Kimia Fisika - Kromatografi
Download as DOCX, PDF0 likes661 views
Kromatografi Kertas Kromatografi Kolom Kromatografi Lapis Tipis
More Related Content
What's hot (13)
More from Dhanti Utari (11)
Recently uploaded (20)
Kimia Fisika - Kromatografi
- 1. No Keterangan Kromatografi Kertas Kolom TLC 1 Prinsippemisahan - Partisi : perbedaankelarutan komponenterhadapfase diam dan fase gerak. Fase diam-> cairan -> air yang terikatdalamstrukturselulosa. Fase gerak -> cairan-> eluen. - jikakelarutankomponentinggi terhadapair makapergerakkan komponenyangterbawaoleh eluenakanlambat.Komponen seperti ini bersifatpolar. - jikakelarutankomponentinggi terhadapeluenmaka pergerakkankomponenakan cepat.Bersifatnon-polar. - Rf kecil =polar - Rf besar= non-polar - Didasarkanpadaabsorbsi komponen-komponen campuran denganafinitas berbedaterhadappermukaan fase diam. - Absorbenbertindaksebagai fase diamdan fase geraknya cairan yangmengalir membawakomponen campuran sepanjangkolom. - Sampel yangmempunyai afinitasbesarterhadap absorbenakansecara selektif tertahandan afinitasnya palingkecil akanmengikuti aliranpelarut. - KLT menggunakansebuah lapissilica/aluminayang seragampada sebuah lempenggelas/tutupkaca. - Jel silica/alumina merupakanfase diam. - Fase geraknyapelarut/ campuanperlarutyang sesuai (eluen). Pelaksanaanini biasanya dalampemisahanwarnayang merupakangabungandari beberapazatwarna. 2 Prosesyangterjadi selamaelusi - Pelarutbergerakkarenagaya kapilaritas. - sehinggaakanmelarutkan komponen. - kelarutankomponentinggi terhadapfase diam(air) pergerakkankomponentertahan. - kelarutankomponentinggi terhadapfase gerak(eluen) pergerakkankomponencepat. - sehinggaterjadi pemisahan komponen. IkatanHidrogen. IkatanHidrogen
- 2. 3 Jenis-jenisdansifatfase diam Syarat-syaratkertassaring: - Kertasselulosamurni yang mempunyai afinitasbesar. - arah seratnyalurus. - tidakbolehmengandunglignin (lilin). - inert. - aliranyangbaikdan teratur. - tidakberwarna. - tidaklarutdalamfase gerak. - cukupaktif. Padat;Adsorben/Alumina - Silicagel - Alumina - Magnesium - Prisilikat - Kalsiumsulfat - Kieselghur - Selulosa 4 Jenisfase gerak 22 ml Etanol 90%+ 3 ml HCl 5 N -Syaratfase gerak: Harus dapat melarutkansemua komponen. -Komposisi pelarut: Non-polar> polar (pelarutnon-polarkomposisinya lebihbanyakdibandingpelarut polar). -komponenyangdipisahkan mempunyai kepolaranyang berbedasehinggaeluenyang digunakanterdiri dari 2/lebih peraksi (terdiri dari polar&non- polar). Hexane :Aseton= 1 : 4 Butanol : As.Asetat(p) : Air= 2 : 1 : 1 5 Kodisi yangharusdiperhatikan selamapemisahan - Spoting( penotolan) sampel harus terpisahdanpadagaris yang sama. - Kertasharusdiletakkan tegak lurusdidalamchamberdan - Janganterlalupadatsaat memasukkankapaspada bagiandasar kolom,karena jikaterlalupadat dikhawatirkaneluen/sampel sulituntukdiserap. -banyaksedikitnyawaktu pada saat menjenuhkaneluen pada chamber. -suhu -silikamenyentuheluen. -posisi plattegaklurus.
