.Dengan Jumlah sampel ikan yang dipergunakan untuk masing-masing perlakuan adalah 50 ekor. Pada ikan diploid ditemukan 646 sel dengan rata-rata 129 sel yang teramati. Ikan triploid ditemukan 584 sel dengan rata-rata 117 sel yang teramati, sedangkan tetraploid ditemukan 559 sel dengan rata-rata 112 sel yang teramati.
- 27. Tabel 2
- 28. Perkembangan gonad ikan mas diploid tidak jauh berbeda dengan perkembangan gonad ikan mas tetraploid. Ikan mas diploid dan tetraploid sama-sama mengalami perkembangan gonad secara normal. Hal ini berbeda dengan ikan mas triploid yang menunjukkan bahwa jaringan gonad di dalam rongga tubuhnya tidak berkembang dengan baik atau dapat dikatakan steril. 5. Perkembangan Gonad
- 29. 3. HASIL DAN PEMBAHASAN 2. PEMBAHASAN 1. Laju Penetasan Laju penetasan telur ikan mas yang dipergunakan dalam penelitian ini sangat rendah, meskipun derajat pembuahannya (FR) cukup tinggi (lihat Tabel 1). Umumnya persentase penetasan ikan berkisar antara 50-80 % (Richter dan Rustidja, 1985). Rendahnya laju penetasan telur ikan mas ini dapat disebabkan oleh media inkubasi (penetasan).
- 30. 2. Kelangsungan hidup Kelangsungan hidup ikan mas triploid dan tetraploid lebih rendah apabila dibandingkan dengan ikan mas diploid. Hal ini kemungkinan besar akibat rendahnya kemampuan ikan-ikan poliploid seperti triploid dan tetraploid dalam menangkap oksigen terlarut dalam air. Kemampuan banding oxygen atau pengikatan oksigen terlarut ikan-ikan triploid dan tetraploid sangat rendah bila dibandingkan dengan ikan normal (Rustidja, komunikasi personal).
- 31. 3. Pertumbuhan Hasil penelitian ini memperlihatkan bahwa ikan mas tetraploid memiliki pertumbuhan lebih tinggi dibandingkan dengan ikan mas triploid terutama diploid (selama 30 dan 110 hari). Hal ini diduga karena ikan tetraploid memiliki ukuran dan isi nukleus serta sel jauh lebih besar bila dibandingkan dengan diploid atau triploid. Triploid sendiri mempunyai ukuran nukleus dan sel yang lebih besar dibandingkan diploid, sehingga laju pertumbuhannya lebih tinggi (Fankhauser, 1945 dalam Gold, 1979; Ger et al., 1993; Tave, 1993).
- 32. 4. Perkembangan gonad Tidak berkembangnya gonad ikan mas triploid dikarenakan kromosom yang berjumlah 3 set (ganjil), selama pembelahan meiosis tidak dapat melakukan perpasangan dengan kromosom homolognya. Pada akhirnya gonad tidak berkembang lebih lanjut dan ikan triploid akan menjadi (Thorgaard, 1983; Chingjiang et al., 1986; Goodenough, 1988; Rustidja, 1991). Kegagalan perkembangan gonad kemungkinan pada gilirannya mencegah munculnya efek-efek sampingan yang tidak diinginkan pada kematangan kelamin, seperti kualitas daging yang rendah, pertumbuhan lambat dan kematian tinggi (Thorgaard, 1983).
- 33. 5. Poliploidisasi Ploidisasi melalui penghitungan jumlah nukleolus dengan perlakuan kejutan suhu 40属C selama 1,5 menit yang menghasilkan triploid sebesar 70 % dan tetraploid sebesar 60 % menunjukkan bahwa perlakuan telah efektif untuk menghasilkan poliploidisasi pada ikan mas, akan tetapi masih belum optimal. Keberhasilan poliploidisasi sangat dipengaruhi oleh suhu kejutan, waktu kejutan dan lama kejutan, seperti disampaikan oleh Don dan Avtalion (1986) dan tergantung juga pada umur dan kualitas (kematangan) telur (Pandian dan Varadaraj, 1990).
- 34. 6. Nukleolus Hasil pengamatan nucleolus menunjukkan perbedaan pewarnaan antara nukleoli (anak inti) dengan nukleus (inti). Nukleus akan tampak berwarna kekuningan atau kecoklatan, sedangkan nukleoli berwarna hitam. Pewarnaan perak nitrat akan memperlihatkan nukleolus berwarna hitam dalam nukleus yang berwarna kuning (Phillips et al., 1986).
- 35. Lanjutan Nukleolus Hasil analisis ploidisasi ikan mas perlakuan poliploidisasi pada penelitian ini memperlihatkan adanya variasi jumlah (frekuensi) nucleoli per sel yang ada dalam masing-masing perlakuan (Tabel 2). Variasi jumlah nukleoli yang ditemukan ada hubungannya dengan kemampuan pewarna AgNO3 yang hanya mewarnai nukleoli (dalam hal ini NORs, nucleoli organizer regions) yang sedang aktif melakukan sintesis ribosom dan atau protein sesaat sebelum dilakukan fiksasi (Gold, 1984 dan Hubbel, 1985 dalam Carman dkk., 1997).
- 36. Lanjutan Nukleolus Hasil yang diperoleh memperlihatkan bahwa ikan diploid memiliki 1 dan atau 2 nukleoli dalam setiap selnya, triploid memiliki 1, 2 dan atau 3 nukleoli dan tetraploid memiliki 1, 2, 3 dan atau 4 nukleoli. Phillips et al. (1986) mengemukakan, individu haploid mempunyai 1 nukleolus per sel, diploid mempunyai 1 atau 2 nukleoli per sel dan triploid mempunyai 1, 2 atau 3 nukleoli per sel.
- 37. KESIMPULAN DAN SARAN Kesimpulan 1. Perlakuan kejutan suhu panas berpengaruh secara nyata terhadap laju penetasan telur ikan mas hasil poliploidisasi. 2. Perlakuan kejutan suhu panas berpengaruh secara nyata terhadap kelangsungan hidup ikan mas hasil poliploidisasi. 3. Ikan mas perlakuan kejutan suhu panas memiliki kecepatan pertumbuhan relatif dan laju pertumbuhan spesifik yang lebih baik/tinggi dibandingkan ikan mas normal (diploid). Ikan mas tetraploid memiliki pertumbuhan jauh lebih tinggi dibandingkan ikan mas diploid dan triploid.
- 38. Lanjutan dari kesimpulan Kesimpulan 4. Perlakuan kejutan suhu panas berpengaru secara nyata terhadap perkembangan gonad ikan mas. Ikan mas triploid tidak memperlihatkan perkembangan gonad yang baik (steril) bila dibandingkan dengan ikan mas diploid dan tetraploid. 5. Perlakuan kajutan suhu panas menghasilkan induksi triploid dan tetraploid masing-masing sebesar 70 % dan 60 %.
- 39. KESIMPULAN DAN SARAN Saran Perlakuan kejutan suhu panas dapat dimanfaatkan secara luas untuk poliploidisasi ikan mas dengan perlakuan kejutan suhu 40属C selama 1,5 menit.