ݺߣ

ݺߣShare a Scribd company logo

УМОВИ ВИЯВЛЕННЯ ТА ВИЗНАЧЕННЯ ТРАМАДОЛУ В КРОВI МЕТОДОМ ВИСОКОЕФЕКТИВНОI РIДИННОI ХРОМАТОГРАФII В ПРИСУТНОСТI НПЗП

•Download as PPT, PDF•
•
Dmytro Horilyk
Dmytro Horilyk
1 of 15
Download to read offline
Львівський національний медичний університет імені Данила Галицького Кафедра аналітичної та токсикологічної хімії УМОВИ ВИЯВЛЕННЯ ТА ВИЗНАЧЕННЯ ТРАМАДОЛУ В КРОВІ МЕТОДОМ ВИСОКОЕФЕКТИВНОЇ РІДИННОЇ ХРОМАТОГРАФІЇ В ПРИСУТНОСТІ НПЗП • Виконала: Ігліцька Софія • Науковий керівник: Галькевич Ірина Йосипівна.
Актуальність  Трамадол відноситься до фармакологічної групи опіоїдних анальгетиків із змішаним механізмом дії. В хімічному відношенні це (транс-(±)-2-[(Диметиламіно)метил]-1-(3- метоксифеніл)циклогексанолу гідрохлорид.  Трамадол – 4-ий найбільш часто призначуваний анальгетик у світі – використовується для лікування як онкологічного, так і неонкологічного болю в 70 країнах світу.
Частота застосування трамадолу в фармакотерапії болю (%). 8,2 5,4 4,2 4,1 3,8 4 9,6 15,9 0 10 20 44,8 30 40 50 м'язово-кісткові захворювання Онкологія Травматологія Нейрогенний біль Коліки Інше Післяопераційний період Васкуліти Мігрень
Найбільш часто використовувані комбінації трамадол + НПЗП
Мета роботи: Розробка методики якісного та кількісного визначення трамадолу в крові в присутності деяких нестероїдних протизапальних засобів, які найчастіше застосовуються в медичній практиці методом високоефективної рідинної хроматографії.
Готування модельних проб крові Модельні проби готували наступним чином: в 5 мл крові вносили стандартний розчин відповідного препарату у фосфатному буферному розчині з рН 7,4 проби струшували до повної гомогенізації. Концентрація кожного із препаратів становила 10 мкг в розрахунку на 1 мл крові.
Схема ізолювання трамадолу та НПЗП з крові.  В досліджувані проби крові вносили по 1 мг натрію хлориду, 2,5 мл боратного буферного розчину (рН 9,0) і 15 мл суміші гексан/ізоаміловий спирт (99:1).  Суміш струшували протягом 30 хвилин після чого центрифугували (10 хв. при 5000 об/хв).  Органічну фазу відокремлювали і випаровували в потоці азоту при кімнатній температурі.  Сухий залишок розчиняли в 500 мкл ацетонітрилу і використовували для аналізу методом високоефективної рідинної хроматографії.
Ефективність методики ізолювання (ступінь екстракції в %) трамадолу та НПЗП з крові. 100 89 90 85 78 83 81 80 68 71 60 40 20 0 Трамадол 89 90 Целекоксиб 78 81 Мелоксикам 83 85 Диклофенак 68 71
