More Related Content
Similar to 53hr (20)
More from improvemed (20)
53hr
- 1. Pokusi na izoliranim vaskularnim prstenovima Doc.dr.sc. Martina Mihalj, dr. med.
- 2. FIZIOLOGIJA KRVNIH 貼ILA Dobro razumijevanje fiziologije vaskularnog sustava nu転no je za razumijevanje tijeka pokusa Mehanizmi vazodilatacije i vazokonstrikcije
- 3. Unutarstanina signalizacija V r s t e r e c e p t o r a: 1. R e c e p t o r o v i s n i i o n s k i k a n a l i (ionotropni receptori) 2. R e c e p t o r i s p r e g n u t i s G -p r o t e i n o m (metabotropni receptori) 3. K i n a z n i r e c e p t o r i 4. N u k l e a r n i r e c e p t o r i
- 4. R R E R G G Stanini odgovor Stanini odgovor Stanini odgovor Stanini odgovor Hiperpolarizacija ili depolarizacija Promjena podra転lji- vosti Drugi glasnici Otpu邸tanje Ca2+ Fosforilacija proteina drugo Fosforilacija proteina Transkripcija gena Sinteza proteina R Transkripcija gena Sinteza proteina 1. Receptor-ovisni ionski kanali 2. Receptori spregnuti sa G-proteinima (metabotropni receptori) 3. Kinazni receptori 4. Nuklearni receptor Vremenska skala: Milisekunde Primjer: Nikotinski receptor za Ach Vremenska skala: Sati Primjer: Citokinski receptor Vremenska skala: Sati Primjer: Estrogenski receptori Vremenska skala: sekunde Primjer: Muskarinski receptor za Ach
- 5. Meta 1Meta 2 留 GDP Meta 1 GTP 硫粒 GDP P Hidroliza Receptori spregnuti s G - proteinom
- 6. Unutarstanina signalizacija Receptori spregnuti sa G proteinom Meta 1 Meta 2 留 硫粒 GDP Meta 1 Meta 2 留 硫粒 GDP GTP Meta 1 Meta 2 留 硫粒 GTP Meta 1 Meta 2 留 硫粒 GDP + P Receptor zauzet Meta aktiviranaGTP hidroliziran 1. 4. 3. 2. GDP
- 8. Adenilat ciklaza AC 留 硫粒 GTP ATP cAMP Inaktivna Proteinkinaza A Aktivna Proteinkinaza A Fosfodiesteraza ATP cAMP AC Pojaana lipoliza sinteza glikogena razgradnja glikogena ...
- 9. Ca2+ Fosfolipaza C Fos. C 留 硫粒 GTP PIP2 DAG IP3 IP4 aktivacija Protein kinaze C Oslobaanje Unutarst. Ca++ Ulaz Ca++ kroz membranu kalmodulin Ciljni enzimi Ca2+ Ca2+ Ca2+ Ca2+ Ca2+
- 12. News Physiol. Sci. 14;238-242, 1999; posueno iz prezentacije prof.dr.sc. Ines Drenjanevi - Peri 20-HETE and EETs in Control of Renal Vascular Tone
- 13. 留1 Fos. C 留 硫粒 GTP PIP2 IP3 IP4 Ca2+ Ca2+ Ca2+ Ca2+ Ca2+ kalmodulin Kinaza lakih miozinskih lanaca IP3 GLATKA MIINA STANICA L Ca2+ kanali ovisni o naponu Ca2+ kanali ovisni o ligandu ATP ATP Ca2+ kanali regulirani zalihom Ca2+ Ca2+ Ca2+ Ca2+ Ca2+ Ca2+ Ca2+ Na+
- 15. L-arginin NO eNOS GMP Gvanilat ciklaza cGMP Endotelna stanica Glatka mi邸ina stanica Bazalna membrana PK NO: endotelni faktor relaksacije Ca2+ - kalmodulin + -
- 16. Fiziolo邸ka humoralna regulacija VAZOKONSTRIKTORI Noradrenalin Angiotenzin II. Vazopresin (ADH) Endotelin VAZODILATATORI Bradikinin Serotonin Histamin Prostaglandini NO (EDRF) C-natriuretski peptid Adrenomodulin EDHF (endotelni hiperpolarizacijski faktor)
- 17. Fiziolo邸ka 転ivana regulacija VAZOKONSTRIKTORI Simpatikus: NA putem 留1 留2 VAZODILATATORI Parasimpatikus: Ach Simpatikus: Na putem 硫2
- 18. UINCI VAZOAKTIVNIH LIJEKOVA NA KRVNE 貼ILE ACETILKOLIN L-NAME INDOMETACIN KOTRIMAZOL VERAPAMIL NO donori KCl NORADRENALIN
- 19. Noradrenalin 留1 Fos. C 留 硫粒 GTP PIP2 DAG IP3 aktivacija Protein kinaze C Oslobaanje Unutarst. Ca++ Ca2+ Ca2+ Ca2+ Ca2+ Ca2+ kalmodulin Ciljni enzimi IP3 R-IP3 Ca2+ Ca2+
