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Capitolo 14
                    Mappe genetiche
                     negli eucarioti




http://web.unife.it/progetti/genetica/Guido/index.php?lng=it&p=4




          Peter J Russell, Genetica 息 2010 Pearson Italia S.p.A
Domande 14
 Che conseguenze sulla trasmissione degli alleli ha il
  fatto che i geni (loci) sono tanti, stanno sui
  cromosomi, e i cromosomi sono pochi?
 Che conseguenze genetiche hanno gli scambi fra
  cromosomi omologhi alla meiosi?
 Con che frequenza avvengono questi scambi?
 Queste frequenze ci dicono qualcosa sulla posizione
  reciproca dei loci sul cromosoma?

    Incrocio a tre punti
Trasmissione congiunta di alleli sul cromosoma X (Morgan 1911)




              E come un reincrocio




Figura 14.1

                   Peter J Russell, Genetica 息 2010 Pearson Italia S.p.A
E quindi:
Se prevalgono nella F2 i fenotipi parentali, la trasmissione
dei due geni non 竪 indipendente: geni associati sul
cromosoma

Se compaiono nella F2 fenotipi non parentali,
lassociazione dei geni sul cromosoma non 竪 completa, e
gli alleli possono essere riassortiti da fenomeni di
ricombinazione
Come indicare alleli associati


                            A      B

                         a+ b          a b
                         a b+          a+ b+
Disposizione degli alleli: trans    cis
                      (repulsion) (coupling)

La posizione occupata da un allele di un certo gene sul
cromosoma si chiama locus, e si indica in genere con la
lettera maiuscola
Cromosomi (e fenotipi)
       parentali e ricombinanti
            A    a           a    a
                      X
            b    B           b    b




Combinazioni di alleli nella progenie:
Ab, aB = parentali      AB, ab = ricombinanti
Esperimento di Barbara McClintock
          (1931) in Zea mais

 C: seme colorato,
 c: non colorato
 Wx: amido normale,
 wx: amido waxy


Anche: carnation, Bar in
Drosophila
Esperimento di Stern:
                                         Relazione fra scambio di
                                         materiale cromosomico e
                                         ricombinazione genetica in
                                         Drosophila




Figura 14.2

              Peter J Russell, Genetica 息 2010 Pearson Italia S.p.A
Il mezzo ideale per studiare
      associazione e ricombinazione
      竪 il reincrocio




Figura 14.3

                    Peter J Russell, Genetica 息 2010 Pearson Italia S.p.A
Reincrocio
Aa Bb X aa bb

Frequenze fenotipiche: AB Ab    aB ab TOT
Osservate              78 122   118 82 400
Attese                100 100   100 100 400

                  Difetto   Eccesso Difetto
Reincrocio
 Aa Bb X aa bb

 Frequenze fenotipiche: AB Ab        aB ab TOT
 Osservate              78 122       118 82 400
 Attese                100 100       100 100 400

 I fenotipi Ab e aB sono presenti in frequenze superiori
 allattesa
 Perci嘆 Ab e aB sono i fenotipi parentali:
      A     b                  A      B

     a    B                     a     b
La distanza fra locus A e locus B 竪 d = NR / NT =
=(78+82)/400 = 0,4 e cio竪 40 cM
Se tutti i cromosomi subiscono crossing-over alla
 meiosi, la frequenza di ricombinazione 竪 del 50%
Cio竪 la stessa frequenza che si osserva se i geni sono indipendenti




   La frequenza di ricombinazione 竪 met della frequenza
                       di crossing over
Mappe genetiche

Se il crossing over si verifica in punti casuali del cromosoma,
la ricombinazione sar pi湛 frequente fra loci distanti e meno
fra loci vicini
            A    B                           C




      bassa probabilit    alta probabilit
      di crossing over     di crossing over

La percentuale di ricombinanti pu嘆 essere utilizzata per
quantificare la distanza fra loci associati:
1 Morgan (1 M) = 100% di ricombinazione
1 centiMorgan (1 cM) = 1% di ricombinazione
Costruzione di mappe genetiche 1




                    b   ci                 B       Ci
                    b   ci             x   b         ci


         B     Ci       b         ci       B           ci   b        Ci

         nero,          grigio,                nero,             grigio,
b   ci
         cinabro        rosso                  rosso            cinabro

         430            419                     40                 44

         TOT=933
Costruzione di mappe genetiche 2

nero,         grigio,      nero,       grigio,
cinabro       rosso        rosso       cinabro