- 3. bagiandasar kertasharus tercelupeluen. - suasanachamberharus jenuh olehuapdari eluen,agargaris eluensetimbangdan mempercepatgerakeluen. Kejenuhanchamberditandai denganadanyaembun. - T dan P harus tetap. - Aluminaharusdituang secara merata,tidakboleh ada bagianyang kosong karenaakan mempengaruhi prosespenguraianwarna sempel. - Janganterlalubanyak menambahkanpasirkarena akan mempengaruhi kecepatangerak eluen/sampel. - Tuang sampel sedikitdemi sedikitdanmerata. - Janganbiarkankolomkering tanpa eluen. - Jangansampai eluen menggenangdalamkolom. -palattidakterkerik. 6 Pembagiankromatografi Kromatografi cair Kromatografi cair Kromatografi cair 7 Syarat-syaratfase diam Menggunakankertassaring sebagai fase diamdengansyarat: -Merupakanselulosamurni -Memiliki afinitasbesarfase geraknya. -Tidaklarutdalamfase gerak -Inert -Cukupaktif -Sebaiknyatidakberwarna -Memungkinkanaliranbaik dan teratur -Tidaklarutdalamfase gerak -Dapat menyerapfase gerak denganbaik. 8 Syarat-syaratfase gerak -Dapat memisahkankomponen sampel denganbaik -Tidakbereaksi dengansampel -Dapat menyerapdi fase diam denganbaik. -Tidakmelarutkanfase diam yang digunakan -Tidakmengakibatkanaksi yang terlalucepatatauterlalu lambat. -Kemurnianyangmemadai -Stabil -Viskositasrendah -Tekananuapsedang -Daya toksikyangrendah. 9 Faktor yangmempengaruhi Rf dan Rs -Komposisi pelarut -Suhu -Ukuranbejana -Sifatcampuran -Ukurankolomyang digunakan -Lajuelusi -Pemilihanadsorban -Strukturkimiasenyawayang dipisahkan -Sifatpenyerap -Pelarutyangdigunakan
- 4. -Jeniskertasnya -Kejenuhanuapdalamchamber -Kepolaranpelarutatau pemilihanpelarutyangsesuai. -Suhu -Kejenuhanuap chamber. 10 Manfaat kromatografi -untukmemisahkankomponen yang kepolarannyatinggiseperti gula,asamamino,danpigmen alam. -untukmengidentifikasi. -untukmelakukananalisis kuantitatif dankualitatif. -untukmengisolasi. Di bid. Bioteknologi Untuk penentuanbaik kuantitatif maupunkualitatif senyawadalamprotein. Proteinseringdipilihkarenaia seringmenjadi objekmolekul yang harusdi- purified(dimurnikan) tertutamauntukkeperluan dalambio-farmasi. Kromatografi jugadapat diaplikasikandalma pemisahanmolekul penting seperti asamnukleat, karbohidrat,lemak,vitamin dsb. Memberikaninformasi mengenai berapabanyak komponenyangterdapat dalamsuatu campurandan untukidentifikasidengan perbandinganRFdanRS 11 Faktor-faktoryang mempengaruhi hasil pemisahan -Komposisi pelarut -Suhu -Ukuranbejana -Sifatcampuran -Jeniskertasnya -Kejenuhanuapdalamchamber- KehadiranIonlain,keasaman sampel,waktu,suhu, ukuran dari bejana,adanyakationlain Daya serapadsorben, jenis atau siateluen,suhu kromatografi,pelarutyang digunakan Pemilihanfase gerak,suhu, kehadiranzatlain 12 Faktor yangharus dipertimbangkandalammemilih eluen -stabil -murni -tidakbereaksi -tidakberwarna -mampumelarutkan/aktif terhadapkomponen. Sistempelarutdengan kepolaranbertingkat, kemampuaneluenuntuk menghasilkanpemisahan, lamanyawaktuelusi , kestabilaneluendan kemudahanpenyediaaneluen Prinsiplike dissolve like , kepolaransenyawan, kemampuaneluenuntuk menghasilkanpemisahan, lamanyawaktuelusi , kestabilaneluendan kemudahanpenyediaaneluen
- 5. -kemampuaneluen untuk menghasilkanpemisahan -lamanyawaktuelusi -mudahdidapat. 13 Teknikdalamkromatografi Ada 3 cara: 1. Ascending (cara naik/kapilaritas) 2. Descending (cara turun/gravitasi) 3. Diputar90¡ã/2D->2x elusi (untukmemisahkan2 komponenyangsulit dipisahkan) Dimanacampuran komponen yang terlarutpadapelarut akan dituangke dalam adsorbenpadakolomdan dielusi denganpelarutyang sama atau berbeda. Kromatografi ini menggunakansystem¡°padat- cair¡± denganfasadiamnya (adsorben) yangberbentuk soliddanfase geraknya berbentukcairan. Pada KLT platdiisi dengan silicagel kemudian dikeringkan.Sampel ditotolkanpadaplatdengan jarak-jaraktertentu. Kemudianfasadiam diletakkannerdiri dalam chambertertutupyangtelah berisi fase gerak(pelarut). Pelarutperlahan-lahan bergeraknaik.Komponen- komponenyangberbedadari campuran bergerakpada tingkatyangberbeda.Teknik percobaanmenggunakanarah pelarutbergerakdi atasplat. 14 Cara analisiskualitatif Berdasarkanwarna(visualisasi) Disemprotkanzatyangdapat menghasilkanwarnayang spesifikterhadapkomponen. ? Cu2+ + 2I? -> 2CuI2 (putih) ??? ?????? ¡ú Cu2I2 + I2 (coklat) ? Pb2++ 2I?-> PbI2 (kuning) ? Hg2+ + 2I? -> HgI (merah) Nilai Rf khassetiapkomponen Kromatogramdapat menujukkanwaktuyang dibutukamuntuk elusi suatu pitakomponensampel.Dasar analisiskualitatif untuk kromatografi adalahwaktu retensi,wakturetensiini spesifik.Wakturetensi adalah waktuyang menunjukkan puncakkromatogram. Sampel akanterpisahmenjadi noda-nodayangmemiliki warna yangberbeda-bedadan nilai RFyang berbedapula. Kemudiannoda-nodaini diidentifikasi. 15 Cara analisiskuantitatif - Menggunakangrafik hubungan antara logkonsentrasi danarea dari bercak.Mengukurtransmisi Mengukurabsorbansi masing- masingfraksi sacara spektofotometri untuk menghitungkadarnya. Menggunakantransmisi cahaya yang melalui bercak denganfotodensitometri.
- 6. cahaya yang melalui bercak denganfotodensitometri - Mengguntingareadari bercak, kemudiandiekstraksidan ditetapkankadarnyasecara spektofotometri.