Ізолювання трамадолу та НПЗП з модельних сумішей.  Готували проби крові з вмістом трамадолу і перечислених вище нестероїдних препаратів в межах концентрацій від 50 до 500 нг/мл , тобто створювали терапевтичний інтервал концентрацій. Очищення шляхом додавання 1 мг натрію хлориду Екстракція сумішшю гексану з ізоаміловим спиртом Випаровування органічної фази в потоці азоту, а сухі залишки використовувались для дослідження.  Дослідження проб, отриманих із біологічного матеріалу проводили на високоефективному рідинному хроматографі Аgilent 1100 Series.
Умови аналізу ВЕРХ  Колонка Zorbax SВ-С18, розмір частинок сорбенту 1.8 мкм, а самої колонки 4.6x15мм.  Градієнтний режим подачі рухомої фази.  Розчинники: суміш ацетонітрилу та води (95:5) та розчин фосфатної кислоти.  В склад рухомої фази вводили фосфатну кислоту в діапазоні концентрацій від 0,5 М до 1,7 М розчину .  Швидкість рухомої фази 3 мл/хв, об'єм введеної проби 10 мкл.  Детекцію проводили при 215 нм, застосовуючи УФ-детектор.
Вплив фосфатної кислоти на ефективність розділення хроматографічних піків. При використанні 0,5 М розчину фосфатної кислоти коефіцієнт розділення піків становить 0,25-0,5. Із збільшенням концентрації фосфатної кислоти в складі рухомої фази (0,75 М; 1 М; 1,25 М; 1,5 М та 1,7 М) покращується роздільна здатність колонки та зростає час аналізу. Найоптимальніше розділення (коефіцієнт розділення > 2 ) спостерігається при концентрації фосфатної кислоти 1,25 М.
Характер хроматограми суміші трамадолу та НПЗП 1 – диклофенак натрію 3 – мелоксикам 2 – трамадол 4 - целекоксиб
Ідентифікацію досліджуваних препаратів проводили за часом утримування Сполука Лікарський засіб Час утримування, tR, хв 1 Диклофенак натрію 9,56 2 Трамадол 12,09 3 Мелоксикам 12,58 4 Целекоксиб 20,60
Висновки  Опрацьовані умови ідентифікації та кількісного визначення трамадолу в крові в присутності НПЗП (мелоксикаму, целекоксибу та диклофенаку) методом ВЕРХ.  Встановлено оптимальну концентрацію фосфатної кислоти в складі рухомої фази для кращого розділення хроматографічних піків.  Найменші кількості препаратів, які визначили в крові, знаходяться в межах від 15 до 500 нг в 1 мл крові, що відповідає їх терапевтичним концентраціям.
УМОВИ ВИЯВЛЕННЯ ТА ВИЗНАЧЕННЯ ТРАМАДОЛУ В КРОВI МЕТОДОМ ВИСОКОЕФЕКТИВНОI РIДИННОI ХРОМАТОГРАФII В ПРИСУТНОСТI НПЗП