 430           419          40            44     TOT=933


d = NR / (NP + NR) dB-Ci = 84 / 933 = 0.09
   9 cM (centiMorgan) o 9 um (unit di mappa)
Si pu嘆 studiare, con lo stesso
                                      metodo, anche lassociazione
                                      fra fenotipi e marcatori del DNA




Figura box 14.1

                  Peter J Russell, Genetica 息 2010 Pearson Italia S.p.A
Figura box 14.2

                  Peter J Russell, Genetica 息 2010 Pearson Italia S.p.A
Incrocio a tre punti
Tre caratteri in Drosophila




                                Vermillion (v)

Crossveinless (cv)




                     Cut (ct)
Incrocio a tre punti
v v cv cv ct ct X v+ v+ cv+ cv+ ct+ ct+
Starting with the v and cv loci, we see that the recombinants are of
genotype v 揃 cv and v+ 揃 cv+ and that there are 45 + 40 + 89 + 94 = 268 of
these recombinants. Of a total of 1448 flies, this number gives an RF of
18.5 percent.
For the v and ct loci, the recombinants are v 揃 ct and v+ 揃 ct+. There are
89 + 94 + 3 + 5 = 191 of these recombinants among 1448 flies, so RF =
13.2 percent.




           Lincrocio pu嘆 essere riscritto come
           v+ct cv / v ct+cv+  v ct cv / v ct cv.
Figura 14.5

              Peter J Russell, Genetica 息 2010 Pearson Italia S.p.A
Ci vogliono due crossing-over per spostare lallele del
              locus intermedio dal cromosoma originario




Figura 14.6

                       Peter J Russell, Genetica 息 2010 Pearson Italia S.p.A
Figura 14.7

              Peter J Russell, Genetica 息 2010 Pearson Italia S.p.A
Figura 14.8

              Peter J Russell, Genetica 息 2010 Pearson Italia S.p.A
Le distanze stimate fra loci vicini sono pi湛 accurate di
            quelle stimate fra loci lontani perch辿 竪 minore la
                   probabilit di doppio crossing-over




Figura 14.9

                        Peter J Russell, Genetica 息 2010 Pearson Italia S.p.A
Correzione di Haldane per leffetto di crossing-over multipli




Figura 14.10

                       Peter J Russell, Genetica 息 2010 Pearson Italia S.p.A
Interferenza


Se i crossing over, CO, fossero indipendenti:
P(doppio CO) = P(CO v-ct) x P(CO ct-cv) =
       = 0.132 x 0.064 = 0.0084

Doppi crossing over attesi, DCA = 1448 x 0.0084 = 12
Doppi crossing over osservati, DCO = 8

 cc = coeff. di coincidenza = DCO/DCA = 0.67
 I = interferenza = 1  cc = 0.33
Il fenomeno citologico alla base della ricombinazione 竪
il crossing-over
Meccanismo della ricombinazione
(Modello di Holliday, rottura ad elica singola)
Meccanismo della ricombinazione
(Modello di Holliday,rottura ad elica singola)




                         Eteroduplex: appaiamento
                         temporaneo di eliche non
                         complementari
Meccanismo della ricombinazione
(Modello di Holliday,rottura ad elica singola)
Lintervento dellendonucleasi
pu嘆 portare o non portare al
crossing-over
Holliday-junction al microscopio elettronico
Meccanismo della
   ricombinazione
(Modello di Holliday,
      risoluzioni
      alternative
  delleteroduplex)
Meccanismo della
    ricombinazione
 (Modello di Holliday,
  conseguenze delle
risoluzioni alternative)
Macchie gemelle in Drosophila (Stern)




           In femmine y+ sn / y sn+
Macchie gemelle




Frequenza troppo alta per essere dovute a doppia mutazione
Macchie gemelle
Crossing-over
   mitotico
Una risorsa online:
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/mapview/map_search.cgi?taxid=9606
Mappa del Cromosoma 21
Una risorsa online:
http://www.ornl.gov/sci/techresources/Human_Genome/posters/chromosome/chooser.shtml
Mappa del Cromosoma 20
Mappa del Cromosoma Y
Sintesi 14
 La concatenazione dei geni, cio竪 la presenza di pi湛 geni sullo
  stesso cromosoma, fa s狸 che la loro trasmissione non sia
  indipendente
 Lassociazione degli alleli sullo stesso cromosoma 竪 modificata
  dal fenomeno (genetico) della ricombinazione, a cui corrisponde
  il fenomeno citologico del crossing-over
 La probabilit di ricombinazione 竪 proporzionale alla distanza fra
  loci sul cromosoma; si pu嘆 stimare la seconda sulla base della
  prima: mappe genetiche
 Un metodo classico per mappare i geni negli Eucarioti 竪
  lincrocio a tre punti
 Il modello di Holliday descrive il meccanismo molecolare della
  ricombinazione
 Molto raramente, il crossing-over pu嘆 avvenire anche durante la
  mitosi
 Col sequenziamento dei genomi si 竪 arrivati a produrre mappe
  genetiche molto dettagliate

