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Dna finger print
- 1. S Creato da: Di Iorio Sasha Falcone Dennis Cichella Carlo Alberto Frisoli Francesco Pennese Davide D'angelo Nunzio Petrilli Francesco
- 2. Il polimorfismo di lunghezza di frammento di restrizione (RFLP) 竪 una tecnica inventata nel 1984 dallo scienziato inglese Alec Jeffreys durante la ricerca sulle malattie ereditarie. utilizzato per l'analisi dei reticoli unici nelle sequenze di DNA per geneticamente differenziarsi fra gli organismi. Il polimorfismo genetico 竪 definito come le differenze genetiche ereditate fra le persone dentro pi湛 di 1% di popolazione normale. La tecnica del RFLP sfrutta queste differenze nelle sequenze del DNA per riconoscere e studiare sia la variazione intraspecies che interspecies.
- 4. ESTRAZIONE DEL DNA: Per cominciare con, il DNA 竪 estratto da sangue, dalla saliva o da altri campioni ed 竪 depurato. FRAMMENTAZIONE DEL DNA: Il DNA si digerisce facendo uso degli enzimi di restrizione. I siti di riconoscimento di questi enzimi sono generalmente 4 - 6 coppie di basi. Pi湛 breve la sequenza riconosciuta, maggior il numero dei frammenti generati da digestione. SEPARAZIONE TRAMITE FORESI VISUALIZZAZIONE DELLE BANDE: Il gel 竪 trattato con le tinture luminescenti per rendere le bande del DNA visibili.
- 5. I microsatelliti o STR (Short Tandem Repeat) Ripetizioni in tandem di brevi (2-5 bp) tratti nucleotidici (repeat) Il polimorfismo consiste nel diverso numero di copie della repeat (= alleli diversi hanno lunghezza diversa) Il numero degli alleli 竪 generalmente elevato (talvolta molto elevato) Sono uniformemente distribuiti in tutto il genoma, nei primati rappresentano ca. l1% del genoma.
- 6. Piccola curiosit: Il microsatellite pi湛 frequente nelluomo 竪 la sequenza dinucleotidica citosina-adenina (CA) ripetuta da 5 a 50 volte consecutive; le ripetizioni sono presenti in media ogni 10.000 basi circa. In genere il m. CA fiancheggia sequenze di DNA presenti una sola volta nel genoma, dette sequenze uniche. Hanno la funzione di marcatori del genoma identificabili mediante analisi molecolari. Per es., quando 竪 presente una malattia ereditaria, si possono identificare negli individui affetti alcuni marcatori molecolari che vengono ereditati insieme al gene mutato responsabile della malattia, per poi localizzare il gene sul cromosoma e procedere al suo sequenziamento; Analisi di paterit: grazie ai microsatelliti possiamo escludere con certezza la paternit di un individuo.
- 7. Il DNA fingerprinting 1. Estrazione del DNA 2. Digestione con enzimi di restrizione e separazione dei frammenti tramite elettroforesi 3. Denaturazione e trasferimento su membrana 4. Ibridazione con una sonda multi-locus marcata con radioattivo 5. Autoradiografia per rilevare i frammenti a cui si 竪 legata la sonda
- 9. Paternit e maternit; Medicina forense; Identificazione personale: E stata presa in considerazione la possibilit di utilizzare i DNA fingerprints come una sorta di codice a barre per identificare gli individui. Lapplicazione di questa tecnica su larga scala nellimmediato futuro 竪 in corso di valutazione;
- 10. Potere di discriminazione elevato Sensibilit limitata (richiede grandi quantit di DNA mg, cio竪 ca. 106 cellule) Tecnica lunga e non automatizzabile Analizza DNA a elevato peso molecolare: non adatto per campioni degradati Pattern multi-bande di non facile interpretazione (base molecolare del polimorfismo non nota) Problemi per linterpretazione statistica (una corrispondenza che valore statistico, e quindi probatorio, ha?)
Editor's Notes
- #3: e i prodotti ottenuti vengono incubati con un enzima di restrizione in grado di riconoscere una sequenza specifica e di catalizzare una reazione di taglio al suo interno
- #5: Per esempio, se c'竪 una breve sequenza di GAGC che si presenta ripetutamente in un campione di DNA. L'endonucleasi della restrizione che riconosce la sequenza di GAGC taglia il DNA ad ogni ripetizione del reticolo di GAGC. Se un campione ripete la sequenza di GAGC 4 volte mentre un altro campione la ripete 2 volte, la lunghezza dei frammenti generati dall'enzima per i due campioni sar differente.