- 21. L - N A M E L-arginin NO eNOS GMP Gvanilat ciklaza cGMP Endotelna stanica Glatka mi邸ina stanica Bazalna membrana
- 22. Indometacin Arahidonska kiselina PGI2 COX AMP Adenilat ciklaza cAMP Endotelna stanica Glatka mi邸ina stanica - Udio PGI2 (prostaciklina) u endotel ovisnoj vazodilataciji je relativno mal Bazalna membrana
- 23. Klotrimazol
- 25. PRIPREMA ZA POKUS Pokretanje sustava (temp . 37 C, doprema O2 itd.) Kalibracija sustava Priprema Krebs Henseleitove otopine Razrijaivanje lijekova
- 26. 4-vero kanalni sustav kupki za izolirane organe sadr転i: etverokanalni standardni sustav kupki za izolirane organe (tkivne prstenove i trakice) sa svom prikljunom opremom (cijevi, kablovi itd.) etverokanalni pojaiva mjerene sile Izometrini pretvara sile Softwer za prikupljanje i obradu podataka Sustav za primanje i prijenos siganala sa sustava kupki za izolirane organe na raunalo (etverokanalni s moguno邸u pro邸irivanja na osamkanalni sustav) Sustav za grijanje i cirkulaciju vode sa spremnikom od 20 l i moguno邸u prilagodbe temperature u rasponu od 20 50 尊C te s precizno邸u od 賊0,1 尊C
- 28. Pretvara sile 20 mL bazeni Makro i mikro vijak za pode邸enje napetosti
- 30. Sastojak Koncentracija/mM Masa/g Masa/g Deionizirana voda - 4 L 6L NaCl 113 27,580 41,37 KCl 4,7 1,402 2,103 CaCl2 x 2H2O 2,5 1,470 2,205 EDTA 0,026 0,0304 0,05 MgSO4 x 6H2O 1,2 1,185 1,78 KH2PO4 1,2 0,653 0,98 NaHCO3 22 7,395 11,09 Glukoza - 7,999 11,99 Krebs Henseleitova otopina
- 31. PRIPREMA LIJEKOVA ZA POKUS Lijekovi se pripremaju kao 20 mM (iznimno 3M i 2mM) uvaju se 2 do 3 mjeseca na -20 C KCl
- 32. Lijek/aktivna tvar Mr (g/L) Priprema 20 mM otopine Koncentra-cija u bazenu Potrebno dodatno razrjeenje 20 mM otopine Vol. koji se dodaje u bazeni (亮L) KCl 74,56 Priprema se 3M 11,3g/50mL 60 mM Ne 400 Noradrenalin 205,0 41mg/10mL 10-4 M Zamorac: 100 x (10-6) takor: 1000x (10-7) 100 Acetilkolin 181,7 36,4mg/10mL 10-4 M Zamorac: 10 x (10-5) takor: 100x (10-6) 100 L-NAME 268,0 53,6mg/10mL 3x10-4 M Ne 300 Indometacin 358,0 71,6mg/10mL 10-4 M 10x (10-5 M) 100 Klotrimazol 344,8 69mg/10mL 10-4 M 10x (10-5 M) 100 Verapamil 491,0 amp: 5mg/2mL Priprema se 2 mM 4 mL iz amp. + 6 mL H2O 20 亮M Ne 200 * Otapalo za Indometasin je 96% etanol ili DMSO/ ponekad i dr. Ovisno o proizvoau
- 33. KIRURGIJA
- 37. STANDARDNI PROTOKOL 1. Stabilizacija krvne 転ile 2. Inicijalni prekontrakcijski test 3. Test intaktnosti endotela 4. Ispitivanje vazoaktivne tveri
- 38. 1. Stabilizacija krvne 転ile (60 min) Krvna 転ila se prenapregne za 20 mN U vi邸e navrata napetosti krvne 転ile se ispravlja na 20 mN (ili 0 mN ako sustav bazino pode邸en na 20 mN) Tijekom tog perioda bazenii se ispiru 3-4puta (cca. svakih 15 min)
- 39. 2. Inicijalni prekontrakcijski test 400亮L 3M KCl (60 mM) Ispiranje Ispiranje Ispiranje 4 min 1 min 1 min 1 min 3 x
- 40. 3. Testiranje intaktnosti endotela 100亮L 1000x razr. 20 mM NORADRENALINA (10-7M) 100亮L 100x razr. 20 mM ACETILKOLINA (10-6M) Ispiranje4 min 1 min 1 min Ispiranje Ispiranje 4 min
- 41. 4. Testiranje vazoaktivne tvari 100亮L 1000x razr. 20 mM NORADRENALINA (10-7M) VAZODILATATOR u razliitim dozama 4 min
- 43. OBRADA PODATAKA Formule za izraun % vazodilatacije...