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14 mappe genetiche eucarioti

  • 1. Capitolo 14 Mappe genetiche negli eucarioti http://web.unife.it/progetti/genetica/Guido/index.php?lng=it&p=4 Peter J Russell, Genetica 息 2010 Pearson Italia S.p.A
  • 2. Domande 14 Che conseguenze sulla trasmissione degli alleli ha il fatto che i geni (loci) sono tanti, stanno sui cromosomi, e i cromosomi sono pochi? Che conseguenze genetiche hanno gli scambi fra cromosomi omologhi alla meiosi? Con che frequenza avvengono questi scambi? Queste frequenze ci dicono qualcosa sulla posizione reciproca dei loci sul cromosoma? Incrocio a tre punti
  • 3. Trasmissione congiunta di alleli sul cromosoma X (Morgan 1911) E come un reincrocio Figura 14.1 Peter J Russell, Genetica 息 2010 Pearson Italia S.p.A
  • 4. E quindi: Se prevalgono nella F2 i fenotipi parentali, la trasmissione dei due geni non 竪 indipendente: geni associati sul cromosoma Se compaiono nella F2 fenotipi non parentali, lassociazione dei geni sul cromosoma non 竪 completa, e gli alleli possono essere riassortiti da fenomeni di ricombinazione
  • 5. Come indicare alleli associati A B a+ b a b a b+ a+ b+ Disposizione degli alleli: trans cis (repulsion) (coupling) La posizione occupata da un allele di un certo gene sul cromosoma si chiama locus, e si indica in genere con la lettera maiuscola
  • 6. Cromosomi (e fenotipi) parentali e ricombinanti A a a a X b B b b Combinazioni di alleli nella progenie: Ab, aB = parentali AB, ab = ricombinanti
  • 7. Esperimento di Barbara McClintock (1931) in Zea mais C: seme colorato, c: non colorato Wx: amido normale, wx: amido waxy Anche: carnation, Bar in Drosophila
  • 8. Esperimento di Stern: Relazione fra scambio di materiale cromosomico e ricombinazione genetica in Drosophila Figura 14.2 Peter J Russell, Genetica 息 2010 Pearson Italia S.p.A
  • 9. Il mezzo ideale per studiare associazione e ricombinazione 竪 il reincrocio Figura 14.3 Peter J Russell, Genetica 息 2010 Pearson Italia S.p.A
  • 10. Reincrocio Aa Bb X aa bb Frequenze fenotipiche: AB Ab aB ab TOT Osservate 78 122 118 82 400 Attese 100 100 100 100 400 Difetto Eccesso Difetto
  • 11. Reincrocio Aa Bb X aa bb Frequenze fenotipiche: AB Ab aB ab TOT Osservate 78 122 118 82 400 Attese 100 100 100 100 400 I fenotipi Ab e aB sono presenti in frequenze superiori allattesa Perci嘆 Ab e aB sono i fenotipi parentali: A b A B a B a b La distanza fra locus A e locus B 竪 d = NR / NT = =(78+82)/400 = 0,4 e cio竪 40 cM
  • 12. Se tutti i cromosomi subiscono crossing-over alla meiosi, la frequenza di ricombinazione 竪 del 50% Cio竪 la stessa frequenza che si osserva se i geni sono indipendenti La frequenza di ricombinazione 竪 met della frequenza di crossing over
  • 13. Mappe genetiche Se il crossing over si verifica in punti casuali del cromosoma, la ricombinazione sar pi湛 frequente fra loci distanti e meno fra loci vicini A B C bassa probabilit alta probabilit di crossing over di crossing over La percentuale di ricombinanti pu嘆 essere utilizzata per quantificare la distanza fra loci associati: 1 Morgan (1 M) = 100% di ricombinazione 1 centiMorgan (1 cM) = 1% di ricombinazione
  • 14. Costruzione di mappe genetiche 1 b ci B Ci b ci x b ci B Ci b ci B ci b Ci nero, grigio, nero, grigio, b ci cinabro rosso rosso cinabro 430 419 40 44 TOT=933
  • 15. Costruzione di mappe genetiche 2 nero, grigio, nero, grigio, cinabro rosso rosso cinabro 430 419 40 44 TOT=933 d = NR / (NP + NR) dB-Ci = 84 / 933 = 0.09 9 cM (centiMorgan) o 9 um (unit di mappa)