More Related Content

УМОВИ ВИЯВЛЕННЯ ТА ВИЗНАЧЕННЯ ТРАМАДОЛУ В КРОВI МЕТОДОМ ВИСОКОЕФЕКТИВНОI РIДИННОI ХРОМАТОГРАФII В ПРИСУТНОСТI НПЗП

  • 1. Львівський національний медичний університет імені Данила Галицького Кафедра аналітичної та токсикологічної хімії УМОВИ ВИЯВЛЕННЯ ТА ВИЗНАЧЕННЯ ТРАМАДОЛУ В КРОВІ МЕТОДОМ ВИСОКОЕФЕКТИВНОЇ РІДИННОЇ ХРОМАТОГРАФІЇ В ПРИСУТНОСТІ НПЗП • Виконала: Ігліцька Софія • Науковий керівник: Галькевич Ірина Йосипівна.
  • 2. Актуальність  Трамадол відноситься до фармакологічної групи опіоїдних анальгетиків із змішаним механізмом дії. В хімічному відношенні це (транс-(±)-2-[(Диметиламіно)метил]-1-(3- метоксифеніл)циклогексанолу гідрохлорид.  Трамадол – 4-ий найбільш часто призначуваний анальгетик у світі – використовується для лікування як онкологічного, так і неонкологічного болю в 70 країнах світу.
  • 3. Частота застосування трамадолу в фармакотерапії болю (%). 8,2 5,4 4,2 4,1 3,8 4 9,6 15,9 0 10 20 44,8 30 40 50 м'язово-кісткові захворювання Онкологія Травматологія Нейрогенний біль Коліки Інше Післяопераційний період Васкуліти Мігрень
  • 5. Мета роботи: Розробка методики якісного та кількісного визначення трамадолу в крові в присутності деяких нестероїдних протизапальних засобів, які найчастіше застосовуються в медичній практиці методом високоефективної рідинної хроматографії.
  • 6. Готування модельних проб крові Модельні проби готували наступним чином: в 5 мл крові вносили стандартний розчин відповідного препарату у фосфатному буферному розчині з рН 7,4 проби струшували до повної гомогенізації. Концентрація кожного із препаратів становила 10 мкг в розрахунку на 1 мл крові.
  • 7. Схема ізолювання трамадолу та НПЗП з крові.  В досліджувані проби крові вносили по 1 мг натрію хлориду, 2,5 мл боратного буферного розчину (рН 9,0) і 15 мл суміші гексан/ізоаміловий спирт (99:1).  Суміш струшували протягом 30 хвилин після чого центрифугували (10 хв. при 5000 об/хв).  Органічну фазу відокремлювали і випаровували в потоці азоту при кімнатній температурі.  Сухий залишок розчиняли в 500 мкл ацетонітрилу і використовували для аналізу методом високоефективної рідинної хроматографії.
  • 8. Ефективність методики ізолювання (ступінь екстракції в %) трамадолу та НПЗП з крові. 100 89 90 85 78 83 81 80 68 71 60 40 20 0 Трамадол 89 90 Целекоксиб 78 81 Мелоксикам 83 85 Диклофенак 68 71
  • 9. Ізолювання трамадолу та НПЗП з модельних сумішей.  Готували проби крові з вмістом трамадолу і перечислених вище нестероїдних препаратів в межах концентрацій від 50 до 500 нг/мл , тобто створювали терапевтичний інтервал концентрацій. Очищення шляхом додавання 1 мг натрію хлориду Екстракція сумішшю гексану з ізоаміловим спиртом Випаровування органічної фази в потоці азоту, а сухі залишки використовувались для дослідження.  Дослідження проб, отриманих із біологічного матеріалу проводили на високоефективному рідинному хроматографі Аgilent 1100 Series.
  • 10. Умови аналізу ВЕРХ  Колонка Zorbax SВ-С18, розмір частинок сорбенту 1.8 мкм, а самої колонки 4.6x15мм.  Градієнтний режим подачі рухомої фази.  Розчинники: суміш ацетонітрилу та води (95:5) та розчин фосфатної кислоти.  В склад рухомої фази вводили фосфатну кислоту в діапазоні концентрацій від 0,5 М до 1,7 М розчину .  Швидкість рухомої фази 3 мл/хв, об'єм введеної проби 10 мкл.  Детекцію проводили при 215 нм, застосовуючи УФ-детектор.
  • 11. Вплив фосфатної кислоти на ефективність розділення хроматографічних піків. При використанні 0,5 М розчину фосфатної кислоти коефіцієнт розділення піків становить 0,25-0,5. Із збільшенням концентрації фосфатної кислоти в складі рухомої фази (0,75 М; 1 М; 1,25 М; 1,5 М та 1,7 М) покращується роздільна здатність колонки та зростає час аналізу. Найоптимальніше розділення (коефіцієнт розділення > 2 ) спостерігається при концентрації фосфатної кислоти 1,25 М.
  • 12. Характер хроматограми суміші трамадолу та НПЗП 1 – диклофенак натрію 3 – мелоксикам 2 – трамадол 4 - целекоксиб
  • 13. Ідентифікацію досліджуваних препаратів проводили за часом утримування Сполука Лікарський засіб Час утримування, tR, хв 1 Диклофенак натрію 9,56 2 Трамадол 12,09 3 Мелоксикам 12,58 4 Целекоксиб 20,60
  • 14. Висновки  Опрацьовані умови ідентифікації та кількісного визначення трамадолу в крові в присутності НПЗП (мелоксикаму, целекоксибу та диклофенаку) методом ВЕРХ.  Встановлено оптимальну концентрацію фосфатної кислоти в складі рухомої фази для кращого розділення хроматографічних піків.  Найменші кількості препаратів, які визначили в крові, знаходяться в межах від 15 до 500 нг в 1 мл крові, що відповідає їх терапевтичним концентраціям.