- 44. X0 Xmax X3 % Vazodilatacije = Xmax X3 Xmax X0 % Preostale kontrakcije = X3 X0 Xmax X0
- 45. POKUS Primjer pokusa: Uinci hiperbarine terapije na konduktivne krvne 転ile DM 邸takora
- 46. 24 邸takora 12 Ctrl. (kontrola) 12 DM (diabetikih tretirani s STZ) 6 Ctrl. 6 Ctrl. + Citrat 6 DM 6 DM + HBOT L-NAME Klotrimazol 1. 2. Ctrl. + HBOT
- 47. Skupina GUK (mmol/l) Te転ina (g) Sustav na kojem se radilo Opaske Oznake prstenova A - Kontrola Citrat (okot 10.08.2009., TH: 09.09.2009, m 90. g) A1a 9,7 310 I. Aorta bila skvrena i kontrahirana A1a 1-4 A1b 9,7 320 II. A1b 1-4 A1c 9,7 305 I. Aorta bila skvrena i kontrahirana A1c 1-4 A2a 11,3 310 I. A2a 1-4 A2b 10 290 II. Problemi tijekom pokusa - 転ila bila du転e na suhom jer sust. nije bio spreman A2b 1-4 A2c Falilo trakica 300 II. A2c 1-4 B - Kontrola netretirana (okot 12.08.2009.) B1a 9,3 360 I. B1a 1-4 B1b 8,6 320 II. B1b 1-4 B1c 10,9 305 I. B1c 1-4 B2a 9,5 350 I. Serum odmrzavan zajedno s A2a, A2b i B2b - da Danijeli ostavim 0,5 ml za Oksi.kapac. B2a 1-4 B2b 10,7 285 II. Serum mogue razrijeen kod odmrzavanja B2b 1-4 B2c 10,3 280 I. B2c 1-4 C - Dijabetiari + HBTh (okot 25.07.2009., TH: 09.09.2009, m 90. g) C1a > 33 250 I. C1a 1-4 C1b > 33 285 II. C1b 1-4 C1c 8 290 II. C1c 1-4 C2a > 33 225 I. C2a 1-4 C2b > 33 250 II. C2b 1-4 C2c > 33 225 II. C2c 1-4 D - Dijabetiari netretirani (okot 01.08.2009., TH: 09.09.2009, m 90. g) D1a > 33 250 I. D1a 1-4 D1b 7,8 320 II. D1b 1-4 D1c > 33 210 II. D1c 1-4 D2a > 33 200 I. D2a 1-4 D2b > 33 170 II. D2b 1-4 D2c 10,2 300 I. Kod odvajanja serum bijel + bijeli ugru邸ak D2c 1-4 Nisu razvili dijabetes
- 48. Inicijalni prekontrakcijski test 400亮L 3M KCl (60 mM) Ispiranje Ispiranje Ispiranje 4 min 1 min 1 min 1 min 3 x
- 50. A: kontr. C: diabet. + HBTh 10 min
- 51. A: kontr. C: diabet. + HBTh
- 52. Vazodilatacija posredovana s Ach
- 53. Ach 10 min. nakon L-NAME
- 54. Ach 10 min. nakon klotrimazola