  • 16. Si pu嘆 studiare, con lo stesso metodo, anche lassociazione fra fenotipi e marcatori del DNA Figura box 14.1 Peter J Russell, Genetica 息 2010 Pearson Italia S.p.A
  • 17. Figura box 14.2 Peter J Russell, Genetica 息 2010 Pearson Italia S.p.A
  • 18. Incrocio a tre punti
  • 19. Tre caratteri in Drosophila Vermillion (v) Crossveinless (cv) Cut (ct)
  • 20. Incrocio a tre punti v v cv cv ct ct X v+ v+ cv+ cv+ ct+ ct+
  • 21. Starting with the v and cv loci, we see that the recombinants are of genotype v 揃 cv and v+ 揃 cv+ and that there are 45 + 40 + 89 + 94 = 268 of these recombinants. Of a total of 1448 flies, this number gives an RF of 18.5 percent. For the v and ct loci, the recombinants are v 揃 ct and v+ 揃 ct+. There are 89 + 94 + 3 + 5 = 191 of these recombinants among 1448 flies, so RF = 13.2 percent. Lincrocio pu嘆 essere riscritto come v+ct cv / v ct+cv+ v ct cv / v ct cv.
  • 22. Figura 14.5 Peter J Russell, Genetica 息 2010 Pearson Italia S.p.A
  • 23. Ci vogliono due crossing-over per spostare lallele del locus intermedio dal cromosoma originario Figura 14.6 Peter J Russell, Genetica 息 2010 Pearson Italia S.p.A
  • 24. Figura 14.7 Peter J Russell, Genetica 息 2010 Pearson Italia S.p.A
  • 25. Figura 14.8 Peter J Russell, Genetica 息 2010 Pearson Italia S.p.A
  • 26. Le distanze stimate fra loci vicini sono pi湛 accurate di quelle stimate fra loci lontani perch辿 竪 minore la probabilit di doppio crossing-over Figura 14.9 Peter J Russell, Genetica 息 2010 Pearson Italia S.p.A
  • 27. Correzione di Haldane per leffetto di crossing-over multipli Figura 14.10 Peter J Russell, Genetica 息 2010 Pearson Italia S.p.A
  • 28. Interferenza Se i crossing over, CO, fossero indipendenti: P(doppio CO) = P(CO v-ct) x P(CO ct-cv) = = 0.132 x 0.064 = 0.0084 Doppi crossing over attesi, DCA = 1448 x 0.0084 = 12 Doppi crossing over osservati, DCO = 8 cc = coeff. di coincidenza = DCO/DCA = 0.67 I = interferenza = 1 cc = 0.33
  • 29. Il fenomeno citologico alla base della ricombinazione 竪 il crossing-over
  • 30. Meccanismo della ricombinazione (Modello di Holliday, rottura ad elica singola)
  • 31. Meccanismo della ricombinazione (Modello di Holliday,rottura ad elica singola) Eteroduplex: appaiamento temporaneo di eliche non complementari
  • 32. Meccanismo della ricombinazione (Modello di Holliday,rottura ad elica singola)
  • 33. Lintervento dellendonucleasi pu嘆 portare o non portare al crossing-over
  • 35. Meccanismo della ricombinazione (Modello di Holliday, risoluzioni alternative delleteroduplex)
  • 36. Meccanismo della ricombinazione (Modello di Holliday, conseguenze delle risoluzioni alternative)
  • 37. Macchie gemelle in Drosophila (Stern) In femmine y+ sn / y sn+
  • 38. Macchie gemelle Frequenza troppo alta per essere dovute a doppia mutazione
  • 40. Crossing-over mitotico
  • 46. Sintesi 14 La concatenazione dei geni, cio竪 la presenza di pi湛 geni sullo stesso cromosoma, fa s狸 che la loro trasmissione non sia indipendente Lassociazione degli alleli sullo stesso cromosoma 竪 modificata dal fenomeno (genetico) della ricombinazione, a cui corrisponde il fenomeno citologico del crossing-over La probabilit di ricombinazione 竪 proporzionale alla distanza fra loci sul cromosoma; si pu嘆 stimare la seconda sulla base della prima: mappe genetiche Un metodo classico per mappare i geni negli Eucarioti 竪 lincrocio a tre punti Il modello di Holliday descrive il meccanismo molecolare della ricombinazione Molto raramente, il crossing-over pu嘆 avvenire anche durante la mitosi Col sequenziamento dei genomi si 竪 arrivati a produrre mappe genetiche molto dettagliate